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Artículo de método

Un método revisado para inducir el linfedema secundario en la extremidad posterior de los ratones

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DOI:

10.3791/60578

2 de noviembre de 2019

En este artículo

Resumen

Este modelo animal permite a los investigadores inducir linfedema secundario estadísticamente significativo en la extremidad posterior de los ratones, que dura al menos 8 semanas. El modelo se puede utilizar para estudiar la fisiopatología del linfedema e investigar nuevas opciones de tratamiento.

Resumen

Los modelos animales son de suma importancia en la investigación del linfedema con el fin de entender la fisiopatología de la enfermedad, pero también para explorar posibles opciones de tratamiento. Este modelo de ratón permite a los investigadores inducir linfedema significativo que dura al menos 8 semanas. El linfedema se induce mediante una combinación de radioterapia fraccionada y ablación quirúrgica de linfáticos. Este modelo requiere que los ratones reciban una dosis de 10 radiación gris (gy) antes y después de la cirugía. La parte quirúrgica del modelo implica la ligadura de tres vasos linfáticos y la extracción de dos ganglios linfáticos de la extremidad posterior del ratón. Tener acceso a herramientas microquirúrgicas y un microscopio es esencial, debido a las pequeñas estructuras anatómicas de los ratones. La ventaja de este modelo es que resulta en un linfedema estadísticamente significativo, que proporciona una buena base para evaluar diferentes opciones de tratamiento. También es una gran opción y fácilmente disponible para el entrenamiento microquirúrgico. La limitación de este modelo es que el procedimiento puede llevar mucho tiempo, especialmente si no se practica de antemano. El modelo da como resultado un linfedema objetivamente cuantificable en ratones, sin causar morbilidad grave y ha sido probado en tres proyectos separados.

Introducción

El linfedema se caracteriza por una acumulación de líquido linfático que conduce a la hinchazón localizada del tejido, que se produce principalmente debido a la alteración o alteración del flujo de líquido linfático en los vasos linfáticos1. El flujo linfático puede verse afectado o interrumpido por infección, obstrucción, lesiones o defectos congénitos en el sistema linfático2. Estas etiologías dan lugar a la acumulación de líquido linfático, lo que conduce a un estado crónico de inflamación, lo que resulta en fibrosis posterior, así como la deposición de tejido adiposo3. El linfedema se puede cl....

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Protocolo

Los animales fueron alojados en la Instalación de Cuidado de Animales de la Universidad del Sur de Dinamarca según las directrices institucionales. Todos los procedimientos relacionados con sujetos animales han sido aprobados por la Inspección de Experimentos Animales, Ministerio de Medio Ambiente y Alimentación de Dinamarca.

1. Irradiación prequirúrgica

NOTA: La irradiación previa a la cirugía tiene lugar 7 días antes de la cirugía.

  1. Inducir la anestesia.
    1. Coloque el ratón en una caja de inducción y ajuste el vaporizador a 3% de isoflurano con un caudal de oxígeno de 0,8 x 1,2 L/min para inducir ....

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Resultados

Este procedimiento se ha utilizado anteriormente en tres experimentos independientes. Todos los experimentos fueron realizados por diferentes investigadores principales que son coautores de este artículo. En los tres experimentos, se tuvo mucho cuidado de adherirse al mismo procedimiento descrito en este protocolo. En los tres experimentos, el linfedema secundario fue inducido en una extremidad posterior, mientras que la otra extremidad posterior sirvió como control. Los volúmenes de las .......

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Discusión

Hay algunos pasos críticos en este protocolo. En primer lugar, es importante que los investigadores tomen precauciones de seguridad cuando trabajan con radiactividad. En segundo lugar, durante la parte quirúrgica de este protocolo, es importante iniciar el procedimiento una vez anestesiado el ratón y terminarlo sin pausas innecesarias. Esto es importante para evitar un período quirúrgico excesivamente largo para el animal y para evitar que la anestesia pierde efecto durante la cirugía. Se recomienda administrar sólo una .......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Los autores agradecen a Peter Bollen, jefe del Laboratorio Biomédico por prestar el equipo necesario para grabar las imágenes que se ven a través de los microscopios.

....

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
10-0 Sutura de nylonS& T12051-10
6-0 Sutura de nylon - DafilonB BraunC0933112
Coagulador - ICC 50ERBE
Aplicadores con punta de algodónYibon medical co
Pinza de disecciónLawton09-0190
Retractores elásticosUniversitario de Odense
Eléctrico maquinillaAesculapGT420
Fentanilo 0,315 mg/mlMatriz
Almohadilla térmica - PhysioSuiteKent Scientific Corp.
Isoflurano 1000mg AttaneScan Vet
Vaporizador de isoflurano - PPVPenlon
Micro pinza de jewlerLawton1405-05
Micro PortaagujasLawton25679-14
Micro tijerasLawton10128-15
Micro pinzas de atadoLawton43953-10
Jeringa Microfine U-40 0,5mlBD328821
Jeringa Microlance 25gBD
Jeringa Microlance 27gBD
Midazolam 5 mg/ml (hameln)Matrix
Portaagujas - Circle woodLawton08-0065
Hisopos no tejidosSelefa
Microscopio óptico Opmi F170Zeiss
Patent azul V - 25 mg/mlTijeras Guerbet
- JosephBDRH1630
Escáner preclínico multimodal Siemens INVEONSoluciones preclínicas Siemens Fuente
de radiación - D3100Gulmay
Stata Software estadístico: Release 15StataCorp LLC
Temgesic - 0,2 mgIndivior
Vet - viscotearsBausch & Lomb
Hospital Ungüento oftalmológico

Referencias

  1. Lawenda, B. D., Mondry, T. E., Johnstone, P. A. S. Lymphedema: a primer on the identification and management of a chronic condition in oncologic treatment. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 59 (1), 8-24 (2009).
  2. Greene, A. K. Epidemiology and morbidity of lymphedema.

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Modelo murinoirradiación de la extremidad posteriorligadura linfáticatécnica microquirúrgicaazul patente Vextirpación de ganglios linfáticosvolumen de la extremidad posterioranálisis estadísticoprotocolo de irradiación