Proporcionamos un método simple y eficiente para trasplantar 2'-deoxyguanosine tratado E18.5 timo en la cápsula renal de un ratón desnudo. Este método debe ser un iida en el estudio de la función de células epiteliales timmicas y la maduración de las células T.
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Artículo de método
Trasplante subcapsular renal de timo embrionario murino tratado con 2'-desoxiguanosina en ratones desnudos
En este artículo
Resumen
Resumen
El timo es un importante órgano inmune central, que desempeña un papel esencial en el desarrollo y diferenciación de los células T. El trasplante de timo es un método importante para investigar la función de las células epiteliales timmicas y la maduración in vivo de las células T. Aquí describiremos los métodos experimentales utilizados dentro de nuestro laboratorio para trasplantar 2'-deoxyguanosina (para agotar los linfocitos del donante) timo embrionario tratado en la cápsula renal de un ratón desnudo atímico. Este método es simple y eficiente y no requiere habilidades o dispositivos especiales. Los resultados obtenidos a través de este sencillo método mostraron que el timo trasplantado puede apoyar eficazmente la producción de células T del receptor. Además, se aclararán varios puntos clave con respecto al protocolo.
Introducción
El timo es el órgano inmune central, dentro del timo timi citocitos se someten a una selección positiva y negativa, y se convierten en células T maduras1,2. La selección positiva o negativa anormal da como resultado inmunodeficiencias o patologías autoinmunes respectivamente3,4. Por lo tanto, el trasplante de órganos de timo es un enfoque importante para estudiar el proceso de selección de células T en el timo del donante. Este método es particularmente crucial cuando se analiza la función epitelial timmica mediada por mutaciones genéticas que causan f....
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Protocolo
El protocolo presentado se adhiere a las directrices del comité de ética de la Universidad de Jinan con respecto al cuidado de los animales.
NOTA: Los materiales utilizados se enumeran en la Tabla de materiales.
1. Aislamiento del timo embrionario
- Autoclave todos los instrumentos quirúrgicos antes del experimento, y esterilizar el banco / campana con 70% etanol.
- Usando dióxido de carbono, anestetiza y eutanasia al ratón hembra embarazada (18,5 días después del apareamiento exitoso). Luego limpie la región abdominal con 70% de etanol.
NOTA: Aquí nos acoplamo....
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Resultados
Aquí mostramos el timo aislado E18.5 que contiene dos lóbulos completos (Figura1). Además, mostramos la aguja de la vena del cuero cabelludo que fue recortada para formar un bisel en el tubo de perfusión (Figura2). A continuación, también mostramos una imagen representativa de la posición del timo que se trasplantó en la cápsula renal (Figura3A)y el timo después de 8 semanas de crecimiento dentro de los ratones receptores (Figura
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Discusión
El trasplante subcapsular renal del timo embrionario es un método importante para estudiar la función de las células epiteliales timmicas y el proceso de maduración de las células T in vivo. Aunque existen varios estudios experimentales sobre cultivo deórganos de timo embrionario y trasplante 6,7, nuestro protocolo proporciona un procedimiento alternativo simple sobre el cultivo del timo embrionario murino y subcapsular renal trasplante para tejido timo más antig.......
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Divulgaciones
No se declaran conflictos de intereses.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el Paquete De Inicio de la Universidad Jinan a S.J. y por el Programa de Ciencia y Tecnología de Guangzhou China (Grant No. 201704020209 a S.J.). Agradecemos a Amy Botta (Departamento de Biología, Universidad de York, Toronto, ON M3J 1P3, Canadá) por la corrección y edición del manuscrito.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 0.5% Povidona yodada | Shanghai Likang Desinfectante Hi-Tech Co.Ltd | 20171113 | |
| Inyección de cloruro de sodio al 0.9% | Shandong Qilu Pharmaceuyical Co.Ltd | 2C17112101 | |
| 1 mL Jeringa estéril | Solarbio | YA1090 | |
| 2'-Desoxiguanosina | MEC | HY-17563 | 1M en DMSO, 1:800 usando (final 1.25mM) |
| 24 Placa de pocillos | Corning Incorporated | Costar 3524 | |
| 4-0 Agujas quirúrgicas de sutura con hilo | NingBo Cheng-He Microsurgical Instruments Factory China | YY0166-2002 | |
| 60mm Placa de cultivo celular | Corning Incorporated | 430166 | |
| 70% ETOH | LIRCON | 20181221 | |
| APC anticuerpos anti-ratón CD8a | Biolegend | 100711 | 1:100 |
| Pinzas finas de punta doblada, JZ 10 cm | Shanghai Medical Devices Group Co., Ltd. | JD1060 | Para esterilizar antes de usar |
| Cefmetazol Sódico para inyección | Sichuan Hexin Pharmaceutical Co, Ltd | 17062111 079 | 6 mg en 0,5 ml de solución de NaCl al 0,9%, 7,5 ul / g de peso corporal |
| Tijeras de disección, JZ 10 cm | Shanghai Medical Devices Group Co., Ltd. | JC2303 | Para esterilizar antes de usar |
| Suero fetal bovino (FBS? | GIBCO | 10270-106 | |
| Pinzas finas, JZ 10 cm | Shanghai Medical Devices Group Co., Ltd. | JD1050 | Para esterilizar antes de usar |
| Citometría de flujo | BD | FACSCanto II | |
| Flunixin meglumina | MACLIN F810147 | 1 mg en solución de 1 ml de NaCl al 0,9 %, peso corporal de 2 ul/g | |
| Pinzas, Dumont#5 | World Precision Instruments | 14098 | Para esterilizar antes de usar |
| Lámpara infrarroja | OTLAN | MT-810 | |
| Portaagujas, JZ 14 cm | Shanghai Dispositivos Médicos Grupo Co., Ltd. | J32010 | Para esterilizar antes de usar |
| PE anti-ratón CD4 Biolegend | 100511 | 1:100 | |
| Mezcla de penicilina-estreptomicina | GIBCO | 15140122 | 1:100 |
| Sal sódica de pentobarbital | Sigma | P3761 | solución al 1,5% en PBS, 75ug/g de peso corporal |
| RPMI1640 Medio | GIBCO | C14-11875-093 | |
| Aguja para venas | del cuero cabelludoShanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd | XC001 | |
| Tijeras de resorte | VANNAS | S11014-12 | Para esterilizar antes de usar |
| microscopio estereoscópico | OLYMPUS | SZ61 | |
| Hisopo de algodón estéril de 15 cm | Guangzhou Haozheng 20150014 | ||
| Gasa estéril 5 cm x 7 cm-8P | Guangzhou Haozheng 20172640868 | ||
| PBS estéril (1x) | Pinzas de tejido GENOM | GNM20012 | |
| , JZ 12,5 cm | Shanghai Medical Devices Group Co., Ltd. | J41010 | Para esterilizar antes de usar |
Referencias
- Klein, L., Kyewski, B., Allen, P. M., Hogquist, K. A. Positive and negative selection of the T cell repertoire: what thymocytes see (and don't see). Nature Reviews Immunology. 14, 377-391 (2014).
- Hogquist, K. A., Baldwin, T. A., Jameson, S. C.
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Reimpresiones y permisos
