Aquí se presenta un protocolo para inducir lesiones cerebrales traumáticas difusas utilizando un dispositivo de percusión de fluido lateral seguido de la recopilación del contenido de caecum para el análisis de microbioma intestinal.
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Artículo de método
Investigación de alteraciones en Caecum Microbiota después de una lesión cerebral traumática en ratones
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
El aumento de la evidencia muestra que el eje microbiota-gut-cerebro juega un papel importante en la patogénesis de las enfermedades cerebrales. Varios estudios también demuestran que las lesiones cerebrales traumáticas causan cambios en la microbiota intestinal. Sin embargo, los mecanismos subyacentes a la regulación bidireccional del eje cerebro-gut siguen siendo desconocidos. Actualmente, existen pocos modelos para estudiar los cambios en la microbiota intestinal después de una lesión cerebral traumática. Por lo tanto, el estudio presentado combina protocolos para inducir lesiones cerebrales traumáticas utilizando un dispositivo de percusión de fluido lateral y el análisis de muestras de caecum después de una lesión para investigar alteraciones en el microbioma intestinal. Las alteraciones de la composición de la microbiota intestinal después de una lesión cerebral traumática se determinan mediante la secuenciación 16S-rDNA. Este protocolo proporciona un método eficaz para estudiar las relaciones entre los microorganismos entéricos y las lesiones cerebrales traumáticas.
Introducción
La lesión cerebral traumática (TBI) es un problema de salud pública mundial y la principal causa de muerte y discapacidad en adultos jóvenes1,2. El TBI causa muchas muertes cada año, y los sobrevivientes experimentan una variedad de discapacidades físicas, psiquiátricas, emocionales y cognitivas. Por lo tanto, el TBI es una pesada carga para la familia del paciente y los recursos sociales. TBI implica tanto la lesión cerebral primaria que ocurre en el momento del trauma y cualquier lesión cerebral secundaria que desarrolla horas a meses después de la lesión inicial. Lesión cerebral secundaria está mediada por ....
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Protocolo
Todos los procedimientos realizados fueron aprobados por el Comité Experimental de Etica Animal de la Universidad de Zhejiang. Todos los instrumentos y materiales utilizados en la cirugía son estériles. El proceudre TBI tarda unos 20 minutos.
1. Cuidado de animales
- Utilice ratones C57BL/6J machos de 5 a 6 semanas (20-25 g de peso) en este experimento.
- Mantenga a los ratones en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h/12 h y asegúrese de que reciban alimentos y agua ad libitum. Proporcione las mismas cantidades de alimentos y agua a los grupos de la farsa y la TBI a lo largo del estudio.
- Haga todos los esfuerzos para m....
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Resultados
El establecimiento de TBI se muestra en la Figura 1. Después de la anestesia y la desinfección, el cuero cabelludo fue incisivo sagitalmente(Figura 1A). Una craneotomía (3 mm de diámetro) fue trephinada en el cráneo sobre la corteza parietal derecha con un taladro eléctrico, la dura se mantuvo intacta(Figura 1B,C). Se colocó una cánula de lesión plástica sobre la ventana ósea y se ce.......
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Discusión
Se presenta aquí un protocolo simple y eficiente para determinar los cambios en la microbiota cecal después de TBI en ratones. La inducción de lesiones cerebrales y la recolección de muestras de contenido de caecum son partes críticas del protocolo.
A pesar de que los investigadores han estudiado los cambios de la microbiota intestinal después de TBI, la lesión cerebral utilizada en estos estudios fue CCI-8 y modelos de caída de peso / impacto inducidos
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Divulgaciones
Los autores agradecen sinceramente a Baohong Wang por su orientación técnica.
Agradecimientos
Los autores no tienen nada que revelar.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Kit de aislamiento de ADN | QIAGEN | 51604 | Para la purificación rápida del ADN genómico de muestras de heces |
| Servicio de análisis de genes | GENEWIZ | Servicio de análisis de genes | |
| Almohadilla térmica | Shanghai SAFE Biotech Co. | almohadilla térmica | TR-200 |
| El primer hospital afiliado, Facultad de Medicina, Universidad | |||
| Inyector Dispositivo LFPI | Virginia Universidad de la Commonwealth | Dispositivo FP302 | LFPI |
| Micro taladro craneal | RWD Life Science | 78061 | Micro taladro craneal |
| Povidona Yodada | El primer hospital afiliado, Facultad de Medicina, Universidad | Povidona Yodada |
Referencias
- Cheng, P., et al. Trends in traumatic brain injury mortality in China, 2006-2013: A population-based longitudinal study. 14, e1002332(2017).
- Maas, A. I. R., et al. Traumatic brain injury: integrated....
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Reimpresiones y permisos
