Un modelo murino de isquemia-reperfusión cerebral es establecido para investigar la patofisiología del accidente cerebrovascular. Distal, ligar la arteria cerebral media derecha y la arteria carótida común derecha y restablecer el flujo sanguíneo después de 10 o 40 min de isquemia.
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Artículo de método
Oclusión de los vasos dos ratón modelo de isquemia-reperfusión Cerebral
* These authors contributed equally
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Resumen
Resumen
En este estudio, un modelo de ratón de oclusión de arteria cerebral media (MCA) se emplea para el estudio de isquemia-reperfusión cerebral. Un modelo reproducible y confiable es útil para investigar la fisiopatología de la isquemia-reperfusión cerebral y determinar posibles estrategias terapéuticas para pacientes con accidente cerebrovascular. Las variaciones en la anatomía del círculo de Willis de C57BL/6 ratones afecta su volumen de infarto después de la lesión inducida por la isquemia cerebral. Los estudios han indicado que oclusión distal de la MCA (MCAO) puede superar este problema y resultar en un tamaño de infarto estable. En este estudio, establecemos un modelo de ratón de oclusión de los vasos dos de isquemia-reperfusión cerebral a través de la interrupción del flujo sanguíneo a la derecha MCA. Distal, ligar el MCA derecha y arteria carótida común derecha (CCA) y restaurar el flujo sanguíneo después de un periodo de isquemia. Esta isquemia-reperfusión induce un infarto de tamaño estable y un déficit conductual. Las células inmunes periféricas infiltran en el cerebro isquémico dentro del período de infiltración de 24 h. Además, la pérdida neuronal en el área cortical es menor para una duración más larga de la reperfusión. Por lo tanto, este modelo de oclusión de los vasos dos es adecuado para investigar la respuesta inmune y la recuperación neuronal durante el período de reperfusión tras la isquemia cerebral.
Introducción
El modelo de ratón de isquemia-reperfusión cerebral es uno de los enfoques experimentales más utilizados para la investigación de la fisiopatología del cerebro inducida por la isquemia lesión1. Porque isquemia-reperfusión cerebral activa el sistema inmune periférico, las células inmunes periféricas infiltran en el cerebro isquémico y causan daño neuronal2. Así, un modelo de ratón fiable y reproducible que imita la isquemia-reperfusión cerebral es necesaria para entender la patofisiología del accidente cerebrovascular.
C57BL/6J (B6) los ratones son la cepa más comúnmente utilizada en experiment....
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Protocolo
Los comités de uso de Sinica de la Academia y Universidad médica de Taipei y cuidado de los animales institucional aprobaron este protocolo para el uso de animales de experimentación.
1. modelo MCAO/reperfusión
- Proporcionar los ratones con acceso libre al agua y chow hasta la cirugía.
- Autoclave el quirúrgico herramientas y desinfectar la mesa de cirugía y aparatos con etanol al 70%. Use una máscara quirúrgica y guantes estériles. Utilizar un esterilizador de grano seco a esterilizar los instrumentos quirúrgicos si múltiples cirugías de ratón se llevará a cabo en un experimento.
- Anestesiar un ratón de 8 a 12 sem....
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Resultados
Este procedimiento MCAO/reperfusión produce un infarto cortical en las cercanías de la MCA derecha y causó un déficit conductual. Diferentes grados de volumen inducida por la isquemia infarto (figura 1AB) y la pérdida neuronal (figura 1D) fueron creados en la corteza cerebral de la zona derecha de MCA a través de un aumento en la duración de la ligadura. Este MCAO/reperfusión disminuyó actividad .......
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Discusión
El modelo de ratón MCAO/reperfusión es un modelo animal empleado comúnmente para mímico isquemia transitoria en los seres humanos. Este modelo animal puede aplicarse a las cepas de ratones transgénicos y knockout para investigar la patofisiología del accidente cerebrovascular. Varios pasos en el protocolo son especialmente críticos. (1) la microperforadora debe utilizarse con cuidado cuando se crea un agujero en el cráneo, con inadecuado acción fácilmente, lo que causa hemorragia de la MCA. (2) el MCA no debe ser dañado,.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el Ministerio de ciencia y tecnología, Taiwán (más 106-2320-B-038-024 105-2221-E-038-007-MY3 más y más 104-2320-B-424-001) y Taipei Medical University Hospital (107TMUH-SP-01). Este manuscrito fue editado por Wallace de edición académica.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Rongeur óseo | Diener | Friedman | |
| Buprenorfina | Sigma | B-044 | |
| Cefazolina | Sigma | 1097603 | |
| Hidrato de cloral | Sigma | C8383 | |
| Microscopio de disección | Nikon | SMZ-745 | |
| Maquinillas eléctricas | Petpro | ||
| 10% formalina | Sigma | F5304 | |
| Germinador esterilizador de perlas secas | Braintree Scientific | ||
| Pinza de iris | Karl Klappenecker | 10 cm | |
| Tijeras de iris | Diener | 9 cm | |
| Tijeras de iris STR | Karl Klappenecker | 11 cm | |
| Microdrill | Stoelting | FOREEDOM K.1070 | |
| Microtijeras-Vannas | HEISS | H-4240 | hoja 7mm, 8 cm |
| Matriz de cerebro de ratón | World Precision Instruments | ||
| Sistema de presión arterial no invasivo | Muromachi | MK-2000ST | |
| Tijeras de operación STR | Karl Klappenecker | 14 cm | |
| Sistema de monitoreo fisiológico | Harvard | ||
| Razor cuchillas | Ever-Ready | ||
| Stoelting Calentadores de roedores | Stoelting | 53810 | Almohadilla térmica Pinza |
| sutura | Stoelting | ||
| IDEALTEK | No.3 | ||
| Vetbond | 3M | 15672 | Pegamento quirúrgico |
| 10-0 sutura | UNIK | NT0410 | |
| 2,3,5-Trifeniltetrazolio cloruro | Sigma | T8877 |
Referencias
- Woodruff, T. M., et al. Pathophysiology, treatment, and animal and cellular models of human ischemic stroke. Molecular Neurodegeneration. 6 (1), 11(2011).
- Chamorro, A., et al. The immunology of acute stroke. Nature Reviews. Neurology.
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Reimpresiones y permisos
