Artículo de método

Uso de un acelerador lineal para la realización de experimentos de radiobiología in Vitro

DOI:

10.3791/59514

⸱

26 de mayo de 2019

 ,  ,  , 
1Department of Cancer Biology, Cleveland Clinic, 2Department of Radiation Oncology, Cleveland Clinic

En este artículo

Resumen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Los aceleradores lineales clínicos se pueden utilizar para determinar los efectos biológicos de una amplia gama de tasas de dosis en las células cancerosas. Discutimos cómo establecer un acelerador lineal para ensayos basados en células y ensayos para células similares a tallos de cáncer cultivadas como tumoresferas en suspensión y líneas celulares cultivadas como cultivos adherentes.

Resumen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La radioterapia sigue siendo una de las piedras angulares del tratamiento del cáncer. Para la mayoría de los cánceres, es la terapia no quirúrgica más eficaz para debulk tumores. Aquí, describimos un método para irradiar células cancerosas con un acelerador lineal. El avance de la tecnología de acelerador lineal ha mejorado la precisión y la eficiencia de la radioterapia. Los efectos biológicos de una amplia gama de dosis de radiación y dosis siguen siendo un área de investigación intensa. El uso de aceleradores lineales puede facilitar estos estudios utilizando dosis y dosis clínicamente relevantes.

Introducción

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La radioterapia es un tratamiento eficaz para muchos tipos de cáncer1,2,3,4. La irradiación de tasa de dosis extra alta es relativamente nueva enradioterapia y es posible gracias a los recientes avances tecnológicos en aceleradores lineales 5. Las ventajas clínicas de la tasa de dosis extra alta sobre la irradiación de la tasa de dosis estándar incluyen un tiempo de tratamiento reducido y una mejor experiencia del paciente. Los aceleradores lineales también proporcionan un entorno clínico para los estudios de biología....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Protocolo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Preparación celular para el cultivo celular de suspensión

  1. Cultivo de células similares a gliomas similares a células madre en medios de cultivo de células madre a aproximadamente 5 x 106 células/10 cm en una incubadora de cultivo celular con 5% de CO2,95% de humedad relativa a 37 oC.
    NOTA: La condición de cultivo celular es la misma en todos los procedimientos. Los medios utilizados en el protocolo son medios completos.
  2. Dos días antes de la irradiación programada, recoja las células similares al glioma de la placa de cultivo con una pipeta estéril de 5 ml en un tubo centrífugo de 15 ml en una campana de cultivo.

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Resultados

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Para investigar el efecto del ciclo celular de la dosis estándar y la irradiación de la tasa de dosis extra alta por un acelerador lineal, se prepararon tres muestras de células similares a los tallos de glioma utilizando este protocolo y se recogieron 24 horas después de la irradiación17:una muestra de control que no se irradiaron (Figura2A), una muestra irradiada con 400 MU/min (unidad de monitor, tasa de dosis estándar de 4,2 Gy/min,

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Discusión

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La radioterapia es una parte integral del manejo del cáncer. Los esfuerzos en curso buscan mejorar la eficacia y eficiencia del tratamiento con radiación. Los avances en la tecnología de aceleradores lineales han brindado la oportunidad de tratar a los pacientes con una precisión y seguridad sin precedentes. Debido a que la mayoría de los pacientes son tratados con rayos X de alta energía de aceleradores lineales, los estudios que examinan los efectos biológicos de una amplia gama de tasas de dosis realizadas en acelerad.......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Divulgaciones

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Agradecemos al Departamento de Oncología Radioterápica de la Clínica Cleveland por el uso de los aceleradores lineales. Agradecemos al Dr. Jeremy Rich por su generoso don de células similares a los tallos de glioma. Esta investigación fue apoyada por la Clínica Cleveland.

....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Material
glioma similar a un glioma 387regalo del Dr. Jeremy Rich
293 célulasATCCCRL-1573
medios de cultivo de células madre neuronalesThermo Fisher Scientific21103049Medios NeurobasalTM
DMEMThermo Fisher Scientific10569044
Suero fetal bovinoThermo Fisher Scientific16000044
Penicilina/EstreptomicinaThermo Fisher Scientific15140-122
Proteína EGF humana recombinanteR& D Systems236-EG-01M
FGF humano recombinante básicoR& D Sistemas4114-TC-01M
B-27 y comercio; SuplementoThermo Fisher Scientific17504044
Piruvato de sodioThermo Fisher Scientific11360070
L-glutaminaThermo Fisher Scientific25030164
Tripsin-EDTAThermo Fisher 25200056
matriz de proten extracelularCorning354277MatrigelTM
EtanolFisher químicoA4094
Equipo
10 cm placa de cultivo celularDenvilleT1110
3,5 cm placa de cultivo celularUSA Scientific Inc.CC7682-3340
Cubierta de vidrio de 22x22 mm Deslizamientode microscopía electrónica Sciences72210-10
Tubo de centrífuga de 15 mlThomas Scientific1159M36
Tubo de centrífuga de 50 mlThomas Scientific1158R10
Pipeta de 5 mlFisher Scientific14-955-233
ayuda para pipetasFisher Scientific13-681-06
Mezclador de vórticeFisher Scientific02-215-414
CentrífugaEppendorf5810R
Acelerador linealVariann/a
aguaSun Nuclear corporation557Agua sólidaTM
Preparación de reactivos
DMEM media10% suero fetal bovino (FBS), 2 mM L-glutamina, 100 unidades/mL de penicilina G, 100 y micro; g/mL de estreptomicina en 500 ml de DMEM medio
cultivo de células madre10 ml B27 suplemento, 20 & g hFGF, 20 y micro; g hEGF, 2 mM L-glutamina, 100 unidades/mL de penicilina G, 100 y micro; g/mL de estreptomicina en 500 ml de medios
material equivalente al de neurobasales

Referencias

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Stupp, R., et al. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. The New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).
  2. Stupp, R., et al.

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Reimpresiones y permisos

Solicitar permiso para reutilizar el texto o las figuras de este artículo de JoVE

Solicitar permiso

Etiquetas

Radioterapiairradiaci n celularan lisis de la tasa de dosispreparaci n de cultivos celularesc lulas madre de gliomaan lisis del ciclo celularc lculos dosim tricosconfiguraci n de la sala de tratamientomaterial equivalente al agua

Artículos relacionados