Utilizando sistemas de cultivo de múltiples pasos, Divulgamos un in vitro células B al modelo de diferenciación de la célula de plasma.
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Artículo de método
En Vitro modelo de diferenciación de células de memoria humana Normal B a células plasmáticas duradero
En este artículo
Resumen
Resumen
Células plasmáticas (PC) secretan grandes cantidades de anticuerpos y desarrollo de las células B que han sido activadas. PC es células en la médula ósea o la mucosa y garantizar la inmunidad humoral. Debido a su baja frecuencia y localización, es difícil el estudio de PC en humanos. Hemos informado a B para PC modelo de diferenciación in vitro usando las combinaciones de citoquinas y activación de moléculas que permiten reproducir la diferenciación secuencial que ocurre in vivo. En este modelo in vitro, memoria (MBCs) de células B diferencian en los plasmablasts (prePBs), plasmablasts PC (PBs), temprano y por último, en larga vida PC, con un fenotipo cerca de sus contrapartes en individuos sanos. También hemos construido un acceso abierto bioinformática herramientas para analizar la información más prominente de datos GEP de diferenciación de la PC. Estos recursos pueden utilizarse para estudiar humano B diferenciación de PC y en el presente estudio, hemos investigado la regulación de la expresión génica de factores epigenéticos durante humano B para diferenciación de PC.
Introducción
La diferenciación de células B a células plasmáticas (PC) es esencial para la inmunidad humoral y proteger al huésped contra infecciones1. B para diferenciación de PC se asocia con cambios importantes en el metabolismo y capacidad de transcripción para la secreción de anticuerpos. Se han estudiado ampliamente los factores de transcripción que controlan B para diferenciación de PC y redes exclusiva reveladas incluyendo transcripción B-PC-específicas y factores (TFs)2. En las células de B, PAX5, BCL6 y BACH2 TFs son los guardianes de la identidad de la célula de B2,3
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Protocolo
El protocolo sigue las directrices de acuerdo con la declaración de Helsinki y acuerdo de centro de Hospital de la Universidad de Montpellier de recursos biológicos.
1. en el modelo de diferenciación de la célula de Plasma Vitro Normal
Nota: PC se genera a través de una cultura de cuatro pasos11,12,13.
-
Diferenciación y la amplificación de la célula de b
- Uso de células de sangre periféricas de voluntarios sanos para la purificación de células B de memoria.
- ....
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Resultados
El procedimiento general de diferenciación in vitro de PC normal se representa en la figura 1. Utilizando el protocolo presentado aquí, podríamos generar suficiente cantidad de células que no se podía obtener con ex vivo de muestras humanas. Aunque se ha investigado el papel de la compleja red de factores de transcripción implicados en la diferenciación de la PC, los mecanismos de regulación de redes de transcripción de diferenciación de PC claves siguen sien.......
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Discusión
En humanos, PC son células con etapas de diferenciación tiene lugar en lugares anatómicos que obstaculizan la caracterización biológico completo. Hemos desarrollado una in vitro B modelo de diferenciación de PC utilizando sistemas de cultivo de varios pasos donde varias combinaciones de moléculas de activación y citoquinas se aplican posteriormente para poder reproducir la diferenciación secuencial en el diferentes órganos/tejidos en vivo11,12,
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar
Agradecimientos
Este trabajo fue financiado por becas del INCA francés (Institut National du Cancer) cáncer de ITMO (MM & TT), ANR (Tie-Skip) e Instituto (PLBIO15-256).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| perlas magnéticas anti-CD2 | Invitrogen | 11159D | |
| Anti-CD138-APC | Beckman-Coulter | B49219 | |
| Anti-CD19-APC | BD 555415 | ||
| Anti-CD20-PB | Beckman-Coulter | B49208 | |
| Anti-CD27-PE | BD 555441 | ||
| Anti-CD38-PE | Beckman-Coulter | A07779 | |
| Antihistidina | R& D Systems | MAB050 | |
| CpG ODN(PT)Sigma | T*C*G*T*C*G*T*G*T*C* G*T*T*G*T*C*G*T*T | ||
| transferina humana | Sigma-Aldrich | T3309 | |
| IFN-α | Merck | Intron A | |
| IMDM | Gibco | 31980-022 | |
| Recombinan Human CD40L-hi | R& D Systems | 2706-CL | |
| Recombinante Humano APRIL | R& D Systems | 5860-AP-010 | |
| IL-10 humano recombinante | R& D Systems | 217-IL-IL-Recombinante | |
| Humano IL-15 | Peprotech | 200-15-10ug | |
| Proteína IL-2 Humana Recombinante | R& D Systems | 202-IL-Recombinante | |
| Humano IL-6 | Peprotech | 200-06 |
Referencias
- Shapiro-Shelef, M., Calame, K. Regulation of plasma-cell development. Nature Reviews Immunology. 5 (3), 230-242 (2005).
- Nutt, S. L., Hodgkin, P. D., Tarlinton, D. M., Corcoran, L. M. The generation of antibody-secreting plasma cells. Nature Reviews Immunology. 15 (3), 160-17....
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Reimpresiones y permisos
