Identificación y disección de diversos depósitos de adipose de ratón

Summary

Los adipocitos existen en depósitos discretos y tienen diversos roles dentro de sus microambientes únicos. A medida que se descubren las diferencias regionales en el carácter y la función de los adipocitos, la identificación y el aislamiento estandarizados de los depósitos es crucial para el avance del campo. Aquí, presentamos un protocolo detallado para la escisión de varios depósitos adiposos de ratón.

Abstract

Los tejidos adiposos son órganos complejos con una amplia gama de funciones, incluyendo el almacenamiento y movilización de energía en respuesta a las necesidades locales y globales, el desacoplamiento del metabolismo para generar calor y la secreción de adipolinas para regular la homeostasis de todo el cuerpo y respuestas inmunitarias. La investigación emergente está identificando importantes diferencias regionales en los perfiles de desarrollo, moleculares y funcionales de los adipocitos ubicados en depósitos discretos en todo el cuerpo. Diferentes propiedades de los depósitos son médicamente relevantes ya que las enfermedades metabólicas a menudo demuestran efectos específicos del depósito. Este protocolo proporcionará a los investigadores una guía detallada de atlas anatómicos y disección para la identificación y escisión reproducibles y precisas de diversos tejidos adiposos de ratón. La disección estandarizada de depósitos adiposos discretos permitirá realizar comparaciones detalladas de sus características moleculares y metabólicas y contribuciones a estados patológicos locales y sistémicos en diversas condiciones nutricionales y ambientales.

Introduction

Los tejidos adiposos desempeñan un papel fundamental en la homeostasis de todo el cuerpo, incluido el almacenamiento y la liberación de energía en respuesta a las necesidades locales y mundiales, la termorregulación y la secreción de adipolinas para regular el equilibrio energético, el metabolismo y las respuestas inmunitarias^{1 , 2}. Los adipocitos se distribuyen por todo el cuerpo en depósitos discretos, y en algunos casos cumplen funciones especializadas dentro de sus microambientes^3,4,5. Históricamente, el estudio d....

Protocol

Todos los procedimientos de animales se realizan con la aprobación del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad de Michigan.

1. Eutanización

NOTA: Para este protocolo de vídeo, se utilizan ratones C57BL/6J de 4 a 6 meses de edad.

1. Coloque el ratón en una cámara vaporizadora de isoflurano y ajuste el caudal de isoflurano al 5% o superior. Continúe la exposición al isoflurano hasta un minuto después de que se detenga la respiración. A continuación, retire el ratón de la cámara del vaporizador y confirme la eutanasia utilizando una medida secundaria aproba....

Results

La identificación y el aislamiento exitosos de varios depósitos adiposos de ratón se pueden lograr utilizando el protocolo descrito anteriormente. Las ubicaciones anatómicas brutas de los depósitos subcutáneos (A, E-F), marrones (B), viscerales (C, D, G-J) y popliteal (K) se muestran en la Figura2.

Discussion

A medida que se reconoce cada vez más la importancia de las diversas características moleculares y funcionales de los grupos de adipocitos discretos, es crucial que los investigadores dentro del campo identifiquen y exifren uniformemente los depósitos de adiposo para análisis posteriores. Hasta la fecha, existen pocos protocolos para la localización estandarizada y el aislamiento de la amplia gama de depósitos adiposos de ratón. Los métodos publicados anteriormente se centran principalmente en uno o dos depósitos y carec.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Formalina tamponada neutra al 10 %	Fisher Scientific	22-110-869
Placas de 24 pocillos, sin tratar	Sigma-Aldrich	CLS3738
70 % de etanol (diluido desde el 95 %)	Fisher Scientific	04-355-226
Pinza de disección con puntas curvas	VWR	89259-946
Pan de disección	Carolina Biological Supply Company
Tijeras de disección (punta afilada/roma)	VWR	82027-588
Esponjas de gasa	Vitality Medical	2634	Curity Esponja de gasa de 4 pulgadas x 4 pulgadas, 12 capas
Handi-Pins para disección	Carolina Biological Supply Company	629132
Tijeras de iris (rectas)	VWR	470018-890
Isoflurano	VetOne
Bisturí	VWR	100499-578	Mango de bisturí de plumas con hoja, desechable