El protocolo actual describe métodos para establecer modelos de xenoinjerto sorinjertos derivados del paciente (PDX) y líneas celulares primarias de cáncer a partir de muestras de cáncer gástrico quirúrgico. Los métodos proporcionan una herramienta útil para el desarrollo de fármacos y la investigación de la biología del cáncer.
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Artículo de método
Establecimiento de modelos de xenoinjerto saqueos derivados del paciente y líneas celulares primarias
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Resumen
Resumen
El uso de modelos preclínicos para avanzar en nuestra comprensión de la biología tumoral e investigar la eficacia de los agentes terapéuticos es clave para la investigación del cáncer. Aunque hay muchas líneas celulares de cáncer gástrica establecidas y muchos modelos de ratón transgénicos convencionales para la investigación preclínica, las desventajas de estos modelos in vitro e in vivo limitan sus aplicaciones. Debido a que las características de estos modelos han cambiado en la cultura, ya no modelan la heterogeneidad tumoral, y sus respuestas no han sido capaces de predecir respuestas en humanos. Por lo tanto, se están desarrollando modelos alternativos que representan mejor la heterogeneidad tumoral. Los modelos de xenoinjerto sorinjertos derivados del paciente (PDX) preservan la apariencia histológica de las células cancerosas, conservan la heterogeneidad intratumoral y reflejan mejor los componentes humanos relevantes del microambiente tumoral. Sin embargo, por lo general toma 4-8 meses para desarrollar un modelo de PDX, que es más largo que la supervivencia esperada de muchos pacientes gástricos. Por esta razón, establecer líneas celulares primarias de cáncer puede ser un método complementario eficaz para los estudios de respuesta a fármacos. El protocolo actual describe los métodos para establecer modelos PDX y líneas celulares primarias de cáncer a partir de muestras quirúrgicas de cáncer gástrico. Estos métodos proporcionan una herramienta útil para el desarrollo de fármacos y la investigación de la biología del cáncer.
Introducción
El cáncer gástrico es el quinto cáncer más común en todo el mundo y la tercera causa de muerte por cáncer. En 2018, más de 1.000.000 nuevos casos de cáncer gástrico fueron diagnosticados en todo el mundo, y se estima que 783.000 personas murieron por esta enfermedad1. La incidencia y mortalidad del cáncer gástrico sigue siendo muy alta en los países del noreste de Asia2,3. A pesar de los progresos significativos en el campo de las terapias oncológicas, el pronóstico de los pacientes con cáncer gástrico avanzado sigue siendo deficiente, con una tasa de supervivencia de cinco años de apro....
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Protocolo
Este estudio humano fue aprobado por la Junta de Revisión de la Etica Institucional del Centro Oncológico de la Universidad Sun Yat-sen (SYSUCC, Guangzhou, China). El estudio en animales fue aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso Animal de la Universidad Sun Yat-sen. Nota: todos los experimentos se realizaron de conformidad con las leyes y directrices institucionales pertinentes, incluida la Orientación para la protección de la exposición ocupacional contra patógenos transmitidos por la sangre.
1. Preparación de la muestra
- Obtener los tejidos del cáncer gástrico (paso 0 de P0) directamente de la operación. La muestr....
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Resultados
Aquí, los tejidos tumorales de una operación se conservaron en solución en stock hasta el siguiente paso. En 4 horas, los tejidos tumorales fueron cortados en trozos pequeños e implantados en los flancos dorsales de ratones NSG que habían sido anestesiados usando algodón empapado de isoflurano. Los tumores de más de 1 cm3 podrían ser resecadas para su implantación en nuevos ratones (Figura1)o cortadas cuidadosamente y conservadas en nitrógeno líquido siguiendo el protocolo. En est.......
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Discusión
El cáncer gástrico es una enfermedad agresiva con opciones terapéuticas limitadas; así, los modelos de cáncer gástrico se han convertido enun recurso crítico para permitir estudios de investigación funcional con traducción directa a la clínica 4,8,17. Aquí, hemos descrito los métodos y protocolos para establecer modelos de PDX de cáncer gástrico y líneas celulares primarias. Es importante destacar que las características morfoló.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81572392); el Programa Nacional De Investigación y Desarrollo Clave de China (2016YFC1201704); Consejo científico y técnico innovador jóvenes talentos del Programa de Apoyo Especial de Guangdong (2016TQ03R614).
Agradecemos específicamente a Guangzhou Sagene Biotech Co., Ltd. por su ayuda en la preparación de las cifras.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 40 μ m Filtro de células | Biologix, Shandong, China | 15-1040 | |
| Microscopio biológico | OLYMPUS, Tokio, Japón | Centrífuga OLYMPUS CKX41 | |
| Eppendorf, Mittelsachsen, Alemania. | 5427R | ||
| Incubadora de CO2 | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, EE. UU. | HERACELL 150i | |
| DPBS | Basalmedia Technology, Shanghái, China | L40601 | |
| Gabinete de agua electrotermostático | Yiheng, Shanghái, China | DK-8AXX | |
| Suero fetal bovino | Wisent Biotechnology, Vancouver, Canadá | 86150040 | |
| Isoflurano | Baxter, China | CN2L9100 | |
| Kit de tejido vivo Kit criogénico Celliver | Biotechnology, Shanghai, China | LT2601 | |
| Kit de descongelación de tejido vivo | Celliver Biotechnology, Shanghai, China | LT2602 | |
| NSG | Biocytogen, Beijing, China | B-CM-002-4-5W | |
| Penicilina& estreptomicina | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, EE. UU. | 15140122 | |
| Tampón de lisis de glóbulos rojos | Solarbio, Pekín, China | R1010 | |
| RPMI-1640 medio | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, EE. UU. | 8118367 | |
| Agujas de sutura quirúrgica con hilo | LingQiao, Ningbo, China | 3/8 arco 4× 10 | |
| Moldes y cuchillas auxiliares procesados por tejidos | Celliver Biotechnology, Shanghái, China | LT2603 | |
| Tripsina-EDTA | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, EE. UU. | 2003779 | |
| Colagenasa tipo 1 | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, EE. UU | 17100017 |
Referencias
- Bray, F., et al. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. Ca-a Cancer Journal for Clinicians. 68 (6), 394-424 (2018).
- Sugano, K.
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Reimpresiones y permisos
