Aquí, describimos el desarrollo de un modelo murino clínicamente relevante de cáncer de hígado recapitulando las características inmunitarias típicas del cáncer hepatocelular (HCC).
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Artículo de método
Un modelo de ratón ortotópico inducido por hepatocitos oncogénicos que surge en el ajuste de la inflamación hepática y la fibrosis
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Resumen
Resumen
La ausencia de un modelo animal clínicamente relevante que aborde las características inmunitarias típicas del cáncer hepatocelular (HCC) ha impedido significativamente el esclarecimiento de los mecanismos subyacentes y el desarrollo de estrategias inmunoterapéuticas innovadoras. Para desarrollar un modelo animal ideal recapitulando HCC humano, los ratones machos inmunocompetentes C57BL/6J reciben primero una inyección de tetracloruro de carbono (CCl4) para inducir fibrosis hepática, luego reciben hepatocitos oncogénicos histológicamente normales de machojoven joven Ratones transgénicos de antígeno SV40 T (TAg) (MTD2) por inoculación intraesplénica (ISPL). Los andrógenos generados en ratones machoreceptores en la pubertad inician la expresión de TAg bajo el control de un promotor específico del hígado. Como resultado, los hepatocitos transferidos se convierten en células cancerosas y forman masas tumorales en el entorno de la fibrosis/cirrosis hepática. Este novedoso modelo imita la iniciación y progresión humana de hCC en el contexto de la fibrosis/cirrosis hepática y refleja las características más típicas de la HCC humana, incluida la disfunción inmune.
Introducción
El cáncer hepatocelular (HCC) es el tipo de cáncer que aumenta más rápidamente en los Estados Unidos (EE.UU.)1,2,3. Cada año, aproximadamente 850.000 nuevos casos se diagnostican4,5 y 700.000 pacientes mueren a causa de esta enfermedad letal6,7,8,9,10 , lo que la convierte en la segunda causa más alta de muerte relacionada con el cáncer en todo el mundo. El....
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Protocolo
NOTA: Todo el procedimiento, incluidos los sujetos de animales, ha sido aprobado por la IACUC de la Universidad de Missouri. Todos los ratones recibieron atención humana de acuerdo con los criterios descritos en la "Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio". El siguiente procedimiento para el aislamiento celular y la inoculación se debe realizar en una campana. Todos los artistas deben usar el equipo de protección personal estándar para el manejo de los ratones y tejidos.
1. Inducción de fibrosis hepática y cirrosis con inyección IP de tetracloruro de carbono (CCl4)
NOTA: Vea la Figu....
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Resultados
Los hepatocitos oncogénicos aislados de ratones transgénicos tag(Figura 2) fueron sembrados en el hígado de ratones de tipo salvaje por inyección intraesplénica(Figura 3). Los hepatocitos trasplantados crecieron con éxito y de forma fiable tumores ortotópicos de HCC(Figura 4) con antígeno específico tumoral SV40 TAg (Figura 5) en el entorno de inflamación hepática y fibrosis (Figura 1).
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Discusión
Con este protocolo, hemos establecido un modelo murino fiable y reproducible de HCC que imita la iniciación y progresión humana de HCC. Clínicamente, muchos factores de riesgo inducen sucesivamente lesiones hepáticas, fibrosis hepática, cirrosis y la etapa final del HCC. En nuestro protocolo, la inyección IP de CCl4 se utiliza primero para producir fibrosis hepática en ratones de tipo salvaje, lo que permite que los posteriores hepatocitos oncogénicos formen los tumores en el entorno de la fibrosis hepática. E.......
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Divulgaciones
No hay nadie que declarar.
Agradecimientos
Este trabajo cuenta con el apoyo de NIH/NCI R01 CA164335-01A1 (K. F. Staveley-O'Carroll, PI) y NIH/NCI R01CA208396 (Mark Kester, Guangfu Li, Kevin F. Staveley-O'Carroll).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Máquina de anestesia | VETEQUIP | IMPAC6 | máquina de anestesia para cirugía |
| Aguja de mariposa | BD | 8122963 | Aguja utilizada para la perfusión hepática |
| C57BL/6 ratones | Jackson Lab | 000664 | Ratones utilizados en Prototol |
| Carprofeno | CRESCENT CHEMICAL | 20402 | carprofeno para la liberación del dolor |
| Cell Strainer | CORNING | REF 431751 | Filtro de células, 70µ m, para el aislamiento de hepatocitos |
| Centrífuga | Beckman Coulter | Allegra X-30R | para el aislamiento |
| Clips | Teleflex Medical | REF 523700 | Clips de titanio para |
| microscopio | Zeiss | Primovert | Microscopio para observación celular |
| Ratones Mtd2 | N/A | Regalo del Dr. William A Celebrado en el Roswell Park Cancer Institute en 2002, mantenido en nuestro laboratorio | |
| Aguja | BD | REF 305109 | BD Aguja de precisiónGlide, 27G x 1/2 (0,4 mm x 13 mm) |
| Sutura | ETHICON | J303H | Sutura VICRYL recubierta |
| SV40 T Anticuerpo Ag | Abcam | ab16879 | anti-SV40 Anticuerpo anti-antígeno T para IHC |
| Jeringa | BD | REF 309626 | Jeringa TB de 1 mL para inyección celular |
| Azul de tripán | SIGMA | T 8154 | Solución de azul de tripán para prueba de viabilidad celular |
| Pinzas para heridas | Reflex | reflex9, Nº de pieza 201-1000 | pinzas de acero inoxidable para cierre de heridas |
Referencias
- O'Connor, S., Ward, J. W. Hepatocellular carcinoma - United States. Morbidity and Mortality Weekly Report. 59, 517-520 (2010).
- Petrick, J., Kelly, S., Altekruse, S., McGlynn, K., Rosenberg, P.
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Reimpresiones y permisos
Etiquetas
Modelo de c ncer hepatocelularinducci n de fibrosis hep ticatratamiento con tetracloruro de carbonotransferencia de hepatocitos oncog nicosprocedimiento de inyecci n intraspl nicaexpresi n del ant geno T de SV40formaci n de masa tumoralan lisis de la disfunci n inmunol gicat cnica de aislamiento de hepatocitoscrecimiento tumoral ortot pico
