Micronización mecánica de Lipoaspirates para la terapia regenerativa

Resumen

Aquí, presentamos un protocolo para obtener la fracción vascular estromal de tejido adiposo a través de una serie de procesos mecánicos, que incluyen múltiples centrifugados y emulsificación.

Resumen

Fracción vascular estromal (SVF) se ha convertido en una herramienta regenerativa para varias enfermedades; sin embargo, la legislación regula estrictamente la aplicación clínica de células usando colagenasa. Aquí, presentamos un protocolo para generar una mezcla inyectable de SVF células y matriz extracelular nativa del tejido adiposo mediante un proceso puramente mecánico. Lipoaspirates se pone en una centrífuga y rota a 1.200 x g durante 3 minutos. La capa media se recoge y se separa en dos capas (alta densidad grasa en la parte inferior) y baja densidad grasa en la parte superior. La capa superior se emulsiona directamente cambiando de intersyringe, a un ritmo de 20 mL/s de 6 x a 8 x. La grasa emulsionada se centrifuga a 2.000 x g durante 3 min, y la sustancia pegajosa en la capa de aceite se recoge y se define como la matriz extracelular (ECM) / gel de SVF. Se recoge el aceite en la capa superior. Aproximadamente 5 mL de aceite se añade a 15 mL de grasa de alta densidad y emulsionado cambiando de intersyringe, a un ritmo de 20 mL/s de 6 x a 8 x. La grasa emulsionada se centrifuga a 2.000 x g durante 3 min, y la sustancia pegajosa es SVF/ECM-gel. Después del trasplante del ECM o SVF-gel en ratones desnudos, el injerto es cosechado y evaluado por la examinación histologic. El resultado demuestra que este producto tiene el potencial para la regeneración en el tejido adiposo normal. Este procedimiento es un procedimiento de disociación mecánica simple y efectiva para condensar las células SVF incrustadas en su natural apoyo ECM con fines regenerativos.

Introducción

Terapias con células madre ofrecen un cambio de paradigma para la regeneración y reparación de los tejidos por lo que pueden ofrecer un régimen terapéutico alternativo para varias enfermedades¹. Las células madre (p. ej., células madre pluripotentes inducidas y las células madre embrionarias) tienen un gran potencial terapéutico pero son limitadas debido a la regulación de la célula y consideraciones éticas. Derivados del adiposo mesenquimales estromales/células madre (ASCs) son fáciles de obtener de lipoaspirates y no está sujeto a las mismas restricciones; así, se ha convertido en un tipo de célula ideal para medicina regenerativa pr....

Protocolo

Esta investigación fue aprobada por la Junta de revisión ética en Nanfang Hospital, Cantón, China. Tejido adiposo se obtuvo de donantes sanos que dieron consentimiento informado por escrito para participar en el estudio. Todos los experimentos en animales fueron aprobados por el Nanfang Hospital institucional Animal cuidado y uso y realizados según los lineamientos de la salud nacional y el Consejo de investigación médica (China).

1. ECM/SVF-gel de preparación

1. La cosecha de grasa.
   1. Realizar liposucción en un ser humano con una cánula selectora de 3 mm, que contiene varios agujeros del lado agudo de 1 mm de diámetro, en -0.7....

Resultados

Después de procesar la grasa Coleman a gel o SVF-ECM, el volumen de petróleo desechado ocupa 80% del volumen final, y sólo el 20% de tejido adiposo conservado bajo la capa de aceite se considera como ECM o SVF-gel (figura 1A). ECM/SVF-gel tiene una textura suave de tipo líquido que le permite ir a través de una aguja fina 27 G; sin embargo, Coleman grasa se compone de una estructura grasa integral con fibras grandes y sólo puede ir a través d.......

Discusión

Terapia Regenerativa de células madre ha mostrado un gran beneficio potencial en diferentes enfermedades. ASCs son candidatos terapéuticos porque son fáciles de obtener y tienen la capacidad de reparación de los tejidos y la regeneración de nuevos tejidos¹⁵. Sin embargo, existen limitaciones a la expansión de su uso clínico, ya que requiere procedimientos complicados para aislar células y colagenasa para el procesamiento de⁶. Por lo tanto, es esencial desarrollar una técnic.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Alexa Fluor 488-isolectina conjugada GS-IB4	Sondas moleculares	I21411
conejillo de indias anti-ratón perilipina	Progen	GP29
DAPI	Thermofisher	D1306
pipeta de punta ancha	Celltreat	229211B
Microscopio confocal	Leica	TCS SP2
desnudo agradable	Universidad Mdical del Sur	/
microscopio óptico	Olympus	/
tubo de 50 mL	Cornig	430828
bolsa estéril	Laishi	/
micrótomo	Leica	centrífuga CM1900
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