Ensayo basado en puntos claros para el análisis de la fototaxis larval de Drosophila

Resumen

Este protocolo introduce un ensayo de punto ligero para investigar el comportamiento fototáctico larvario de Drosophila. En este ensayo, se genera un punto de luz como estimulación de la luz, y el proceso de evitación de la luz larval es registrado por un sistema de imágenes basado en luz infrarroja.

Resumen

Las larvas de Drosophila melanogaster muestran un comportamiento evidente que evita la luz durante la etapa de forrajeo. Drosophila fototaxis larval se puede utilizar como modelo para estudiar el comportamiento de evitación animal. Este protocolo introduce un ensayo de punto de luz para investigar el comportamiento fototáctico larvario. La configuración experimental incluye dos partes principales: un sistema de estimulación visual que genera el punto de luz y un sistema de imágenes basado en luz infrarroja que registra el proceso de evitación de la luz larval. Este ensayo permite el seguimiento del comportamiento de la larva antes de entrar, durante el encuentro y después de salir del punto de luz. Los detalles del movimiento larvario, incluyendo la desaceleración, la pausa, la fundición de la cabeza y el torneado, se pueden capturar y analizar utilizando este método.

Introducción

Las larvas de Drosophila melanogaster muestran un comportamiento evidente que evita la luz durante la etapa de forrajeo. Drosophila larval phototaxis ha estado bajo investigación, especialmente en los últimos 50 años^{1,2,3,4,5,6,7 ,8}. En los últimos años, a pesar de que 1) muchas neuronas que median la evitación de la luz larval han sido identificadas^4,

Protocolo

1. Preparación de larvas de Drosophila

1. Preparar un medio estándar que consista en harina de maíz hervida (73 g), agar (5,6 g), harina de soja (10 g), levadura (17,3 g), jarabe (76 ml) y agua (1000 ml).
2. Levante todas las moscas a 25 oC en un medio estándar en una habitación con un ciclo de luz/oscuridad de 12 h/12 h.

2. Preparación de placas de agar

1. Prepare una solución de agar del 1,0%. Pesar 3 g de agar en un vaso de precipitados de 500 ml con una balanza, luego añadir 300 ml de agua destilada. Coloque un papel de papel de aluminio sobre el disyuntor para evitar que el agua se evapore. Calienta ....

Resultados

De acuerdo con el protocolo, el ensayo de punto de luz se utilizó para investigar el comportamiento de evitación de la luz de la larva de tercera estrella que se elevó a 25 oC en un medio estándar en una habitación con un ciclo de luz/oscuridad de 12 h/12 h. Una sola larva w¹¹¹⁸ fue probada usando el ensayo de punto de luz a 25,5 oC. La intensidad lumínica media del punto de luz generado por un LED de 460 nm fue de 0,59 W/cm^2. Todo el proceso de entrada y salida larval del punto de luz fue.......

Discusión

Este protocolo presenta el ensayo de punto ligero para probar la capacidad de las larvas de Drosophila para escapar de la luz. Este ensayo permite el seguimiento del comportamiento de las larvas antes de entrar, durante el encuentro y después de salir de un punto de luz. Los detalles del movimiento larvario pueden ser capturados y analizados. El ensayo de punto de luz es muy simple y posee una fuerte practicidad. El costo de todo el dispositivo no es alto. En el experimento, la luz LED se utiliza como fuente de .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
850 nm y más; LED generador de luz infrarroja de 3 nm	Thorlabs, EE. UU.	PM100A	: fotodiodo y termo Rango de potencia ópticaa: 100 pW a 200 W Rango de longitud de onda del sensor disponiblea: 185 nm-25 μ m Frecuencia de actualización de la pantalla: 20 Hz Ancho de bandaa: DC-100 kHz Rango del sensor de fotodiodob: 50 nA-5 mA Rango del sensor de termopilab: 1 mV-1 V
Convertidor de CA a CC	Thorlabs, EE. UU	S120VC	Tamaño de apertura: ø 9,5 mm Rango de longitud de onda: 200-1100 nm Rango de potencia: 50 nW-50 mW Tipo de detector: Fotodiodo de Si (UV extendido) Linealidad: ± 0.5% Incertidumbre de mediciónc: ± 3% (440-980 nm), ± 5% (280-439 nm), ± Filtro de paso de banda del 7% (200-279 nm, 981-1100 nm)
	Thorlabs, EE. UU.	DC2100	LED Rango de corriente: 0-2 A Resolución de corriente LED: 1 mA Precisión de corriente LED: ± LED de 20 mA Voltaje directo: 24 V Rango de frecuencia de modulación: 0-100 kHz Onda sinusoidal Modulación: Luz
azul LED colimada arbitraria	ELP, China	USBFHD01M	Resolución máxima: 1920X1080 F6.0 mm Sensor: 1/2.7" CMOS OV2710
Consola compacta de medidor de potencia	Ocean Optics, EE. UU	USB2000+(RAD)	Dimensiones: 89,1 mm x 63,3 mm x 34,4 mm Peso: 190 g Detector: Sony ILX511B (matriz CCD de silicio lineal de 2048 elementos) Rango de longitud de onda: 200-850 nm Tiempo de integración: 1 ms y 65 segundos (20 segundos típicos) Rango dinámico: 8,5 x 10^7 (sistema); 1300:1 para una sola adquisición Relación señal-ruido: 250:1 (señal completa) Ruido oscuro: 50 RMS cuenta Rejilla: 2 (250 – 800 nm) Ranura: SLIT-50 Lente de colección del detector: L2 Clasificación de pedidos: OFLV-200-850 Resolución óptica: ~2.0 nm FWHM Luz parásita: < 0,05% a 600 nm; < 0,10% a 435 nm Conector de fibra óptica: SMA 905 a 0.22 de apertura numérica Controlador LED de alta potencia de fibra de un solo hilo
	Minhongshi, China	MHS-48XY	Voltaje de trabajo: DC12V Longitud de onda central:
cámara web de alta resolución de	Thorlabs, EE. UU.	MWWHL4	Color: Blanco cálido Temperatura de color correlacionada: 3000 K Corriente de prueba para la potencia típica del LED: 1000 mA Corriente máxima (CW): 1000 mA Ancho de banda (FWHM): N/A Potencia eléctrica: 3000 mW Ángulo de visión (ángulo completo): 120? Tamaño del emisor: 1 mm x 1 mm Vida útil típica: >50 000 h Temperatura de funcionamiento (sin condensación): De 0 a 40 ° C Temperatura de almacenamiento: -40 a 70 grados; C Grupo de Riesgoa: RG1 – Grupo de bajo riesgo
LED blanco cálido	Mega-9, China	BP850/22K	y Oslash; 25.4 (+0 ~ -0.1) mm Ancho de banda: 22± 3nm Transmitancia máxima: 80% Longitud de onda central: 850nm± 3nm
Espectrómetro	Noel Danjou	Amcap9.22	AMCap  es una aplicación de captura de imágenes fijas y videos con funciones avanzadas de vista previa y grabación. Es una aplicación de escritorio diseñada para computadoras con Windows 7 SP1 o posterior. La mayoría  Video-for-Windowsand  Los dispositivos compatibles con DirectShow son compatibles, ya sean cámaras web baratas o tarjetas de captura de video avanzadas.
Sensor de potencia de fotodiodo estándar	Super Dragón, China	YGY-122000	Entrada: CA 100-240V ~ 50/60Hz 0.8A Salida: DC 12V 2A
Sensor de potencia térmica	Thorlabs, EE. UU	M470L3-C1	Color: Azul Longitud de onda nominala: 470 nm Ancho de banda (FWHM): 25 nm Corriente máxima (CW): 1000 mA Tensión directa: 3,2 V Potencia eléctrica (máx.): 3200 mW Tamaño del emisor: 1 mm x 1 mm Vida útil típica: 100 000 h Temperatura de funcionamiento (sin condensación): 0 a 40 &0 ° C Temperatura de almacenamiento: -40 a 70 grados; C Grupo de Riesgob: RG2 – Grupo de Riesgo
Moderado Sensor de potencia térmica	Thorlabs, EE. UU.	S401C	Rango de longitud de onda: 190 nm-20 μ m Rango de potencia óptica: 10 μ W-1 W(3 Wb) Tamaño de apertura de entrada: Ø 10 mm Área activa del detector: 10 mm x 10 mm Densidad de potencia óptica máxima: 500 W/cm2 (Promedio) Linealidad: ± 0.5%

Sensores compatibles con . . 850 nm .