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Artículo de método

Evaluación de comportamientos fotosintéticos mediante mediciones simultáneas de la reflectancia de la hoja y análisis de fluorescencia de clorofila

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DOI:

10.3791/59838

9 de agosto de 2019

En este artículo

Resumen

Describimos un nuevo enfoque técnico para estudiar las respuestas fotosintéticas en plantas superiores que implica mediciones simultáneas de clorofila una fluorescencia y la reflectancia de las hojas utilizando un PAM y un radiómetro espectral para la detección de señales de la misma zona de la hoja en Arabidopsis.

Resumen

Clorofila un análisis de fluorescencia se utiliza ampliamente para medir los comportamientos fotosintéticos en plantas intactas, y ha dado lugar al desarrollo de muchos parámetros que miden eficientemente la fotosíntesis. El análisis de la reflectancia de la hoja proporciona varios índices de vegetación en ecología y agricultura, incluyendo el índice de reflectancia fotoquímica (PRI), que se puede utilizar como un indicador de disipación de energía térmica durante la fotosíntesis porque se correlaciona con temple no fotoquímico (NPQ). Sin embargo, puesto que el NPQ es un parámetro compuesto, su validación se requiere para entender la naturaleza del parámetro PRI. Para obtener evidencia fisiológica para la evaluación del parámetro PRI, medimos simultáneamente la fluorescencia de clorofila y la reflectancia de las hojas en las plantas mutantes defectuosas del ciclo de xantofilina (npq1) y Arabidopsis de tipo silvestre. Además, el parámetro qZ, que probablemente refleja el ciclo de xantofila, se extrajo de los resultados del análisis de fluorescencia de clorofila mediante el monitoreo de la cinética de relajación de NPQ después de apagar la luz. Estas mediciones simultáneas se llevaron a cabo utilizando un fluorómetro de clorofila de modulación de amplitud de pulso (PAM) y un radiómetro espectral. Las sondas de fibra de ambos instrumentos se colocaron cerca unade según la otra para detectar señales desde la misma posición de la hoja. Se utilizó una fuente de luz externa para activar la fotosíntesis, y las luces de medición y la luz saturada se proporcionaron desde el instrumento PAM. Este sistema experimental nos permitió monitorear el PRI dependiente de la luz en la planta intacta y reveló que los cambios dependientes de la luz en PRI difieren significativamente entre el tipo salvaje y el mutante npq1. Además, PRI estaba fuertemente correlacionado con qZ, lo que significa que qZ refleja el ciclo de xantofila. En conjunto, estas mediciones demostraron que la medición simultánea de la reflectancia de las hojas y la fluorescencia de clorofila es un enfoque válido para la evaluación de parámetros.

Introducción

La reflectancia de la hoja se utiliza para detectarremotamente índices de vegetación que reflejan la fotosíntesis o rasgos en las plantas 1,2. El índice de vegetación de diferencia normalizada (NDVI), que se basa en señales de reflexión infrarroja, es uno de los índices de vegetación más conocidos para la detección de propiedades relacionadas con la clorofila, y se utiliza en la ecología y las ciencias agrícolas como indicador de respuestas ambientales en árboles o cultivos3. En estudios de campo, aunque se han desarrollado y utilizado muchos parámetros (por ejemplo, índice de clorofila....

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Protocolo

1. Cultivo de plantas de Arabidopsis

  1. Remojar las semillas de Arabidopsis thaliana en agua desionizada esterilizada en un microtubo, e incubar durante 2 días a 4oC en la oscuridad.
  2. Coloque aproximadamente cuatro de las semillas imbibebe, tratadas en frío en la superficie del suelo utilizando una micropipette. Incubar las macetas plantadas en una cámara de crecimiento con una luz de 16 h (120 mmol fotones m–2 s–1) y 8 h de período oscuro a 22oC y 20oC, respectivamente.
  3. Cultivar una planta por maceta adelgazando otras plántulas después de la germinación. Preparen al menos cinco ollas. Incubar las plantas en la ....

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Resultados

La Figura 1 presenta un diagrama esquemático de la configuración experimental para medir simultáneamente la fluorescencia de clorofila y la reflectancia de las hojas. Las sondas de fibra del PAM y el radiómetro espectral se fijaron perpendicularmente a la superficie de la hoja en el soporte de la hoja en la etapa de muestra hecha a medida, y se utilizó una lámpara halógena para la irradiación de luz actínica desde ambas direcciones izquierda y derecha sin lan.......

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Discusión

En este estudio, obtuvimos evidencia adicional para demostrar que PRI representa pigmentos de xantofila midiendo simultáneamente la fluorescencia de clorofila y la reflectancia de las hojas.

Una luz halógena, que tiene longitudes de onda similares a la luz solar, fue adaptada para su uso como fuente de luz actínica para activar la fotosíntesis. Inicialmente usamos una fuente de luz LED blanca para evitar daños térmicos de la superficie de la hoja, pero esto produjo cinética de relajación lenta.......

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Divulgaciones

El autor no tiene nada que revelar.

Agradecimientos

Agradecemos al Dr. Kouki Hikosaka (Universidad de Tohoku) por estimular las discusiones, la asistencia con un espacio de trabajo e instrumentos para experimentos. La obra fue apoyada en parte por KAKENHI [números de subvención 18K05592, 18J40098] y la Fundación Naito.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Fuente de luz halógenaOptoSigmaSHLA-150
Medidor cuántico de luzLI-CORLI-1000
PAM fluorímetro de clorofilaWalzJUNIOR-PAM
PAM software de controlWalzWinControl-3.27
Reflectancia estándarLabsphere, Inc.SRT-99-050
Radiómetro espectralADS Inc.Field Spec3
Software de control de radiómetro espectralADS Inc.RS3

Referencias

  1. Xue, J., Su, B. Significant remote sensing vegetation indices: A review of developments and applications. Journal of Sensors. 1353691, (2017).
  2. Cotrozzi, L., Townsend, P. A., Pellegrini, E., Nali, C., Couture, J. J.

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

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