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Artículo de método

Bioink de matriz extracelular derivada del tejido pancreático para imprimir construcciones de tejido pancreático laden de células 3D

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DOI:

10.3791/60434

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13 de diciembre de 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Mechanical Engineering, Pohang University of Science and Technology, 2School of Interdisciplinary Bioscience and Bioengineering, Pohang University of Science and Technology, 3Asan Institute for Life Science, University of Ulsan College of Medicine and Asan Medical Center, 4Division of Hepato-Biliary and Pancreatic Surgery, Department of Surgery, University of Ulsan College of Medicine and Asan Medical Center, 5Department of Creative IT Engineering, Pohang University of Science and Technology

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

La matriz extracelular descelularizada (dECM) puede proporcionar señales microambientales adecuadas para recapitular las funciones inherentes de los tejidos diana en una construcción diseñada. Este artículo aclara los protocolos para la descelularización del tejido pancreático, la evaluación del bioink dECM derivado del tejido pancreático y la generación de construcciones de tejido pancreático 3D utilizando una técnica de bioimpresión.

Resumen

El trasplante de islotes pancreáticos es un tratamiento prometedor para los pacientes que sufren de diabetes tipo 1 acompañado de hipoglucemia y complicaciones secundarias. Sin embargo, el trasplante de islotes todavía tiene varias limitaciones, como la baja viabilidad de los islotes trasplantados debido a la falta de injerto de islotes y entornos hostiles. Además, las células productoras de insulina diferenciadas de las células madre pluripotentes humanas tienen una capacidad limitada para secretar suficientes hormonas que pueden regular el nivel de glucosa en sangre; por lo tanto, se requiere encarecidamente mejorar la maduración mediante el cultivo de células con señales microambientales adecuadas. En este artículo, esclarecemos los protocolos para preparar un biocontenido de matriz extracelular descelularizada derivada del tejido pancreático (pdECM) para proporcionar un microambiente beneficioso que puede aumentar la sensibilidad a la glucosa de los islotes pancreáticos, seguido de describir los procesos para generar construcciones de tejido pancreático 3D utilizando una técnica de bioimpresión basada en microextrusión.

Introducción

Recientemente, el trasplante de islotes pancreáticos se ha considerado un tratamiento prometedor para pacientes con diabetes tipo 1. La relativa seguridad y mínima invasividad del procedimiento son grandes ventajas de este tratamiento1. Sin embargo, tiene varias limitaciones como la baja tasa de éxito de islotes de aislación y los efectos secundarios de los fármacos inmunosupresores. Además, el número de islotes injertados disminuye constantemente después del trasplante debido al ambiente hostil2. Se han aplicado varios materiales biocompatibles como alginato, colágeno, ácido poli(láctico-coglicólico) (PLGA) o polietilenglicol (PEG) al trasplante de islotes pancreáticos para superar estas dificultades.

La tecnología de impresión de células 3D está surgiendo en la ingeniería de tejidos debido a su gran potencial y alto rendimiento. No hace falta decir que los bioinks son conocidos como componentes importantes para proporcionar un microambiente adecuado y permitir la mejora de los procesos celulares en construcciones de tejido impreso. Un número sustancial de hidrogeles adelgazamiento de cizallamiento como la fibrina, el alginato y el colágeno se utilizan ampliamente como biotintas. Sin embargo, estos materiales muestran una falta de complejidad estructural, química, biológica y mecánica en comparación con la matriz extracelular (ECM) en el tejido nativo3. Las señales microambientales, como las interacciones entre los islotes y la ECM, son señales importantes para mejorar la función de los islotes. ECM descelularizado (dECM) puede recrear la composición específica del tejido de varios componentes de ECM, incluyendo colágeno, glicosaminoglicanos (GAGs), y glicoproteínas. Por ejemplo, los islotes primarios que conservan sus ECM periféricos (por ejemplo, colágeno, laminina y fibronectina de tipo I, III, IV, V y VI) presentan una baja apoptosis y una mejor sensibilidad a la insulina, lo que indica que las interacciones entre las células y matrices específicas del tejido son importantes para mejorar su capacidad de funcionar de manera similar al tejido original4.

En este artículo, aclaramos protocolos para preparar biotinta de matriz extracelular descelularizada derivada del tejido pancreático (pdECM) para proporcionar señales microambientales beneficiosas para aumentar la actividad y las funciones de los islotes pancreáticos, seguidos de los procesos para generar construcciones de tejido pancreático 3D utilizando una técnica de bioimpresión basada en microextrusión(Figura 1).

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Protocolo

Se recogieron tejidos pancreáticos porcinos de un matadero local. Los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) del Asan Medical Center, Seúl, Corea.

1. Descelularización de tejidos

  1. Preparar las soluciones para la descelularización.
    NOTA: 1 solución salina con fosfato (PBS) utilizada en todas las preparaciones de la solución se diluye añadiendo agua destilada a 10x PBS.
    1. Para la solución 1% Triton-X 100, disolver 100 ml de solución 100% Triton-X 100 en 900 ml de 1x PBS utilizando una barra de agitación magnética con la agitación a 150 rpm para 6 h. Hacer 400 mL de solución 1% Tritón-X 100 con 40 ml de 10% Triton-X 100 solución y 360 mL de solución PBS preparado justo antes de su uso.
      NOTA: La solución 10% Triton-X 100 se puede almacenar a temperatura ambiente hasta que sea necesario.
    2. Para la solución de ácido peracético al 0,1%, diluir 8,5 ml de ácido peracético al 4,7% en 22,8 ml de etanol al 70% con 368,7 ml de agua destilada justo antes de su uso.
  2. Retire los tejidos periféricos del páncreas y corte el tejido antes de la descelularización.
    1. Lave el páncreas porcino resecado con agua corriente del grifo y retire los tejidos periféricos con tijeras esterilizadas.
    2. Transfiera el páncreas en una bolsa de plástico con fórceps y congele a -80 oC durante 1 h para ayudar a cortar el páncreas de manera efectiva para el siguiente paso.
    3. Corta el páncreas congelado en trozos de 1 mm de espesor usando un rallador.
    4. Transfiera 50 g de tejido cortado en un recipiente de plástico de 500 ml.
      NOTA: Aquí se recomienda un recipiente de plástico con tapa para proteger los tejidos de la contaminación y evitar la evaporación de la solución.
  3. Tratamiento con reactivos.
    NOTA: Todo el proceso de descelularización debe llevarse a cabo a 4oC en un agitador orbital digital a 150 rpm. En todos los pasos de descelularización, se requiere desprendimiento físico con fórceps para evitar que las rodajas de páncreas se peguen. Lavar el recipiente con agua destilada es necesario para eliminar completamente los reactivos residuales en el recipiente.
    1. Antes de cualquier tratamiento con reactivos, lave 50 g de páncreas en rodajas con 300 ml de agua destilada con una coctelera.
    2. Revuelva el tejido continuamente a 150 rpm hasta que el agua turbia desaparezca (después de aproximadamente 12 h). Sustituya el agua destilada cada 2 h.
      NOTA: Se recomienda cambiar el agua destilada cada hora para la eficiencia de eliminar el agua turbia más rápidamente.
    3. Deseche el agua y trate los 50 g de tejidos con 400 ml de 1% de Triton-X 100 en 1solución PBS durante 84 h. Refresque la solución cada 12 h.
      NOTA: En este punto, la cantidad de tejido disminuirá porque los componentes celulares comienzan a ser eliminados.
    4. Tratar con 400 ml de isopropanol (IPA) durante 2 h para eliminar la grasa restante del páncreas.
      NOTA: Es normal que el tejido se vuelva resistente debido a la eliminación de grasa en este proceso.
    5. Después de 2 h, retire el IPA y lave el tejido con 400 ml de 1pbS durante 24 h. Actualice el 1o PBS cada 12 h.
    6. Para esterilizar el tejido descelularizado, deseche la solución previa y trate con 400 ml de ácido peracético al 0,1% en etanol al 4% durante 2 h.
    7. Para eliminar el detergente residual, lave el tejido con 400 ml de 1pbS durante 6 h. Refresque la solución cada 2 h.
    8. Recoger los tejidos descelularizados en un tubo cónico de 50 ml con fórceps.
    9. Congele la muestra a -80 oC durante 1 h. Cubra el tubo cónico con una toallita sin pelusas en lugar de la tapa y fije con una banda de goma para una liofilización eficiente.
    10. Liofilizar el tejido descelularizado a -50 oC durante 4 d.
      NOTA: Para el paso 1.3, 1 g de tejido no descelularizado también debe congelarse en las mismas condiciones.

2. Evaluación de tejidos descelularizados

NOTA: Para evaluar la cantidad residual de ADND, los glicosaminoglicanos (GAG) y el colágeno en el tejido descelularizado en comparación con el tejido nativo, se requieren al menos 1 g de cada uno de los tejidos no descelularizados (tejido nativo) y descelularizados para un lote de evaluación. La cantidad de ADND, GAGs y colágeno se puede calcular en función del peso seco del tejido.

  1. Preparar soluciones para ensayos bioquímicos.
    1. Preparar la solución de papaína para la digestión de la muestra.
      NOTA: La cantidad de búfer a realizar se puede ajustar de acuerdo con el número de muestras.
      1. Disolver 119 mg de 0,1 M de fosfato sódico (monobásico), 18,6 mg de 0,5 mM de Na2-EDTA y 8,8 mg de 5 mM de cisteína-HCl en 10 ml de agua autoclaveda.
      2. Ajuste el pH de la solución a 6,5 añadiendo una solución NaOH de 10 M.
      3. Añadir 125 ml de solución de calina de 10 mg/ml a la solución y vórtice anteriores, permitiendo que cada elemento se mezcle uniformemente.
    2. Preparar soluciones para el ensayo de dimetil-metileno azul (DMMB).
      1. Para hacer el tinte DMMB, disolver 8 mg de 1,9-dimetil-metileno de cloruro de zinc azul de cloruro de zinc doble sal, 1,52 g de glicina, y 1.185 g de NaCl en 500 mL de agua autoclaved. Ajuste el pH a 3 añadiendo una solución de HCl de 0,5 M mientras mide el cambio de pH utilizando un medidor de pH de sobremesa. A continuación, filtre esto a través de un filtro de vacío de 500 ml.
      2. Hacer 15 l de 10 mg/ml de sulfato de condroitina Una solución estándar.
    3. Preparar soluciones para el ensayo de hidroxiprolina.
      1. Para la solución de trabajo con cloramina, disolver 2,4 g de acetato de sodio, 1 g de ácido cítrico y 0,68 g de hidróxido de sodio en 24 ml de agua destilada y añadir 240 ml de ácido acético glacial, 10 ml de tolueno y 6 ml de IPA.
        NOTA: Disuelva todos los polvos en solución con un mezclador de vórtice. La solución de trabajo con cloramina se puede almacenar a 4 oC durante un máximo de tres meses.
      2. Para la solución de cloramina T, disolver 0,35 g de cloramina T en 20 ml de solución de trabajo de cloramina y añadir 2,5 ml de IPA. Vórtice para mezclar todos los componentes.
        NOTA: Prepárese inmediatamente antes de usar.
      3. Para la solución P-DAB, poner 3,75 g de P-DAB en 6,5 ml de ácido perclórico y 15 ml de IPA; envuélvelo en papel de aluminio.
        NOTA: Prepárese inmediatamente antes de usar.
  2. Añadir 1 ml de solución de papaína a 10 mg de tejido liofilizado en un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml y vórtice el tubo para digerir mejor la muestra.
  3. Colocar el tubo de microcentrífuga de 1,5 ml en un bastidor de goma y digerir las muestras en un vaso de precipitados de 500 ml que contenga 300 ml de agua a 60 oC durante 16 h.
  4. Centrifugar a 9.500 x g durante 20 minutos, recoger el sobrenadante y transferirlo a un tubo nuevo.
  5. Cuantificar el ADN residual y las proteínas principales en el tejido descelularizado.
    1. Cargue 1 l de muestra digerida en el espectrómetro y mida la cantidad de ADN DS de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
      NOTA: El experimentador debe atar su cabello hacia atrás y usar una máscara para evitar contaminar la muestra.
  6. Realice un ensayo DMMB para cuantificar la cantidad de GAG que permanece en el tejido descelularizado.
    1. Mezclar 1 l de sulfato de condroitina S solución y 499 éL de 1x PBS para hacer estándares. Diluir el sulfato de condroitina Una solución con agua destilada a concentraciones de 0, 4, 8, 12, 16 y 20 g/ml.
    2. Cargue triplicados de 50 ml de cada concentración de las muestras estándar y digeridas en una placa de 96 pocillos.
    3. Añadir 200 l de tinte DMMB a cada pocal utilizando una pipeta multicanal.
    4. Lea inmediatamente la absorbancia a 525 nm en un lector de microplacas.
  7. Realizar un ensayo de hidroxiprolina para cuantificar la cantidad de colágeno.
    1. Para llevar a cabo un ensayo de hidroxiprolina, incubar 250 ml de muestra digerida con volúmenes iguales de HCl a 120 oC durante 16 h.
    2. Secar los residuos a temperatura ambiente durante 3 h para enfriar las muestras y luego volver a disolver las muestras en 1 ml de 1x PBS.
    3. Centrífuga a 2.400 x g durante 10 min a 4oC.
    4. Preparar de serie una solución de hidroxiprolina de 100 g/ml.
    5. Diluir la solución de hidroxiprolina con agua destilada a una concentración de 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 15, 20, 30 g/ml para una solución estándar.
    6. Cargue triplicados de 50 ml de muestras y solución estándar en una placa de 96 pocillos.
    7. Añadir 50 l de solución de cloramina T y luego incubar durante 20 minutos a temperatura ambiente.
    8. Añadir 50 sl de solución p-DAB e incubar durante 30 min a 60 oC.
      NOTA: Aliquot en una habitación oscura. Después de la adición, envuelva la placa con papel de aluminio.
    9. Incubar a temperatura ambiente durante 30 min.
    10. Después de enfriar, mida la absorbancia a 540 nm en un lector de microplacas.

3. Preparación de Bioink

NOTA: El polvo de pdECM se puede almacenar de forma estable a -80 oC durante al menos un año. Antes del ajuste del pH, la solución de pdECM digerido se puede almacenar a -20 oC durante un mes. Antes de su uso, descongele la muestra de la solución de pdECM congelada a 4 oC durante la noche. La solución pdECM ajustada al pH se puede almacenar a 4 oC durante un máximo de una semana. La solución de pdECM digerido se puede almacenar a 4 oC durante al menos unos días, pero no debe exceder 1 semana.

  1. Digerir el pdECM liofilizado con pepsina.
    1. Para una digestión eficaz de biotinta, pulverizar el pdECM liofilizado con nitrógeno líquido utilizando un mortero y un pestillo.
    2. Recoger 200 mg del polvo pdECM en el tubo cónico de 50 ml y añadir 20 mg de la pepsina y 8,4 ml del ácido acético de 0,5 M (la concentración final es de 2 p/v%).
    3. Coloque la barra de agitación magnética en el tubo cónico de 50 ml y revuelva a 300 rpm durante 96 h.
  2. Ajuste el pH de la solución pdECM digerida.
    NOTA: Con el fin de evitar la gelación antes del ajuste del pH, este proceso debe llevarse a cabo sobre hielo.
    1. Filtrar las partículas no digeridas en la solución pdECM utilizando un colador de células de 40 m utilizando una pipeta de desplazamiento positivo en hielo para obtener la digestión óptima de las piezas.
    2. Agregue 1 mL del PBS 10x y el vórtice antes de usar NaOH.
    3. Ajuste el pH a 7 con 10 M NaOH comprobando el pH con tiras indicadoras de pH.
      NOTA: Vortex cada vez que se añade NaOH para que el bioink se mezcle a fondo con los otros reactivos.

4. Análisis reológico

  1. Configuración experimental
    1. Preparar el 1,5% (p/v) del bioink pdECM para evaluar las propiedades reológicas.
    2. Establezca una geometría de placa de cono de 20 mm (diámetro de cono de 20 mm con un ángulo de 2o) en modo de velocidad controlada de un reómetro.
    3. Cree secuencias experimentales en el software instalado (TRIOS) para medir la viscosidad, la cinética de la gelación y el módulo dinámico del biotinta pdECM.
      1. Viscosidad: Coloque el biotinta pdECM en la placa. Mida la viscosidad compleja (Pa-s) de la biotinta pdECM bajo una tasa de cizallamiento creciente de 1 a 1.000 s-1 a una temperatura constante de 15 oC.
      2. Cinética de gelión: Coloque el bioink pdECM en la placa. Calcule el módulo complejo (G*) midiendo el módulo de almacenamiento y pérdida de biotinta pdECM a 4-37 oC con una tasa de aumento incremental de 5 oC/min (modo de barrido de tiempo).
      3. Módulo dinámico: Coloque el biotinta pdECM en la placa a 37 oC durante 60 minutos antes de la medición. Mida el módulo de almacenamiento dependiente de la frecuencia (G') y el módulo de pérdida (G'') del biotinta pdECM en el rango de 0,1-100 rad/s a una tensión del 2%.

5. Impresión de células 3D de construcciones de tejido pancreático usando islotes

  1. Preparación de islotes aislados
    1. Aísle los islotes primarios de una rata de acuerdo con los protocolos descritos en un trabajo anterior5.
    2. Para separar los desechos y las células muertas del islo aislado, pase la suspensión celular a través de un colador de células de 70 m. Los islotes con un diámetro inferior a 70 m se consideran muertos o anormales.
    3. Suspenda los islotes aislados en el medio RPMI-1640 y colóquelos en la placa de petri. Retire los islotes de más de 300 m de diámetro utilizando una pipeta de volumen P200 bajo el microscopio (lente objetivo 4x) en el gabinete de bioseguridad.
  2. Encapsulación de isletenen biotinta pdECM
    1. Prepare el bioink pdECM ajustado al pH y el isloaislado aislado.
      NOTA: Para evitar la gelación antes del ajuste del pH, este proceso debe realizarse sobre hielo.
    2. Mezcle suavemente el biotinta pdECM y el medio suspendido con islotes (relación 3:1) utilizando una pipeta de desplazamiento positivo hasta que se mezclen uniformemente.
      NOTA: La concentración final del biotinta pdECM es del 1,5% y la densidad celular en el biotinta pdECM es de 3.000 IEQ/ml.
  3. Impresión de células 3D de construcciones de tejido pancreático
    1. Prepare una jeringa esterilizada y una boquilla de 22 G.
      NOTA: Este medidor fue seleccionado para la impresión de islotes con un diámetro de 100-250 m.
    2. Cargue el bioink pdECM cargado de islos en la jeringa.
    3. Imprima el bioink con la condición de impresión optimizada (velocidad de avance: 150 mm/min; presión neumática: 15 kPa) a 18 oC en forma de celosía.
    4. Para recruzar el bioink, coloque la construcción impresa en la incubadora durante 30 min.
    5. Sumerja la construcción impresa en el medio de cultivo de islos que es un medio RPMI-1640 complementado con suero bovino fetal al 10% (FBS), penicilina de 100 U/ml y estreptomicina de 100 U/ml.

6. Impresión celular 3D de la construcción pancreática con estructura estampada

  1. Preparación de dos tipos de biotinta
    1. Para validar la versatilidad de impresión utilizando múltiples biotintas, prepare dos conjuntos de biotintas pdECM y tenín los dos agregando una solución de 1,4% Trypan Blue y Rose Bengal en cada biotinta pdECM a una proporción de 1:20, respectivamente.
      NOTA: Para evitar la gelación antes del ajuste del pH, este proceso debe llevarse a cabo sobre hielo.
    2. Mezcle suavemente el biotinta pdECM y el medio suspendido con islotes (relación 3:1) utilizando una pipeta de desplazamiento positivo hasta que se mezclen uniformemente.
      NOTA: La concentración final del biotinta pdECM es del 1,5% y la densidad celular en el biotinta pdECM es de 3.000 IEQ/ml.
  2. Impresión de células 3D de construcciones de tejido pancreático multimaterial
    1. Prepare jeringas esterilizadas y una boquilla de 25 G.
    2. Cargue cada biotinta (azul y rojo) en dos jeringas diferentes, respectivamente.
    3. Imprima el bioink con una condición de impresión optimizada (velocidad de avance: 150 mm/min; presión neumática: 15 kPa) a 18oC en forma de celosía con líneas alternas de azul y rojo.
    4. Para recruzar el bioink, coloque la construcción impresa en la incubadora durante 30 min.
    5. Sumerja la construcción impresa en medios de cultivo de islet que son medios RPMI-1640 complementados con suero bovino fetal 10% (FBS), penicilina de 100 U/ml y estreptomicina de 100 U/ml.

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Resultados

Descelularización de los tejidos pancreáticos
Desarrollamos el proceso de preparación de biotinta pdECM para proporcionar microambientes específicos del tejido pancreático para mejorar la funcionalidad de los islotes en una construcción de tejido bioimpreso 3D(Figura 2A). Después del proceso de descelularización, se eliminó el 97,3% del ADN DSDNA y los componentes representativos de ECM, como el colágeno y los GAG, se mant...

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Discusión

Este protocolo describió el desarrollo de biotintas pdECM y la fabricación de construcciones de tejido pancreático 3D mediante el uso de técnicas de impresión de células 3D. Para recapitular el microambiente del tejido diana en la construcción de tejido diseñado 3D, la elección de biotinta es fundamental. En un estudio anterior, validamos que las biotintas dECM específicas del tejido son beneficiosas para promover la diferenciación de células madre y la proliferación10. En comparación con los polí...

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Agradecimientos

Esta investigación fue apoyada por el programa bio y tecnología médica de la Fundación Nacional de Investigación (NRF) financiado por el gobierno coreano (MSIT) (2017M3A9C6032067) y "ICT Consilience Creative Program" (IITP-2019-2011-1-00783) supervisado por el IITP (Instituto de Planificación y Evaluación de Tecnologías de la Información y las Comunicaciones).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Cabinas de seguridad biológicaCRYSTEPURICUBE 1200
CongeladorThermo Scientific Forma957
Agitador orbital digitalDAIHAN ScientificDH.
Horno secoDAIHAN ScientificWON-155
LiofilizadorLABCONCO7670540
NeveraSANSUNGCRFD-1141
RalladorABM1415605793
Microscopios invertidosLeicaDMi1
CRYSTEPURISPIN 17R
Lector de microplacasThermo Fisher ScientificMultiskan GO
Mini centrífugaDAIHAN ScientificCF-5
Agitadores de placa calefactora múltipleDAIHAN ScientificSMHS-6
NanodropThermo Fisher ScientificND-LITE-PR Medidor
pH de sobremesaThermo Fisher ScientificSTARA2110
ReómetroTA InstrumentDiscovery HR-2
Mezclador de vórticeDAIHAN ScientificVM-10
Cirurgical Instruments
Operating ScisjersHiroseHC.13-122
ForcepKorea Ace ScientificHC.203-30
Materiales
Tubo de microcentrífuga de 1,7 mLAxygenMCT-175-C
vial de vidrio de 10 mlScilabSL. VI1243
40 y micro; colador de células mFalcon352340
Vaso de precipitados de 5 LDong Sung ScienceSDS 2400
50 mL tubo córneoFalcon352070
500 mL vaso de precipitadosAce ScientificKA.23-08
500 mL filtro de vacío con tapa de botellaCorning431118
contenedor de plástico de 500 mLLOCK& LOCKINL301
Placa de 96 pocillosFalcon353072
Papel de aluminioDAEKYO
KimwipeKimtech
Barra magnéticaKorea Ace ScientificBA.37110-0003
Mortero y morteroDAIHAN ScientificSC. MG100
Pipeta multicanalEppendorf4982000314
Placa de Petri SPL10100
Tiras indicadoras de pHSigma-Aldrich1095350001
Malla filtrante de tamizDAIHAN Scientific
Decellularization
10x pbsHycloneSH30258.01
4.7% Ácido peracéticoOmegafarm
70% etanolSAMCHUN CHEMICALSE0220 SAM
Agua
IPASAMCHUN CHEMICALSsamchun I0348
Triton-X 100BiosesangT1020
Ensayo bioquímico
1,9-Azul de dimetil-metileno cloruro de zinc doble salSigma-Aldrich341088
10 N NaOHBiosesangS2018
Cloramina TSigma-Aldrich857319
Sulfato de condroitina ASigma-AldrichC4384
Ácido cítricoSupelco46933
Cisteína-HClSigma-AldrichC1276
Ácido acético glacialMerok100063
GlicinaSigma-Aldrich410225
HClSigma-AldrichH1758
Na2-EDTASigma-AldrichE5134
NaClSAMCHUN QUÍMICOSS2097
PapaínaSigma-Aldrichp4762
P-DABSigma-AldrichD2004
Ácido perclóricoSigma-Aldrich311421
Acetato de sodioSigma-AldrichS5636
Hidróxido de sodioSupelcoSX0607N
Fosfato de sodio (monobásico)Sigma-AldrichRDD007
ToluenoSigma-Aldrich244511
Biotinta
Caracterizada FBSHycloneSH30084.03
Penicilina-EstreptomicinaThermo Fisher Scientific15140122
PepsinaSigma-AldrichP7215
Rosa de bengalaSigma-Aldrich198250
RPMI-1640 medioThermo Fisher Scientific11875093
solución de Azul TrypanSigma-AldrichT8154
WSO04010de Korea destilada

Referencias

  1. Shapiro, A. J., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. Clinical pancreatic islet transplantation. Nature Reviews Endocrinology. 13 (5), 268(2017).
  2. Venturini, M., et al. Technique, complications, and therapeutic efficacy of percutaneous transplantation of human pancreatic islet cells in type 1 diabetes: the role of US. Radiology. 234 (2), 617-624 (2005).
  3. Xie, D., et al. Cytoprotection of PEG-modified adult porcine pancreatic islets for improved xenotransplantation. Biomaterials. 26 (4), 403-412 (2005).
  4. Sackett, S. D., et al. Extracellular matrix scaffold and hydrogel derived from decellularized and delipidized human pancreas. Scientific Reports. 8 (1), 10452(2018).
  5. Kim, J., et al. 3D cell printing of islet-laden pancreatic tissue-derived extracellular matrix bioink constructs for enhancing pancreatic functions. Journal of Materials Chemistry B. 7 (10), 1773-1781 (2019).
  6. Yi, H. G., et al. A bioprinted human-glioblastoma-on-a-chip for the identification of patient-specific responses to chemoradiotherapy. Nature Biomedical Engineering. 1, (2019).
  7. Das, S., et al. Decellularized extracellular matrix bioinks and the external stimuli to enhance cardiac tissue development in vitro. Acta Biomaterialia. , (2019).
  8. Kim, H., et al. Shear-induced alignment of collagen fibrils using 3D cell printing for corneal stroma tissue engineering. Biofabrication. 11 (3), 035017(2019).
  9. Huang, H. H., Ramachandran, K., Stehno-Bittel, L. A replacement for islet equivalents with improved reliability and validity. Acta Diabetologica. 50 (5), 687-696 (2013).
  10. Pati, F., et al. Printing three-dimensional tissue analogues with decellularized extracellular matrix bioink. Nature Communications. 5, 3935(2014).
  11. Hussey, G. S., Dziki, J. L., Badylak, S. F. Extracellular matrix-based materials for regenerative medicine. Nature Reviews Materials. 1, (2018).
  12. Kim, B. S., Kim, H., Gao, G., Jang, J., Cho, D. W. Decellularized extracellular matrix: a step towards the next generation source for bioink manufacturing. Biofabrication. 9 (3), 034104(2017).
  13. Gaetani, R., et al. Evaluation of different decellularization protocols on the generation of pancreas-derived hydrogels. Tissue Engineering Part C: Methods. 24 (12), 697-708 (2018).
  14. Gao, G., et al. Tissue engineered bio-blood-vessels constructed using a tissue-specific bioink and 3D coaxial cell printing technique: a novel therapy for ischemic disease. Advanced Functional Materials. 27 (33), 1700798(2017).
  15. La, W. G., et al. Systemically replicated organic and inorganic bony microenvironment for new bone formation generated by a 3D printing technology. RSC Advances. 6 (14), 11546-11553 (2016).
  16. Lee, H., et al. Development of liver decellularized extracellular matrix bioink for three-dimensional cell printing-based liver tissue engineering. Biomacromolecules. 18 (4), 1229-1237 (2017).
  17. Choudhury, D., Tun, H. W., Wang, T., Naing, M. W. Organ-derived decellularized extracellular matrix: a game changer for bioink manufacturing? Trends in Biotechnology. 36 (8), 787-805 (2018).
  18. Kurpios, N. A., et al. The direction of gut looping is established by changes in the extracellular matrix and in cell: cell adhesion. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (25), 8499-8506 (2008).
  19. Sakai, T., Larsen, M., Yamada, K. M. Fibronectin requirement in branching morphogenesis. Nature. 423 (6942), 876(2003).

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