Aquí, presentamos un protocolo de trasplante aórtico heterotópico en ratones utilizando la técnica del manguito no sutura en un modelo de murina cervical. Este modelo se puede utilizar para estudiar la patología subyacente de la vasculopatía por aloinjerto crónico (CAV) y puede ayudar a evaluar nuevos agentes terapéuticos para prevenir su formación.
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Artículo de método
Modelo de trasplante de aórtica cervical murino utilizando una técnica de manguito no sutura modificada
En este artículo
Resumen
Resumen
Con la introducción de potentes protocolos inmunosupresores, se pueden realizar diferentes avances en la prevención y terapia de episodios de rechazo agudo. Sin embargo, sólo se pudo observar una mejora menor en los resultados a largo plazo de los órganos sólidos trasplantados en las últimas décadas. En este contexto, la vasculopatía por aloinjerto crónico (CAV) sigue representando la principal causa de insuficiencia orgánica tardía en el trasplante cardíaco, renal y pulmonar.
Hasta ahora, la patogénesis subyacente del desarrollo de CAV sigue sin estar clara, explicando por qué actualmente faltan estrategias de tratamiento eficaces y haciendo hincapié en la necesidad de modelos experimentales pertinentes para estudiar la fisiopatología subyacente que conduce a Formación de CAV. El siguiente protocolo describe un modelo de trasplante aórtico cervical heterotópico murino utilizando una técnica de manguito no sutura modificada. En esta técnica, un segmento de la aorta torácica se interposiciona en la arteria carótida común derecha. Con el uso de la técnica del manguito no sutura, se puede establecer un modelo fácil de aprender y reproducible, minimizando la posible heterogeneidad de las micro anastomosas vasculares suturadas.
Introducción
En las últimas seis décadas, el trasplante de órganos sólidos ha evolucionado de un procedimiento experimental a un estándar de atención para el tratamiento de la insuficiencia orgánica terminal1. Debido a la mejora de los agentes antimicrobianos, las técnicas quirúrgicas y el avance en los regimientos inmunosupresores, la tasa de éxito temprana del trasplante de órganos sólidos ha aumentado significativamente en las últimas décadas2.
Sin embargo, las tasas de supervivencia del injerto a largo plazo no han mejorado significativamente de la misma manera3. El desarrollo d....
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Protocolo
Todos los experimentos se realizaron de acuerdo con las directrices de la ley alemana de bienestar animal (TierSchG.) (AZ: 55.2-1-54-2532.Vet_02-80-2015).
1. Alojamiento animal
- Para experimentos, utilice ratones machoC57BL/6 y BALB/c que pesen 20-25 g con ratones C57BL/6 como animales receptores y ratones BALB/c como animales donantes.
- Comprar los animales y la casa en una instalación libre de patógenos de barrera, de acuerdo con las directrices de FELASA para el monitoreo de la salud12.
- Mantenga a los ratones en jaulas estándar de Makrolon con material de anidamiento de enriquecimiento.....
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Resultados
En el modelo de trasplante totalmente mHC-no coincidente, se puede ver una capa neointimal concéntrica 4 semanas después del trasplante(Figura 2). Esta capa consiste principalmente en células musculares lisas vasculares como la tinción inmunohistológica para SM22 (un marcador selectivo para las células musculares lisas vasculares maduras) revelado. Como se indicó anteriormente, estas células musculares lisas vasculares son patognomónicas para las lesiones que se ven en la vasculopatía de alo.......
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Discusión
La vasculopatía crónica de aloinjerto es la principal causa de pérdida tardía del injerto después del trasplante de órganos sólidos del corazón y probables aloinjertos renales y pulmonares8. Hasta el momento, no se podría desarrollar ningún régimen terapéutico causal para prevenir la formación de CAV.
La fisiopatología de CAV es multifactorial e implica aspectos inmunológicos y no inmunológicos16. El uso de modelos de roedores en trasplantes ha s.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Ratones Balb-c (H2-d) | Cepa del río Charles | # 028 | Animal donante |
| Sistema de cauterio bipolar | ERBE | ICC 50 / 20195-023 | Cauterio bipolar |
| C57BL/6J (H-2b) | Cepa del río Charles | # 027 | Animal receptor |
| Halsey Portaagujas | FST | 12501-12 | |
| Pinzas para mosquitos Halsted | AESCULAP | BH111R | Abrazadera curva |
| Tubo de poliimida médica | Nordson MEDICAL | 141-0031 | Material del manguito |
| Micro Serrefines | FST | 18055-04 | Micro Clip para Vasos Micro-Adson |
| Pinzas (dentadas) | FST | 11018-12 | Pinzas estándar |
| Pinza Micro-Serrefine Pinza de Aplicación | FST | 18057-14 | Clipapplicator |
| S& Pinzas en T - Puntas SuperGrip (en ángulo 45 grados) | S& T | 00649-11 | Pinzas finas |
| S& Pinzas de dilatación para vasos en T - Angulado 10° (Diámetro de la punta 0,2 mm) | S& T | 00125-11 | Dilatador de recipientes |
| Schott VisiLED Set | Schott | MC 1500 / S80-55 | |
| Microscopio estereoscópico | óptico ZEISS | SteREO Discovery.V8 | Microscopio |
| Student Tijeras finas / tijeras quirúrgicas - afiladas-romas | FST | 91460-11 / 14001-12 | Tijeras estándar |
| Vannas-Tü Tijeras de muelle bingen (curvas, 8,5 cm) | FST | 15004-08 | Microsisjeras (curvas) |
| Vannas-Tü bingen Tijeras de muelle (rectas, 8,5 cm) | FST | 15003-08 | Microsisjeras (rectas) |
Referencias
- Rana, A., et al. Survival benefit of solid-organ transplant in the United States. JAMA Surgery. 150 (3), 252-259 (2015).
- Rana, A., Godfrey, E. L. Outcomes in Solid-Organ Transplantation: Success and Stagnation. Texas Heart Institute Journal. ....
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Reimpresiones y permisos
