Artículo de método

Litografía de haz de iones enfocado a etch nano-arquitecturas en microelectrodos

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DOI:

10.3791/60004

19 de enero de 2020

En este artículo

Resumen

Hemos demostrado que el grabado de nanoarquitectura en dispositivos de microelectrodos intracorticales puede reducir la respuesta inflamatoria y tiene el potencial de mejorar las grabaciones electrofisiológicas. Los métodos descritos aquí describen un enfoque de nanoarquitecturas de etch en la superficie de microelectrodos intracorticales de silicio de vástago único no funcionales y funcionales.

Resumen

Con los avances en electrónica y tecnología de fabricación, los microelectrodos intracorticales han experimentado mejoras sustanciales que permiten la producción de sofisticados microelectrodos con mayor resolución y capacidades ampliadas. El progreso en la tecnología de fabricación ha apoyado el desarrollo de electrodos biomiméticos, que tienen como objetivo integrarse perfectamente en el parénquima cerebral, reducir la respuesta neuroinflamatoria observada después de la inserción del electrodo y mejorar la calidad y longevidad de las grabaciones electrofisiológicas. Aquí describimos un protocolo para emplear un enfoque biomimético recientemente clasificado como nano-arquitectura. El uso de litografía de haz iónico focalizado (FIB) se utilizó en este protocolo para grabar características de nanoarquitectura específicas en la superficie de microelectrodos intracorticales de vástago único no funcionales y funcionales. La entrada en nanoarquitecturas en la superficie del electrodo indicó posibles mejoras de biocompatibilidad y funcionalidad del dispositivo implantado. Uno de los beneficios de utilizar FIB es la capacidad de grabar en dispositivos fabricados, a diferencia de durante la fabricación del dispositivo, facilitando posibilidades ilimitadas para modificar numerosos dispositivos médicos post-fabricación. El protocolo presentado en este documento se puede optimizar para varios tipos de materiales, características de nanoarquitectura y tipos de dispositivos. Aumentar la superficie de los dispositivos médicos implantados puede mejorar el rendimiento del dispositivo y la integración en el tejido.

Introducción

Los microelectrodos intracorticales (IME) son electrodos invasivos que proporcionan un medio de interconexión directa entre los dispositivos externos y las poblaciones neuronales dentro de la corteza cerebral1,2. Esta tecnología es una herramienta invaluable para registrar potenciales de acción neuronal para mejorar la capacidad de los científicos para explorar la función neuronal, avanzar en la comprensión de las enfermedades neurológicas y desarrollar terapias potenciales. El microelectrodo intracortical, utilizado como parte de los sistemas de interfaz de máquina cerebral (IMC), permite registrar potenciale....

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Protocolo

NOTA: Realice los siguientes pasos mientras usa el equipo de protección personal adecuado, como una capa de laboratorio y guantes.

1. Montaje de la sonda de silicio no funcional para la litografía del haz de iones focalizado (FIB)

NOTA: Para el procedimiento completo que describe la fabricación de la oblea SOI con las 1.000 sondas, consulte Ereifej et al.39.

  1. Aísle una tira de 2-3 sondas de silicio del silicio en la oblea aislante (SOI) que contiene 1.000 sondas. No haga tiras que contengan más de tres sondas de silicio. Esto puede aumentar las posibilidades de un montaje suelto y....

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Resultados

FIB Grabado Nano-arquitectura en las superficies de las sondas intracorticales de un solo vástago
Utilizando los métodos descritos aquí, las sondas intracorticales fueron grabadas con nanoarquitecturas específicas siguiendo los protocolos establecidos39. Las dimensiones y la forma del diseño de nanoarquitectura descrito en estos métodos se implementaron a partir de resultados in vitro anteriores que representan una disminución en la reactividad de las células gliales cuando se .......

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Discusión

El protocolo de fabricación descrito aquí utiliza litografía de haz iónico focalizado para grabar de manera efectiva y reproducible nanoarquitecturas en la superficie de microelectrodos de silicio de un solo vástago no funcionales y funcionales. La litografía de haz iónico focalizado (FIB) permite la ablación selectiva de la superficie del sustrato mediante el uso de un haz de iones finamente enfocado50,51. FIB es una técnica de escritura directa que puede produc.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Este estudio fue apoyado por los premios del Servicio de Investigación y Desarrollo de Rehabilitación de Asuntos de Veteranos de los Estados Unidos (EE.UU.): #RX001664-01A1 (CDA-1, Ereifej) y #RX002628-01A1 (CDA-2, Ereifej). El contenido no representa las opiniones del Departamento de Asuntos de Veteranos de los Estados Unidos ni del Gobierno de los Estados Unidos. Los autores desean agradecer a FEI Co. (Ahora parte de Thermofisher Scientific) por la asistencia del personal y el uso de la instrumentación, que ayudó en el desarrollo de los guiones utilizados en esta investigación.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Headstage ZIF-Clip de 16 canalesTucker Davis TechnologiesZC16Es posible que sea necesario cambiar la cabecera y el soporte de la cabecera, dependiendo del electrodo utilizado. https://www.tdt.com/zif-clip-digital-headstages.html
1 metro de cable, TODO envuelto en resorteThomas Scientific1213F04Cualquier placa de Petri no tratada será suficiente. https://www.thomassci.com/Laboratory-Supplies/Cell-Culture-Dishes/_/Non-Treated-Petri-Dishes?q=petri%20dish%20cell%20culture
32 canales ZIF-Clip Headstage HolderTucker Davis TechnologiesZ-ROD32Es posible que sea necesario cambiar la cabecera y el soporte de la cabecera, dependiendo del electrodo utilizado. https://www.tdt.com/zif-clip-digital-headstages.html
Acetona, Diluyente/Diluyente/Limpiador, 30mlTed Pella16023https://www.tedpella.com/SEMmisc_html/SEMpaint.htm#anchor16062
Hemostático Baby-MixterFine Science Tools13013-14Cualquier hemostático curvo será suficiente. https://www.finescience.com/en-US/Products/Forceps-Hemostats/Hemostats/Baby-Mixter-Hemostat
Cinta conductora de carbono, doble capaTed Pella16084-7El protocolo sugería tres opciones para montar el electrodo funcional en el muñón de aluminio (cinta conductora de cobre o carbono o un clip de perfil bajo. Utilizamos la cinta conductora de carbono en nuestro estudio. https://www.tedpella.com/semmisc_html/semadhes.htm
Corning Costar Placas de pocillos múltiples no tratadas - 6 pocillosSigma AldrichCLS3736-100EACualquier placa de 6 pocillos no tratada será suficiente. https://www.sigmaaldrich.com/catalog/substance/
Dumont #5 Pinzas finasHerramientas de ciencia fina11251-30Esta pinza fina o la bomba de vacío serán suficientes. https://www.finescience.com/en-US/Products/Forceps-Hemostats/Dumont-Forceps/ Dumont-5-Ftampps/11251-30
Etanol, 190 pruebas (95%), USP, Decon LabsFisher Scientific22-032-600Cualquier etanol al 95% será suficiente. https://www.fishersci.com/shop/products/ethanol-190-proof-95-usp-decon-labs-10/22032600
Filtrode células de halcónFisher Scientific08-771-1https://www.fishersci.com/shop/products/falcon-cell-strainers-4/087711
FEI, Tescan, Zeiss (también para Philips, Leo, Cambridge, Leica, CamScan), aluminio, borde ranurado, Ø 32mmTed Pella16148Dependiendo de la máquina SEM utilizada, es posible que necesite un trozo de tamaño diferente. https://www.tedpella.com/SEM_html/SEMpinmount.htm#_16180
Fisherbrand Papel de aluminio, rollo de calibre estándarFisher Scientific01-213-101Cualquier papel de aluminio será suficiente. https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-aluminum-foil-7/p-306250
Fisherbrand Platos evaporadores de PTFE de forma baja y altaFisher Scientific02-617-149Cualquier placa de teflón será suficiente, esto se utiliza para secar las sondas después de lavarlas en una superficie a la que no se pegarán. https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-low-tall-form-ptfe-evaporating-dishes-12/p-88552
Electrodo funcional de silicona estilo MichiganNeuroNexusA1x16-3mm-100-177http://neuronexus.com/electrode-array/a1x16-3mm-100-177/
>Modelo 1772 Soporte universalKOPFModelo 1772Otras monturas estereotáxicas y accesorios serán suficientes. http://kopfinstruments.com/ producto/modelo-1772-soporte-universal/
Modelo 900-U Instrumento estereotáxico para animales pequeñosKOPFModelo 900-UOtras monturas estereotáxicas y accesorios serán suficientes. http://kopfinstruments.com/product/model-900-small-animal-stereotaxic-instrument1/
Manipulador de electrodos modelo 960 con conjunto de corredera APModelo 960de KOPFOtros marcos estereotáxicos y accesorios serán suficientes. http://kopfinstruments.com/product/model-1772-universal-holder/
Parafilm M 10cm x 76.2m (4" x 250')Ted Pella807-5https://www.tedpella.com/grids_html/807-2.htm
PELCO Sistema de recogida por vacío, 220VTed Pella520-1-220Esta bomba de vacío o las pinzas finas serán suficientes. http:// www.tedpella.com/grids_html/Vacuum-Pick-Up-Systems.htm#anchor-520
PELCO Pintura Plateada ConductoraTed Pella16062https://www.tedpella.com/SEMmisc_html/SEMpaint.htm#anchor16062
SEM FIB FEI Helios 650 NanolabThermo Fisher ScientificHelios G2 650Este es el haz de iones enfocado específico y el microscopio electrónico de barrido utilizado en el protocolo. El software Nanobuilder es con lo que viene. Si se utiliza un instrumento FIB diferente, es posible que no sea completamente compatible con el protocolo, específicamente con los pasos que requieren el software Nanobuilder. https://www.fei.com/products/dualbeam/helios-nanolab/

Referencias

  1. Salcman, M., Bak, M. J. A new chronic recording intracortical microelectrode. Medical and Biological Engineering. 14 (1), 42-50 (1976).
  2. Im, C., Seo, J. -M. A review of electrodes for the electrical brain signal recording. Biomedical Engineering Letters<....

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Grabado de nanoarquitecturaModificaci n de microelectrodosElectrodos intracorticalesMejora de la biocompatibilidadPatrones superficialesIm genes de SEM FIBPreparaci n de sondas de silicioAn lisis de la densidad neuronalRendimiento electrofisiol gico

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