Aquí presentamos un elegante protocolo para la evaluación en vivo de la vacuna eficacia y anfitrión inmunorespuestas. Este protocolo puede ser adaptado para modelos de vacuna que estudian viral, bacteriana o parásitos patógenos.
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Artículo de método
Evaluación de las respuestas del huésped-patógeno y eficacia de la vacuna en ratones
En este artículo
Resumen
Resumen
Las vacunas son una 20 maravilla médica de sigloXX . Han reducido considerablemente la morbilidad y la mortalidad causada por enfermedades infecciosas y contribuyó a un notable aumento esperanza de vida alrededor del mundo. Sin embargo, determinar la eficacia de la vacuna sigue siendo un desafío. Emergentes de la evidencia sugieren que la actual vacuna acelular (aPV) para Bordetella pertussis (B. pertussis) induce inmunidad subóptima. Por lo tanto, un reto es diseñar una vacuna de nueva generación que induce inmunidad protectora sin los efectos secundarios adversos de una vacuna de células enteras (wPV). Aquí se describe un protocolo que se utilizó para probar la eficacia de un coadyuvante prometedor, la novela que sesga las respuestas inmunes a un fenotipo Th1/Th17 protección y promueve una mejor separación de un desafío B. pertussis en el tracto respiratorio murine. Este artículo describe el protocolo para la inmunización del ratón, inoculación bacteriana, tejidos y análisis de la respuesta inmune. Usando este método, dentro de nuestro modelo, hemos aclarado con éxito mecanismos cruciales provocados por una vacuna de tos ferina acelular prometedor, de última generación. Este método puede ser aplicado a cualquier modelo de enfermedad infecciosa para determinar la eficacia de la vacuna.
Introducción
Las vacunas representan uno de los mayores logros de salud pública del siglo XX, sin embargo, todavía no entendemos los mecanismos por el cual las vacunas exitosas estimulan inmunidad protectora. La identificación de firmas moleculares (ej., marcadores de activación de la célula, expansión de subtipos celulares y los patrones de expresión génica) inducida después de la vacunación proporciona una gran cantidad de información para predecir y generar una eficaz respuesta inmune. La complejidad de las respuestas del huésped-patógeno no puede replicarse adecuadamente usando in vitro de la célula cultura sistemas1. En vivo ....
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Protocolo
Todos los experimentos con animales vivos se realizaron siguiendo un protocolo aprobado por el IACUC de Universidad de estado de Ohio con arreglo a directrices IACUC. Ratones C57BL/6 fueron utilizados en todas las vacunas y las infecciones. Ratones masculinos y femeninos son utilizados en cada grupo según las directrices de los NIH. Por cálculos de energía basados en las diferencias previstas en el resultado entre los grupos experimentales se determinó el número de animales por grupo. Por ejemplo, 8 ratones por grupo producirá energía del 80% en α = 0.05 (2 caras) de 2-sample t- test para detectar diferencias en el resultado del interés de 1,33 desviaciones d....
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Resultados
El modelo descrito muestra un método para evaluar la eficacia de la vacuna y las respuestas inmunitarias durante interacciones huésped-patógeno. La figura 1 muestra el calendario de vacuna representante para inmunizar e infectar ratones y tejidos para el análisis de la cosecha. Figura 2 se muestra la configuración del sistema de anestesia empleado para inducir a ratones, permitiendo a los investigadores ofrecer vacunas y el inocu.......
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Discusión
El protocolo completo que se describe aquí para estudiar la inmunidad inducida por la vacuna a la infección por B. pertussis también permitirá la evaluación de las respuestas del anfitrión a una variedad de otros patógenos. El protocolo describe métodos para entregar vacunas, determinar el siguiente de eficacia de vacuna desafío patógeno y disección paralela de la función inmune. En la adaptación del protocolo para el estudio de otros patógenos, varios parámetros tendría que modificarse. Éstos incluyen, pero no .......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue financiado por los fondos de 1R01AI125560-01 y puesta en marcha de la Universidad Estatal de Ohio.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Cámara de inducción 2L | Vet Equip | 941444 | |
| Fluriso | Vet | One V1 501017 | cualquier marca es apropiada |
| Bordet Gengou Agar Base | BD bioscience | 248200 | |
| Caseína | Sigma | C-7078 | |
| Ácidos Casamino | VWR | J851-500G | Colador Scholte (SS) Componentes de los medios |
| Ácido L-glutámico | Productos de investigación Int | G36020-500 | |
| L-Prolina | Productos de investigación Int | P50200-500 | |
| Cloruro de sodio | Fisher | BP358-10 | |
| Fosfato de potasio monobásico | Fisher | BP362-1 | |
| Cloruro de potasio | Fisher | P217-500 | |
| Cloruro de magnesio hexahidratado | Fisher | M2670-500G | |
| Cloruro de calcio | Fisher | C75-500 | |
| Tris base | Fisher | BP153-1 | |
| L-cisteína HCl | Fisher | BP376-100 | SS suplementos de medios |
| Sulfato ferroso heptahidratado | Sigma | F-7002 | |
| Niacina | Productos de investigación Int | N20080-100 | |
| Glutatión | Productos de investigación Int | G22010-25 | |
| Ácido ascórbico | Productos de investigación Int | A50040-500 | |
| RPMI 1640 | ThermoFisher Scientific | 11875093 | |
| FBS | Sigma | F2442-500mL | cualquier fuente de EE. UU., |
| gentamicina | ThermoFisher Scientific | 15710064 | |
| B-mercaptoetanol | Fisher | BP176-100 | |
| 15mL molinillo de pañuelos Wheaton | 357544 | cualquier marca similar es apropiada | |
| Homogeneizador de mano inalámbrico | Kontes/Sigma | Z359971-1EA cualquier | marca similar es apropiada |
| Instrumentos: tijeras, tijeras curvas, pinzas, pinzas finas, separadores | triangulares cualquier marca es apropiada | ||
| Jeringas de 3 ml | BD bioscience | 309657 | |
| tubos cónicos de 15 ml | Fisher | ||
| tubos de microfuga de 1,5 ml Denville | C2170 | ||
| filtros de celdas de 70um | Fisher | ||
| placas de 60 mm | ThermoFisher Scientific | 130181 | |
| placas de cultivo de tejidos de 48 pocillos | ThermoFisher Scientific | 08-772-1C | |
| Jeringa de insulina de 1 ml 28G1/2 | Fisher Scientific/Excel Int. | 14-841-31 | |
| Ratón IFN-gamma ELISA Ready-SET-Go! Kit | Invitrogen / eBioscience | 50-173-21 | |
| Ratón IL-17 ELISA Ready-SET-Go! Kit | Invitrogen / eBioscience | 50-173-77 | |
| Ratón IL-5 ELISA Ready-SET-Go! Kit | Invitrogen / eBioscience | 50-172-09 |
Referencias
- Tacken, P. J., Figdor, C. G. Targeted antigen delivery and activation of dendritic cells in vivo: steps towards cost effective vaccines. Seminars in Immunology. 23 (1), 12-20 (2011).
- Kilgore, P. E., Salim, A. M., Zervos, M. J., Schmitt, H. J.
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Reimpresiones y permisos
