Aquí, presentamos un protocolo para mejorar transitoriamente la función cardiaca en ratones de la distrofia muscular de Duchenne mediante el trasplante de exosomas derivados de células progenitoras miógena normal.
Artículo de método
* These authors contributed equally
Aquí, presentamos un protocolo para mejorar transitoriamente la función cardiaca en ratones de la distrofia muscular de Duchenne mediante el trasplante de exosomas derivados de células progenitoras miógena normal.
Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) es una enfermedad genética recesiva x-ligada causada por una carencia de la proteína distrofina funcional. No se puede curar la enfermedad, y conforme avanza la enfermedad, el paciente desarrolla síntomas de insuficiencia cardíaca congestiva, miocardiopatía dilatada y arritmias. Los ratones mutantes DMDMDX no expresan distrofina y se utilizan comúnmente como un modelo de ratón de la DMD. En nuestro reciente estudio, se observó que la inyección intramiocárdica de tipo ancho (WT)-progenitor miógena exosomas derivados de células (MPC-Exo) transitoriamente restauran la expresión de distrofina en el miocardio de ratones mutantes DMDMDX , asociada con una mejora transitoria de la función cardiaca, lo que sugiere que WT-MPC-Exo puede proporcionar una opción para aliviar los síntomas cardiacos de la DMD. Este artículo describe la técnica de purificación de MPC-Exo y el trasplante en corazones de ratones mutantes DMDMDX .
Distrofia muscular de Duchenne (DMD) es una X-ligado recesiva, progresiva enfermedad neuromuscular causada por una mutación en el gen de la DMD y la pérdida de distrofina funcional1. Distrofina se expresa principalmente en el miocardio y músculo esquelético y menos se expresa en el músculo liso, glándulas endocrinas y neuronas2,3. DMD es el tipo más común de distrofia muscular con una incidencia de uno por cada 3.500 a 5.000 niños recién nacidos en todo el mundo4,5. Individuos suelen desarrollan necrosis muscular progresiva, pér....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Los animales fueron tratados según protocolos aprobados y normas de bienestar animal del institucional cuidado Animal y del Comité de uso del colegio médico de Georgia en la Universidad de Augusta.
1. aislamiento y purificación de exosomas derivados de MPC
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Un diagrama de flujo para aislar y purificar exosomas de células C2C12 se muestra en la figura 1A. Para confirmar la presencia de exosomas, realizamos análisis de microscopia electrónica de transmisión. Imagen de microscopía electrónica de transmisión (figura 1B) muestra la morfología de las vesículas de forma brillante y redonda de exosomas C2C12 derivados. Mancha blanca /negra occidental análisis confirmaron la presencia de ma.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
El método de aislamiento de exosomas pura es esencial para el estudio de la función de exosomas. Una de las técnicas comunes para el aislamiento de exosomas es polietilenglicoles (PEGs) mediada por precipitación17,18,25. Exosomas pueden ser precipitada en las clavijas y peleteado por centrifugación a baja velocidad. Mediada por PEG purificación es muy conveniente y de bajo costo, no necesita ningún equipo avanzado, pero hay preo.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Todos los autores declara que tienen no hay conflictos de intereses.
Tang fue parcialmente financiado por la American Heart Association: NIH-AR070029, NIH-HL086555, GRNT31430008, HL134354 de NIH.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 0,22 y mu; m Filtro | Fisherbrand | 09-720-004 | |
| 15 cm Plato de cultivo celular | Thermo Fisher Scientific | 157150 | |
| catéter 24 G | TERUMO | SR-OX2419CA | |
| 31 G aguja de insulina | BD 328291 | ||
| 4% paraformaldehído | Affymetrix | AAJ19943K2 | |
| 50 mL Tubos de centrífuga | Thermo Fisher Scientific | 339652 | |
| 6-0 sutura | Pro Advantage by NDC | P420697 | |
| Alexa Fluor 488 cabra anti-conejo IgG Thermo | Fisher Scientific | A-11008 | |
| Antibiótico Solución Antimicótica Corning | 30-004-CI | ||
| Anticuerpo anti-distrofina | Abcam | ab15277 | |
| Antígeno retriever | Aptum Biologics | R2100-US Kit de enfriamiento de | recuperación de antígenos |
| Vector Laboratories | SP-8400 | ||
| C2C12 línea celular | ATCC | CRL-1772 | |
| Centrífuga | Unico | C8606 | |
| Change-A-Tip Cauterias de alta temperatura | Bovie Medical Corporation | HIT | |
| Microscopía confocal | Zeiss | Zeiss 780 Ratones confocales | |
| verticales DBA/2J-mdx | The Jackson Laboratory | 013141 | |
| DMEM | Corning | 10-013-CM | |
| Suero Fetal Bovino (FBS) | Corning | 35-011-CV | |
| Suero de cabra | MP Biomedicals, LLC | 191356 | |
| Isoflurano | Patterson Veterinario | 07-893-1389 | |
| Ketamina | Henry Schein | 056344 | |
| Medio de montaje con DAPI | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Juego de retractores para ratones | Kent Scientific | SURGI-5001 | |
| Éter de polietilenglicol terc-octilfenilo | Fisher Scientific | BP151-100 | |
| Ventilador para roedores | Harvard Apparatus | 55-7066 | |
| SW-28 Rotor Ti | Beckman | 342207 | |
| La plataforma | de imágenes Vevo 2100Sistema de ultrasonido FUJIFILM VisualSonics | Vevo 2100 | |
| Ultracentrífuga | Beckman | 365672 | |
| Tubos ultratransparentes | Beckman | 344058 | |
| xilacina (XylaMed) | Bimeda-MTC Animal Health Inc. | 1XYL003 8XYL006 |
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Solicitar permiso para reutilizar el texto o las figuras de este artículo de JoVE
Solicitar permiso