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Artículo de método

Evaluación de las respuestas del huésped-patógeno y eficacia de la vacuna en ratones

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DOI:

10.3791/58930

22 de febrero de 2019

En este artículo

Resumen

Aquí presentamos un elegante protocolo para la evaluación en vivo de la vacuna eficacia y anfitrión inmunorespuestas. Este protocolo puede ser adaptado para modelos de vacuna que estudian viral, bacteriana o parásitos patógenos.

Resumen

Las vacunas son una 20 maravilla médica de sigloXX . Han reducido considerablemente la morbilidad y la mortalidad causada por enfermedades infecciosas y contribuyó a un notable aumento esperanza de vida alrededor del mundo. Sin embargo, determinar la eficacia de la vacuna sigue siendo un desafío. Emergentes de la evidencia sugieren que la actual vacuna acelular (aPV) para Bordetella pertussis (B. pertussis) induce inmunidad subóptima. Por lo tanto, un reto es diseñar una vacuna de nueva generación que induce inmunidad protectora sin los efectos secundarios adversos de una vacuna de células enteras (wPV). Aquí se describe un protocolo que se utilizó para probar la eficacia de un coadyuvante prometedor, la novela que sesga las respuestas inmunes a un fenotipo Th1/Th17 protección y promueve una mejor separación de un desafío B. pertussis en el tracto respiratorio murine. Este artículo describe el protocolo para la inmunización del ratón, inoculación bacteriana, tejidos y análisis de la respuesta inmune. Usando este método, dentro de nuestro modelo, hemos aclarado con éxito mecanismos cruciales provocados por una vacuna de tos ferina acelular prometedor, de última generación. Este método puede ser aplicado a cualquier modelo de enfermedad infecciosa para determinar la eficacia de la vacuna.

Introducción

Las vacunas representan uno de los mayores logros de salud pública del siglo XX, sin embargo, todavía no entendemos los mecanismos por el cual las vacunas exitosas estimulan inmunidad protectora. La identificación de firmas moleculares (ej., marcadores de activación de la célula, expansión de subtipos celulares y los patrones de expresión génica) inducida después de la vacunación proporciona una gran cantidad de información para predecir y generar una eficaz respuesta inmune. La complejidad de las respuestas del huésped-patógeno no puede replicarse adecuadamente usando in vitro de la célula cultura sistemas1. En vivo ....

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Protocolo

Todos los experimentos con animales vivos se realizaron siguiendo un protocolo aprobado por el IACUC de Universidad de estado de Ohio con arreglo a directrices IACUC. Ratones C57BL/6 fueron utilizados en todas las vacunas y las infecciones. Ratones masculinos y femeninos son utilizados en cada grupo según las directrices de los NIH. Por cálculos de energía basados en las diferencias previstas en el resultado entre los grupos experimentales se determinó el número de animales por grupo. Por ejemplo, 8 ratones por grupo producirá energía del 80% en α = 0.05 (2 caras) de 2-sample t- test para detectar diferencias en el resultado del interés de 1,33 desviaciones d....

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Resultados

El modelo descrito muestra un método para evaluar la eficacia de la vacuna y las respuestas inmunitarias durante interacciones huésped-patógeno. La figura 1 muestra el calendario de vacuna representante para inmunizar e infectar ratones y tejidos para el análisis de la cosecha. Figura 2 se muestra la configuración del sistema de anestesia empleado para inducir a ratones, permitiendo a los investigadores ofrecer vacunas y el inocu.......

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Discusión

El protocolo completo que se describe aquí para estudiar la inmunidad inducida por la vacuna a la infección por B. pertussis también permitirá la evaluación de las respuestas del anfitrión a una variedad de otros patógenos. El protocolo describe métodos para entregar vacunas, determinar el siguiente de eficacia de vacuna desafío patógeno y disección paralela de la función inmune. En la adaptación del protocolo para el estudio de otros patógenos, varios parámetros tendría que modificarse. Éstos incluyen, pero no .......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Este trabajo fue financiado por los fondos de 1R01AI125560-01 y puesta en marcha de la Universidad Estatal de Ohio.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Cámara de inducción 2LVet Equip941444
FlurisoVetOne V1 501017cualquier marca es apropiada
Bordet Gengou Agar BaseBD bioscience248200
CaseínaSigmaC-7078
Ácidos CasaminoVWRJ851-500GColador Scholte (SS) Componentes de los medios
Ácido L-glutámicoProductos de investigación IntG36020-500
L-ProlinaProductos de investigación IntP50200-500
Cloruro de sodioFisherBP358-10
Fosfato de potasio monobásicoFisherBP362-1
Cloruro de potasioFisherP217-500
Cloruro de magnesio hexahidratadoFisherM2670-500G
Cloruro de calcioFisherC75-500
Tris baseFisherBP153-1
L-cisteína HClFisherBP376-100SS suplementos de medios
Sulfato ferroso heptahidratadoSigmaF-7002
NiacinaProductos de investigación IntN20080-100
GlutatiónProductos de investigación IntG22010-25
Ácido ascórbicoProductos de investigación IntA50040-500
RPMI 1640ThermoFisher Scientific11875093
FBSSigmaF2442-500mL  cualquier fuente de EE. UU.,
gentamicinaThermoFisher Scientific15710064
B-mercaptoetanolFisher BP176-100
15mL molinillo de pañuelos Wheaton357544cualquier marca similar es apropiada
Homogeneizador de mano inalámbricoKontes/Sigma Z359971-1EA cualquiermarca similar es apropiada
Instrumentos: tijeras, tijeras curvas, pinzas, pinzas finas, separadorestriangulares cualquier marca es apropiada
Jeringas de 3 mlBD bioscience309657
tubos cónicos de 15 mlFisher 
tubos de microfuga de 1,5 ml DenvilleC2170
filtros de celdas de 70umFisher 
placas de 60 mmThermoFisher Scientific130181
placas de cultivo de tejidos de 48 pocillosThermoFisher Scientific08-772-1C
Jeringa de insulina de 1 ml 28G1/2Fisher Scientific/Excel Int.14-841-31
Ratón IFN-gamma ELISA Ready-SET-Go! KitInvitrogen / eBioscience50-173-21
Ratón IL-17 ELISA Ready-SET-Go! KitInvitrogen / eBioscience50-173-77
Ratón IL-5 ELISA Ready-SET-Go! KitInvitrogen / eBioscience50-172-09
no inactivada por calor 33965122363548

Referencias

  1. Tacken, P. J., Figdor, C. G. Targeted antigen delivery and activation of dendritic cells in vivo: steps towards cost effective vaccines. Seminars in Immunology. 23 (1), 12-20 (2011).
  2. Kilgore, P. E., Salim, A. M., Zervos, M. J., Schmitt, H. J.

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Etiquetas

Respuesta huésped-patógenoinmunización de ratonesinoculación bacterianarecolección de tejidosrecuento de UFCcitometría de flujoanálisis ELISpotBordetella pertussispolarización Th1 Th17