La audiometría de respuesta evocada por el tronco cerebral es una herramienta importante en la neurofisiología clínica. Hoy en día, la audiometría de respuesta evocada con tronco encefálico también se aplica en la ciencia básica y los estudios preclínicos que involucran modelos animales farmacológicos y genéticos. Aquí proporcionamos una descripción detallada de cómo las respuestas del tronco cerebral auditivo se pueden registrar y analizar con éxito en ratones.
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Artículo de método
Adquisición y análisis de datos en Brainstem Evocada Audiometría de Respuesta en Ratones
En este artículo
Resumen
Resumen
La audiometría de respuesta evocada por el tronco cerebral (BERA) es de importancia central en la neurofisiología clínica. Como otras técnicas de potencial evocada (EP), como los potenciales evocados visualmente (VIP) o los potenciales evocados somatosensoriales (SEP), los potenciales evocados auditivos (PEE) se desencadenan por la presentación repetitiva de estímulos idénticos, el respuesta electroencefalográfica (EEG) de la cual se promedia posteriormente dando lugar a distintas desviaciones positivas (p) y negativas (n). En los seres humanos, tanto la amplitud como la latencia de los picos individuales se pueden utilizar para caracterizar alteraciones en la sincronización y la velocidad de conducción en los circuitos neuronales subyacentes. Es importante destacar que los AAP también se aplican en la ciencia básica y preclínica para identificar y caracterizar la función auditiva en los modelos farmacológicos y genéticos de animales. Aún más, los modelos animales en combinación con pruebas farmacológicas se utilizan para investigar los beneficios potenciales en el tratamiento de la pérdida auditiva neurosensorial (por ejemplo, déficitauditivo inducido por la edad o ruido). Aquí proporcionamos una descripción detallada e integradora de cómo registrar respuestas auditivas evocadas por tronco cerebral (ABR) en ratones usando la aplicación de clic y ráfaga de tono. Un enfoque específico de este protocolo se centra en la vivienda animal preexperimental, la anestesia, la grabación abr, los procesos de filtrado ABR, el análisis automatizado de la función de crecimiento de amplitud basado en ondas y la detección de latencia.
Introducción
Un aspecto central de la fisiología cerebral es su capacidad para procesar información ambiental que resulta en diferentes resultados intrínsecos o extrínsecos, como el aprendizaje, la memoria, las reacciones emocionales o las respuestas motoras. Se pueden utilizar varios enfoques experimentales y diagnósticos para caracterizar la capacidad de respuesta electrofisiológica de los tipos de células neuronales individuales o grupos/conjuntos de neuronas dentro de un circuito neuronal relacionado con el estímulo. Estas técnicas electrofisiológicas cubren diferentes dimensiones espaciotemporales en la microescala, meso- y macroescala1. El nivel de mi....
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Protocolo
Todos los procedimientos de animales se realizaron de acuerdo con las directrices del Consejo Alemán de Cuidado de Animales y todos los protocolos fueron aprobados por el comité institucional y nacional local de cuidado de animales (Landesamt f'r Natur, Umwelt, und Verbraucherschutz, Estado Oficina de Renania del Norte-Westfalia, Departamento de Naturaleza, Medio Ambiente y Consumismo [LANUV NRW], Alemania). Los autores certifican además que toda la experimentación con animales se llevó a cabo de conformidad con la Guía de Los Institutos Nacionales de Salud para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (NIH Publications No 80-23) revisada de 1996 o la Ley de Animal....
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Resultados
Las grabaciones ABR evocadas por ráfagas de tono y clic se pueden utilizar para evaluar las diferencias de umbral auditivo, la función de crecimiento de amplitud y la comparación de latencia. Los ABRs con evocados por clics en el modo de aumento de SPL se representan en la Figura 1 para los controles y dos líneas de ratón mutantes ejemplares que son deficientes para el canal Ca2+ con voltaje de tipo T de Cav3.2 (es decir, Cav3.......
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Discusión
Este protocolo proporciona una descripción detallada e integradora de cómo registrar las respuestas del tronco cerebral evocadas auditivas en ratones. Pone especial atención en el pretratamiento animal, la anestesia y los posibles factores de confunción metodológica. Estos últimos incluyen, entre otros, el género, la línea del ratón, la edad y las condiciones de vivienda. Cabe señalar que todos estos factores pueden tener un impacto en la pérdida auditiva neurosensorial y en los aspectos fundamentales del procesamiento d.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer a la Dra. Christina Kolb (Centro Alemán de Enfermedades Neurodegenerativas [DZNE]) y al Dr. Robert Stark (DZNE) por su asistencia en la cría de animales y el cuidado de la salud animal. Este trabajo fue apoyado financieramente por el Instituto Federal de Drogas y Dispositivos Médicos (Bundesinstitut f'r Arzneimittel und Medizinprodukte, BfArM, Bonn, Alemania).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Software AEP/OAE para RZ6 (software BioSigRZ) | Tucker-Davis Technologies (TDT) | BioSigRZ | |
| Microscopio binocular de aumento | Zeiss Stemi 2000 | 0000001003877, 4355400000000, 0000001063306, 4170530000000, 4170959255000, 4551820000000, 4170959040000, 4170959050000 | |
| Jaulas (Macrolon) | Techniplast | 1264C, 1290D | |
| Carprox vet, 50mg/ ml | Virbac Tierarzneimittel GmbH | PZN 11149509 | |
| Fuente de luz fría | Schott KL2500 LCD | 9.705 202 | |
| Aplicadores de punta de algodón (estériles) | Carl Roth | EH12.1 | |
| Jaula de Faraday de metal mallado hecha a medida (acero inoxidable, 2 mm de grosor, tamaño de malla de 1 cm) | hecho a medida | ||
| 5% Dexpantenol (crema de ojos y nariz Bepanthen) | Bayer Vital GmbH | PZN: 01578681 | |
| Electrodos subdérmicos desechables de acero inoxidable Needle , 27GA, 12mm | Rochester Electro-Medical, Inc. | S03366-18 | |
| Sábanas quirúrgicas (estériles) | Hartmann | PZN 0366787 | |
| Etanol, 70% | Carl Roth | 9065.5 | |
| 1/4'' Kit de micrófono de calibración de medida de campo libre | Tucker-Davis Technologies (TDT) | PCB-378C0 | |
| Guantes (estériles) | Unigloves | 1570 | |
| Graefe Pinzas curvadas, | dentadas FST | 11052-10 | |
| Software GraphPad Prism 6, V6.07 | Software GraphPad Prism, Inc. | https://www.graphpad.com/ | |
| Esterilizador de instrumental quirúrgico a base de calor | FST | 18000-50 | |
| Homeothermic heated blanked | ThermoLux | 461265 / -67 | |
| Ketanest S (Ketamina), 25mg/ml | Pfizer | PZN 08707288 | |
| Ringer' s solución (estéril) | B.Braun | PZN 01471434 | |
| Matlab software | MathWorks, Inc. | ||
| Medusa de 4 canales de bajo impacto. Headstage | Tucker-Davis Technologies (TDT) | RA4LI | |
| Medusa Preamplificador/Digitalizador de 4 canales | Tucker-Davis Technologies (TDT) | RA4PA | |
| Micrófono | PCB Pieztronics | 378C01 | |
| Altavoz multicampo estéreo | Tucker-Davis Technologies (TDT) | MF1-S | |
| Osciloscopio | Tektronix | DPO3012 | |
| Tarjeta óptica PC1 express para Optibit Interface) | Tucker-Davis Systems (TDT) | PO5e | |
| Almohadillas Askina Braucel (almohadillas de absorción de celulosa) | B.Braun | PZN 8473637 | |
| Preamplificador | PCB Pieztronics | 480C02 | |
| RZ6 Sistema de procesador de E/S múltiples (BioSigRZ) | Tucker-Davis Technologies (TDT) | RZ6-A-PI | |
| 0,9% salino (NaCl, estéril) | B. Braun | PZN:8609255 | |
| SigGenRZ software | Tucker-Davis Technologies (TDT) | https://www.tdt.com/ | |
| Software R (versión 3.2.1) + Reshape 2 (versión 1.4.1) + ggplot 2 (versión 1.0.1) + datatable (versión 1.9.4), + gdata (versión 2.13.3), + pastecs (versión 1.3.18), + waveslim (versión 1.7.5), + MassSpecWavelet (versión 1.30.0) | The R Foundation, R Core Team 2015 | Open Source Software (de libre distribución) | |
| Cubículo atenuador de sonido | Med Associates Inc. | ENV-018V | |
| Pinza de patrón estándar, 12 cm y 14,5 cm de longitud | FST | 11000-12, 11000-14 | |
| Cinta Leukosilk | BSN medical GmbH & Co. KG | PZN Pinza de tejido 00397109 | |
| 1x2 dientes 12 cm | FST | 11021-12 | |
| Armario ventilado Uniprotect | Bioscape | THF3378 | |
| Armario ventilado | Tecniplast | 9AV125P | |
| Xilacina (Rompun), 2% | Bayer Vital GmbH | PZN 1320422 |
Referencias
- Sporns, O., Tononi, G., Kotter, R. The human connectome: A structural description of the human brain. PLOS Computational Biology. 1 (4), e42(2005).
- Bebarova, M. Advances in patch clamp technique: towards higher quality and quantity. Ge....
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