El modelo de vejiga libre de detrusores permite el acceso directo al suburotelio para estudiar los mecanismos locales para la regulación de la disponibilidad de mediadores biológicamente activos en suburothelium/lamina propria durante el almacenamiento y la anulación de la orina. La preparación se asemeja mucho al llenado de una vejiga intacta y permite realizar estudios de volumen de presión sin influencias sistémicas.
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Artículo de método
Un modelo de vejiga murina descentralizada (Ex Vivo) con el músculo detrusor eliminado para el acceso directo al suburotelio durante el llenado de la vejiga
En este artículo
Resumen
Resumen
Estudios anteriores han establecido la liberación de sustancias químicas de las láminas de la mucosa de la vejiga plana colocadas en las cámaras ussing y expuestas a cambios en la presión hidrostática o el estiramiento mecánico y de las células uroteliales cultivadas tras cambios de presión hidrostática, estiramiento, hinchazón celular o fuerzas de arrastre, y en lumen vesical al final del llenado. Tales hallazgos llevaron a la suposición de que estos mediadores también se liberan en suburothelium (SubU)/lamina propria (LP) durante el llenado de la vejiga, donde afectan a las células profundas de la pared de la vejiga para regular en última instancia la excitabilidad de la vejiga. Hay al menos dos limitaciones obvias en tales estudios: 1) ninguno de estos enfoques proporciona información directa sobre la presencia de mediadores en SubU/LP, y 2) los estímulos utilizados no son fisiológicos y no recapitulan el llenado auténtico de la vejiga. Aquí, discutimos un procedimiento que permite el acceso directo a la superficie suburotelial de la mucosa de la vejiga en el curso del llenado de la vejiga. La preparación libre de detrusores murinos que creamos se asemeja mucho al llenado de la vejiga intacta y permite realizar estudios de volumen de presión en la vejiga en ausencia de señalización de confunción a partir de reflejos espinales y músculo liso detrusor. Utilizando el nuevo modelo de vejiga libre de detrusores, recientemente demostramos que las mediciones intravesicales de los mediadores no se pueden utilizar como un proxy de lo que se ha liberado o está presente en la SubU/LP durante el llenado de la vejiga. El modelo permite el examen de moléculas de señalización derivadas del urotelio que se liberan, generadas por el metabolismo y/o transportadas a la SubU/LP durante el transcurso del llenado de la vejiga para transmitir información a las neuronas y el músculo liso de la vejiga y regular su excitabilidad durante la continencia y la micción.
Introducción
El propósito de este modelo es permitir el acceso directo al lado submucoso de la mucosa de la vejiga durante diferentes fases de llenado de la vejiga.
La vejiga debe abstenerse de contracción prematura durante el llenado y vaciarse cuando se alcanza el volumen crítico y la presión. La continencia anormal o el vaciado de orina se asocian con frecuencia con excitabilidad anormal del músculo liso del detrusor (DSM) en el curso del llenado de la vejiga. La excitabilidad de DSM está determinada por factores intrínsecos a las células musculares lisas y por influencias generadas por diferentes tipos de células dentro de la pared de la vejiga. La ....
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Protocolo
Todos los procedimientos relacionados con los animales descritos en este manuscrito fueron llevados a cabo de acuerdo con la Guía de Institutos Nacionales de Salud para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio y el Comité Institucional de Uso y Cuidado de Animales de la Universidad de Nevada.
NOTA: El modelo presentado aquí consiste en la extracción del músculo detrusor mientras que el urotelio y SubU/LP permanecen intactos(Figura 1B)para permitir a los investigadores el acceso directo a SubU/LP en el curso del llenado de la vejiga.
1. Dise....
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Resultados
La pared de preparación de vejiga libre de detrusores murinas está intacta y contiene todas las capas excepto el DSM y la serosa. Los estudios de prueba de principio demostraron que la pared de la vejiga libre de DSM incluye urotelio y SubU/LP, mientras que la tunica muscular y la serosa están ausentes (Figura 2)13.
El llenado de la vejiga libre de detrusores se apro.......
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Discusión
La vejiga tiene dos funciones: almacenamiento y vaciado de orina. El funcionamiento normal de estas funciones requiere una correcta sensibilidad mecánica del volumen intraluminal y la presión y la transducción de las señales a través de las células en la pared de la vejiga para regular la excitabilidad muscular detrusor. Se cree que la mucosa de la vejiga (urothelium) regula la excitabilidad de la vejiga liberando una variedad de moléculas de señalización en el SubU/LP que afectan a numerosos tipos de células en la pared.......
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Divulgaciones
Parte de este trabajo fue publicado previamente en el Journal of Physiology (PMCID: PMC6418748; DOI:10.1113/JP27692413). Wiley and Sons, Inc. ha otorgado permiso para el uso de materiales de esta publicación. Los autores no tienen conflictos financieros o de otro tipo que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la Beca dk41315 del Instituto Nacional de Diabetes y Enfermedades Digestivas y Renales.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| CaCl2 | Fisher | C79 | Fuente flexible |
| Dextrosa | Fisher | D16 | Fuente flexible |
| Pasadores de disección | Fine Science Tools | 26002-20 | Fuente flexible |
| Bomba de infusión | Kent Scientific | GenieTouch | Fuente flexible |
| KCl | Fisher | P217 | Fuente flexible |
| KH2PO4 | Fisher | P284 | Fuente flexible |
| Fuente de luz | SCHOTT ACEI | Source | |
| microscopio | Olympus SZX7 | Flexible para usar cualquier osciloscopio | |
| MgCl2 | Fisher | M33 | Fuente flexible |
| NaCl | Fisher | S671 | Fuente flexible |
| NaHCO3 | Fisher | S233 | Fuente |
| Agujas flexibles 25G | Becton Dickinson | 305122 | Fuente flexible |
| Baño de órganos | Hecho a | Fuente flexible; Lo hicimos a partir de un plato de disección Radnoti | |
| Tubo PE-20 | Intramedic | 427405 | Source flexible |
| Transductor de presión | AD instrument | Source flexible | |
| S& Pinzas T | Fine Science Tools | 00632-11 | Fuente flexible |
| Software presión-volumen | AD Instruments | Power lab | |
| Sutura Nylon, 6-0 | AD quirúrgico | S-N618R13 | Fuente |
| sutura flexible Silk, 6-0 | Deknatel vía Braintree Scientific, Inc. | 07J1500190 | Fuente flexible |
| Jeringas 1 mL | Becton Dickinson | 309602 | Fuente flexible |
| Tijeras de resorte Vannas | Fine Science Tools | 15000-08 | Fuente flexible Circulador |
| agua | Baxter | K-MOD 100 | Fuente flexible |
Referencias
- Apodaca, G., Balestreire, E., Birder, L. A. The uroepithelial-associated sensory web. Kidney International. 72, 1057-1064 (2007).
- Fry, C. H., Vahabi, B. The Role of the Mucosa in Normal and Abnormal Bladder Function. Basic and Clinical Pharmacology and Toxicology
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Reimpresiones y permisos
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