Tinción de inmunofluorescencia utilizando IBA1 y TMEM119 para la densidad microglial, morfología y análisis de infiltración de células mieloides periféricas en el cerebro del ratón

Fernando González Ibanez; Katherine Picard; Maude Bordeleau; Kaushik Sharma; Kanchan Bisht; Marie-Ève Tremblay

doi:10.3791/60510

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Artículo de método

Tinción de inmunofluorescencia utilizando IBA1 y TMEM119 para la densidad microglial, morfología y análisis de infiltración de células mieloides periféricas en el cerebro del ratón

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DOI:

10.3791/60510

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27 de octubre de 2019

Fernando González Ibanez¹^,² , Katherine Picard¹^,² , Maude Bordeleau¹^,³ , Kaushik Sharma¹^,²^,⁴ , Kanchan Bisht¹^,²^,⁴ , Marie-Ève Tremblay¹^,²

¹Axe Neurosciences, Centre de Recherche du CHU de Québec-Université Laval, ²Département de Médecine Moléculaire, Faculté de Médecine, Université Laval, ³Integrated Program in Neuroscience, McGill University, ⁴Center for Brain Immunology and Glia (BIG), University of Virginia

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Resumen

Este protocolo describe un flujo de trabajo paso a paso para la costaría inmunofluorescente de IBA1 y TMEM119, además del análisis de la densidad microglial, la distribución y la morfología, así como la infiltración de células mieloides periféricas en el tejido cerebral del ratón.

Resumen

Este es un protocolo para la visualización dual de microglia e infiltración de macrófagos en el tejido cerebral del ratón. TMEM119 (que etiqueta la microglia selectivamente), cuando se combina con IBA1 (que proporciona una visualización excepcional de su morfología), permite investigar los cambios en la densidad, distribución y morfología. La cuantificación de estos parámetros es importante para proporcionar información sobre los roles ejercidos por la microglia, los macrófagos residentes del cerebro. En condiciones fisiológicas normales, la microglia se distribuye regularmente en un patrón similar a un mosaico y presenta un pequeño soma con procesos ramificados. Sin embargo, como respuesta a factores ambientales (es decir, trauma, infección, enfermedad o lesión), la densidad microglial, la distribución y la morfología se alteran de diversas maneras, dependiendo del insulto. Además, el método de doble tinción descrito permite la visualización de macrófagos infiltrados en el cerebro en función de su expresión de IBA1 y sin colocalización con TMEM119. Por lo tanto, este enfoque permite la discriminación entre la microglia y la infiltración de macrófagos, que se requiere para proporcionar información funcional sobre su participación distinta en la homeostasis cerebral en diversos contextos de salud y enfermedad. Este protocolo integra los últimos hallazgos en neuroinmunología que se refieren a la identificación de marcadores selectivos. También sirve como una herramienta útil tanto para los neuroinmólogos experimentados como para los investigadores que buscan integrar la neuroinmunología en los proyectos.

Introducción

Ya sea aguda o crónica, la neuroinflamación está fuertemente influenciada por la microglia, los macrófagos residentes del cerebro. Visualizar la microglia a través de la inmunomancha es valioso para el estudio de la neuroinflamación con el uso de microscopía de luz, una técnica altamente accesible. En condiciones homeostáticas, la microglia se distribuye típicamente en un patrón no superpuesto, similar a un mosaico. Exhiben pequeños somas que se extienden procesos ramificados¹, que a veces se ponen en contacto entre sí^2. Los procesos ramificados microgliales examinan dinámicamente el parénquima cerebral, interactuando co....