Molécula pequeña comunicación entre tejidos y células mediante espectrometría de masas en la proyección de imagen de captura

Summary

Un novedoso método de preparación de la muestra fue desarrollado para acomodar el cocultivo de células y tejidos para detectar cambio de molécula pequeña usando spectrometry total de la proyección de imagen.

Abstract

Espectrometría de masas (IMS) la proyección de imagen rutinaria se ha aplicado a tres tipos de muestras: tejido, esferoides y colonias microbianas. Estos tipos de muestras se han analizado mediante láser asistida por matriz de desorción/ionización tiempo de vuelo espectrometría de masas (MALDI-TOF MS) para visualizar la distribución de las proteínas, lípidos y metabolitos en muestras biológicas de interés. Hemos desarrollado un método de preparación de la novela muestra que combina las ventajas de las tres aplicaciones anteriores para abordar un enfoque underexplored para la identificación de comunicación química en cáncer, por la siembra de cultivos de células mamíferas en agarosa en cocultivo con tejidos sanos, seguidos de desecación de la muestra. Las células y tejidos de mamíferos son morfología en proximidad cercana, permitiendo la comunicación química a través de la difusión entre el tejido y las células. En momentos específicos, se seca la muestra basado en la agarosa de la misma manera que las colonias microbianas preparado para el análisis IMS. Nuestro método se desarrolló para modelar la comunicación entre el cáncer de ovario seroso de alto grado derivada de la trompa de Falopio como interactúa con el ovario durante la metástasis. Optimización de la preparación de la muestra dio como resultado la identificación de la noradrenalina como un componente clave de la química en el microambiente ovárico. Este nuevo método puede aplicarse a otros sistemas biológicos que requieren una comprensión de la comunicación química entre las células adyacentes o los tejidos.

Introduction

Espectrometría de masas (IMS) de imágenes ha sido optimizada para caracterizar la distribución espacial de características moleculares en tres aplicaciones ampliamente utilizadas: rebanadas de tejido, esferoides y colonias microbianas^1,2,3. Rebanadas de tejido pueden utilizarse para evaluar la localización de los metabolitos en el contexto de las condiciones biológicas en un host, ya sea dirigido o no dirigido dentro de un intervalo específico de masa. Sin embargo, las diferencias entre características moleculares son los más evidentes y significativos comparados con un tejid....

Protocol

Todos los procedimientos animales estaban de acuerdo con directrices para los institutos nacionales de salud para el cuidado y uso de animales de laboratorio y aprobaron por el Comité institucional de Animal de uso y cuidado (IACUC) de la Universidad de Illinois en Chicago.

1. preparación de reactivos

1. Mantener células del epitelio oviducto murino (MOE) a 37° C con 5% CO₂ en una incubadora humidificada en alfa medios medio esencial mínimo (αMEM) suplementados con suero bovino fetal 10% selenio (FBS), 2 mM L-glutamina, 10 mg/mL insulina, transferrina, (ITS) , ng/mL 1.8 factor de crecimiento epidérmico (EGF), 100 U/mL peni....

Results

Una óptimo secada diapositiva ITO tendrá como resultado una plana muestra desecada con mínimo sin arrugas en la superficie de la agarosa y agarosa piezas que mantienen la separación espacial de la diapositiva (figura 3). Figura 3A muestra secado óptimo, mientras que la figura 3B muestra las arrugas que deben ser evitadas. Esta optimización requiere cuidadoso monitoreo de la diapositiva en el horno, c.......

Discussion

Hay un cuerpo creciente de evidencia que implica el papel de la norepinefrina en el HGSOC^12,17,18, y esta técnica ha aportado información más mecanicista. Con al menos ocho condiciones biológicas presentes en la misma diapositiva, el método puede explicar controles biológicos tales como gene y especificidad celular así como controles de los medios de comunicación en un solo IMS. Mientras que el método fue optimizado evaluar inte.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
15 mL Tubos Falcon	Denville	C1017-O	Para recolectar células
Cámara de 8 pocillos (Millipore EZ-slide chamber)	Millipore	PEZGS0816	Reutilizado de Millipore Millicell EZ-slide chamber
Acetonitrile	Sigma-Aldrich	34998-4L	Solvente para matriz pulverizada
Alpha Minimum Essential Medium (α MEM)	Fisher	10-022-CV	Medios de cultivo celular
Velocidad Autoflex MALDI-TOF LRF	Bruker		Para el análisis de datos IMS
Centrífuga	Eppendorf	5810 R	Para recoger células y eliminar el sobrenadante
CHCA Matrix	Bruker Daltonic		8201344 Matrix pulverizado sobre portaobjetos
secos DHB Matrix	Bruker Daltonic	8201346	Matrix pulverizado en portaobjetos secos
Bisturíes desechables	Fisher	22-079-707	Para la extracción de los ovarios
Tijeras de disección	Fisher	13-804-6	Para la extracción de los ovarios
DMEM Media	Gibco	11995-065	Medios mezclados con
agarosa factor de crecimiento epidérmico	Peprotech Inc.	100-15	Suplemento de medios de cultivo celular
Tubos Eppendorf	Genesee Scientific	22-282	Para alícuotas de agarosa
Estradiol-17 y beta;	Simga-Aldrich	E2758	Suplemento de medios de cultivo celular
Suero fetal bovino	Denville	fb5001	Suplemento de medios de cultivo celular
FlexControl 3.4	Bruker Daltonic		software de adquisición de datos IMS
FlexImaging 4.1	Bruker Daltonic		IMS software de análisis de datos
Pinzas (fina)	Fsiher	22-327379	Para la extracción de la
ovarios Gentamicina	Cellgro	30-005-CR	Suplemento de medios de cultivo celular
Insulina, Transferrina, Selenio (ITS)	Sigma-Aldrich	11074547001	Suplemento de medios de cultivo celular
portaobjetos recubierto de ITO	Bruker	8237001	Plataforma para la incubación de cocultivo
Medio L-15 de Leibovitz	Gibco	11415064	medios utilizados durante el tejido disección
L-glutamina	Gibco	25030-081 Suplemento de medios de	cultivo celular
Agarosa de bajo punto de fusión	Sigma-Aldrich	A9414-10G	Mezclado con medios para el recubrimiento
Cuenca	de medios Corning	4870	Se utiliza para cortar divisores de plástico para cámaras divididas
Penicilina-estreptomicina	Gibco	15140-122 Suplemento
de medios de cultivo celularEstándar de calibración de péptidos	Bruker Daltonic	8206195	Calibrante para rango de masa medio
Rojo de fóforo	Sigma-Aldrich	343-242-5G	Calibrante para rango de masa baja
SCiLS Lab 2015 Bruker	Daltonic		Análisis estadístico de datos IMS
Pinza quirúrgica (roma)	Fisher	08-875-8B	Para la extirpación de los ovarios
TFA	Fisher Tecnologías	A116-50	Añadido a la solución de matriz
TM Pulverizador	HTX Tecnologías		Para la aplicación de matriz