Un modelo de inoculación tardía de la infección crónica por la herida de Pseudomonas aeruginosa

Resumen

Describimos un protocolo de inoculación retardada para generar infecciones crónicas por heridas en ratones inmunocompetentes.

Resumen

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) es un importante patógeno nosocomial de creciente relevancia para la salud humana y la enfermedad, particularmente en el establecimiento de infecciones crónicas de heridas en pacientes diabéticos y hospitalizados. Existe una necesidad urgente de modelos de infección crónica para ayudar en la investigación de la patogénesis de heridas y el desarrollo de nuevas terapias contra este patógeno. Aquí, describimos un protocolo que utiliza la inoculación retrasada 24 horas después de la herida escisión de espesor completo. La infección de la matriz de heridas provisionales presente en este momento es un aclaramiento rápido o la diseminación de la infección y, en su lugar, establece una infección crónica que dura de 7 a 10 días sin necesidad de implantación de materiales extraños o supresión inmunitaria. Este protocolo imita un curso temporal típico de infección postoperatoria en humanos. El uso de una cepa luminiscente de P. aeruginosa (PAO1:lux) permite una evaluación diaria cuantitativa de la carga bacteriana para las infecciones de la herida de P. aeruginosa. Este nuevo modelo puede ser una herramienta útil en la investigación de la patogénesis bacteriana y el desarrollo de nuevas terapias para infecciones crónicas de la herida de P. aeruginosa.

Introducción

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) es una bacteria Gram-negativa en forma de varilla con creciente relevancia para la salud humana y la enfermedad. Es responsable de la extensiva morbilidad y mortalidad en entornos nosocomiales, particularmente involucrando infecciones de heridas en pacientes inmunocomprometidos^1,2. La aparición de cepas multirresistentes de este patógeno ha proporcionado un mayor impulso para la investigación de factores que contribuyen a la virulencia de P. aeruginosa, mecanismos de resistencia a los antibióticos P. aeruginosa, y nuevos métodos para la....

Protocolo

Todos los métodos descritos aquí han sido aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad de Stanford.

1. Preparación y crecimiento de bacterias

1. Llevar a cabo todo el trabajo con P. aeruginosa y animales con precauciones BSL-2 según el comité institucional de bioseguridad del investigador y las directrices del comité de uso animal. Realice todos los pasos descritos aquí con P. aeruginosa,incluida la inoculación del ratón, en un gabinete de bioseguridad.
2. La cepa luminiscente PAO1:lux de P. aeruginosa está disponible en nuestro laboratorio bajo petició....

Resultados

Utilizando una cepa luminiscente de PAO1 con un plásmido que codifica el sistema de reportero luxABCDE (PAO1:lux), realizamos heridas escisiones en ratones, inoculamos estas heridas con P. aeruginosa planctónica 24 h más tarde, y medimos la carga bacteriana a lo largo del tiempo(Figura 1 y Figura 2). Una imagen representativa obtenida mediante un sistema óptico de imágenes demuestra que este modelo da como resultado una .......

Discusión

Hemos desarrollado un nuevo modelo de infección por heridas de inoculación retardada P. aeruginosa. La estrategia de retrasar la inoculación con bacterias hasta 24 h después de la herida escisión permite la evaluación de infecciones de heridas durante un período de 1 semana. Mediante el uso de una cepa luminiscente de P. aeruginosa, es posible realizar un seguimiento de la progresión de la infección a lo largo del curso de la infección. El curso más largo de la infección en comparación con otros modelos.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Cloruro de sodio al 0,9% inyectable	Hospira	2484457
18 G x 1 aguja estéril	BD	305195
25 G x 1 1/5 aguja estéril	BD	305127
Hisopo con alcohol	BD	326895
Aura Software de imágenes	Spectral Instruments Imaging	n/a
Betadine	Purdue Frederick Company	19-065534
Buprenorfina SR LAB	Zoopharm	n/a
C57BL/6J ratones machos	The Jackson Laboratory	000664
Punzón de biopsia desechable, 6 mm	Integra	33-36
Tijeras finas - Carburo de tungsteno	Fine Science Tools	14568-09
Esterilizador seco de perlas de vidrio	Aparato Harvard	61-0183
Agar granulado	Fisher BioReagents	BP9744
Almohadilla térmica	Milliard	804879481218
Jeringa de insulina con aguja de 28 G	BD	329461
Lago X Imaging System	Spectral Instruments Imaging	n/a
Caldo LB	Fisher BioReagents	BP1426
Leur-Lok Jeringa de 1 mL	BD	309628
Mini Arco Animal Trimmer	Wahl Professional	919152
Nair Loción Depilatoria con Aceite de Bebé	Church y Dwight	n/a Disponible	en cualquier farmacia
Pinzas de octágono	Herramientas de ciencia fina	11041-08
Placa de Petri	Falcon	351029
solución salina tamponada con fosfato (PBS) 1x	Corning	21-040-CV
Envoltura adhesiva para prensar y sellar	Glad	n/a Jeringa
de insulina SafetyGlide con aguja de 30 G	BD	305934
Jeringa de insulina Safetyglide, 1/2 mL, 30 G x 5/16 TW	Báscula de	305934
	BD Ohaus Scout Pro	SP202
Suplemento Nutricional Suplical Henry	Schein Salud Animal	29908
Tegaderm, 6 cm x 7 cm	3M	1624W