Descriviamo in dettaglio un modello tumorale del cancro colorettale clinicamente rilevante (CRLM) e l’influenza della reperfusione di ischemia epatica (I/R) nella crescita tumorale e nella metastasi. Questo modello può aiutare a comprendere meglio i meccanismi alla base della promozione metastatica del fegato indotta da un intervento chirurgico.
L’ischemia e la lesione da reperfusione (I/R) del fegato, una sfida clinica comune, rimane un inevitabile processo patofisiologico che ha dimostrato di indurre danni multipli ai tessuti e agli organi. Nonostante i recenti progressi e gli approcci terapeutici, la morbilità generale è rimasta insoddisfacente soprattutto nei pazienti con anomalie parenchyliche sottostanti. Nel contesto della crescita aggressiva del cancro e della metastasi, si sospetta che l’I/R chirurgico sia il promotore che regola la ricorrenza del tumore. Questo articolo ha lo scopo di descrivere un modello murino clinicamente rilevante di E-R e metastasi epatica del fegato. In tal modo, miriamo ad aiutare altri ricercatori a stabilire e perfezionare questo modello per la loro pratica di ricerca di routine per comprendere meglio gli effetti del fegato I/R sulla promozione delle metastasi epatiche.
Il fegato è uno dei siti più comuni per lo sviluppo della malattia metastatica1. La mortalità è quasi invariabilmente attribuibile a complicazioni associate alla crescita del tumore nel fegato. Nei pazienti con tumori solidi metastatici nel fegato, l’intervento chirurgico rimane un intervento cruciale per il controllo della malattia e un possibile approccio curativo. Tuttavia, la stragrande maggioranza dei pazienti in ultima analisi presenta una malattia ricorrente, prevalentemente nel fegato2,3. Durante la chirurgia epatica, il sanguinamento intraoperatorio è comune, spesso richiede la trasfusione di sangue e diversi approcci tecnici per il controllo del sanguinamento, compresi i metodi di bloccaggio vascolare. Tuttavia, tali misure causano ischemia/reperfusione epatica (I/R) al tessuto epatico. Gli effetti negativi dell’I/R sulla funzione epatocellulare sono stati ben documentati. L’insulto I/R del fegato accende le cascate infiammatorie durante il ripristino del flusso sanguigno attraverso vie infiammatorie4. Non solo la lesione epatica da I/R contribuisce all’insufficienza epatica, ma le prove attuali dimostrano anche che la lesione da I/R stimola l’adesione delle cellule tumorali e promuove l’incidenza della formazione di metastasi e la crescita della malattia micrometastatica esistente5. Abbiamo già riferito che lo stress chirurgico induce l’attivazione di cellule immunitarie che non solo aiuta nella crescita del tumore primario, ma facilita anche le metastasi catturando le cellule tumorali all’interno della circolazione6.
Qui descriviamo in dettaglio una tecnica per stabilire un modello di tumore del topo metastasi epatica. In questo modello, presentiamo anche un metodo per indurre lesioni da reperfusione di ischemia epatica che agisce come un surrogato allo stress chirurgico presente clinicamente durante le epatitectomie. I metodi combinati di iniezione del cancro e I/R epatico possono interpretare con successo lo sviluppo del CRLM in pazienti che hanno subito la resezione tumorale primaria.
Il modello animale descritto in questo manoscritto si basa su due approcci principali. Il primo è quello di riconoscere la capacità delle cellule tumorali di localizzare e proliferare nei lobi del fegato. Il secondo è quello di studiare l’effetto della lesione di reperfusione ischemia epatica che influenza la crescita del tumore e le metastasi. Questo modello consente lo studio pertinente delle metastasi epatiche in assenza di metastasi secondarie in un topo immunocompetente. Il modello è utile per affrontare le ques…
The authors have nothing to disclose.
Gli autori ringraziano Sara Minemyer e Alexander Comerci per la revisione linguistica.
Dulbecco's Modified Eagle Medium | Lonza | 12-614F | |
Fetal Bovine Serum | Lonza | 900-108 | |
L-Glutamin | Gibco | 25030-081 | |
Penicilin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
Stretomysin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
HEPES | Fisher Scientific | SH3023701 | |
Trypsin | Hyclone | sh30042.02 | |
Cell culture Flask 75cm | 5 Cells Star | 658170 | |
15ml PP Conical Tubes | BioExcell | 41021037 | |
Trypan Blue Stain | Giibco | 15250-061 | |
Gauze | Fisherbrand | 1376152 | |
Cautry | Bovie | AA01 | |
Microvascular clamp | Finescience tools | 18055-03 | |
Micro-Serrefine clamp applicator with lock | Fine science toosl | FST-18056-14 | |
Spring scissor | Fine science toosl | FST-15021-15 | |
Vessel Dilator | Fine science toosl | FST-00276-13 | |
Magnetic fixator Retraction system | Fine science toosl | FST-18200020 | |
Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11019-12 | |
Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11018-12 | |
4-0 polypropylene suture | Ethicon | K881H | |
Needle holder | Harvard Apparatus | 72-8826 | |
Heating Pad | Fisher scientific | 1443915 | |
Clipper | Oster | 559A | |
Povidone-Iodine solution | Medline | MDS093945 | |
Syringe 1ml 25G | BD safety Glide | 305903 | |
Insulin syringe 0.5 ml | BD insulin Syringes | 32946 | |
Cotton -Tipped Applicator | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
Surgical Microscope | Leica | LR92240 | |
Mycoplasma Elisa Kit | Roche | 11663925910 | |
Ketamine | Putney | #056344 | |
Xylazine | NADA | #139-236 | |
ALT strip | Heska | 15809554 | |
AST strip | Heska | 15809542 | |
LDH strip | Heska | 15809607 |