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Artículo de método

Medición de la plasticidad de la privación visual monocular y la dominación ocular en la corteza visual primaria del ratón

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DOI:

10.3791/60600

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8 de febrero de 2020

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Aquí, presentamos protocolos detallados para la privación visual monocular y el análisis de plasticidad de dominio ocular, que son métodos importantes para estudiar los mecanismos neuronales de la plasticidad visual durante el período crítico y los efectos de genes específicos en desarrollo visual.

Resumen

La privación visual monocular es un excelente paradigma experimental para inducir la plasticidad de la respuesta cortical visual primaria. En general, la respuesta de la corteza al ojo contralateral a un estímulo es mucho más fuerte que la respuesta del ojo ipsilateral en el segmento binocular de la corteza visual primaria del ratón (V1). Durante el período crítico de los mamíferos, la sutura del ojo contralateral dará lugar a una rápida pérdida de capacidad de respuesta de las células V1 a la estimulación ocular contralateral. Con el desarrollo continuo de tecnologías transgénicas, cada vez más estudios utilizan ratones transgénicos como modelos experimentales para examinar los efectos de genes específicos en la plasticidad de la dominación ocular (OD). En este estudio, introducimos protocolos detallados para la privación visual monocular y calculamos el cambio en la plasticidad de la DoS en el ratón V1. Después de la privación monocular (MD) durante 4 días durante el período crítico, se miden las curvas de ajuste de orientación de cada neurona, y las curvas de afinación de la capa cuatro neuronas en V1 se comparan entre la estimulación de los ojos ipsilaterales y contralaterales. El índice de sesgo contralateral (CBI) se puede calcular utilizando la puntuación de DO ocular de cada célula para indicar el grado de plasticidad de la DoD. Esta técnica experimental es importante para estudiar los mecanismos neuronales de la plasticidad de la DoC durante el período crítico y para examinar las funciones de genes específicos en el desarrollo neuronal. La principal limitación es que el estudio agudo no puede investigar el cambio en la plasticidad neuronal del mismo ratón en un momento diferente.

Introducción

La privación visual monocular es un excelente paradigma experimental para examinar la plasticidad V1. Para estudiar la importancia de la experiencia visual en el desarrollo neuronal, David Hubel y Torsten Wiesel1,2 gatitos privados de visión normal en un ojo en varios momentos y durante diferentes períodos de tiempo. A continuación, observaron los cambios en la intensidad de respuesta en V1 para los ojos desfavorecidos y no desfavorecidos. Sus resultados mostraron un número anormalmente bajo de neuronas reaccionando al ojo que habíasido suturadas cerradas en los primeros tres meses. Sin embargo, las respuestas....

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Protocolo

En este protocolo, los machos C57Bl/6 fueron obtenidos del Instituto de Animales de Laboratorio de la Academia de Ciencias Médicas de Sichuan y del Hospital Popular Provincial de Sichuan. Todos los procedimientos experimentales y de cuidado de animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Ciencia y Tecnología Electrónica de China.

1. Privación monocular (MD) en el día 28 postnatal en ratones

  1. Coloque las herramientas quirúrgicas, la aguja de sutura (0,25 mm de diámetro, diámetro de la cuerda 0,07 mm) y los hisopos de algodón en una caja de aluminio y autoclave a 120 oC duran....

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Resultados

Los resultados experimentales descritos aquí permiten mediciones exitosas de plasticidad MD y OD a partir de un ratón desfavorecido y sin desfundado durante el período crítico (P19–P32). La Figura 1 muestra cómo realizar grabaciones de una sola unidad en la capa 4 de V1 de la zona binocular para comparar las respuestas en el ojo ipsilateral y contralateral 4 días después de MD. La Figura 2 muestra la clasificación de picos y las mediciones de ajuste de orientaci.......

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Discusión

Presentamos un protocolo detallado para MD y medición de la plasticidad OD mediante grabación de una sola unidad. Este protocolo es ampliamente utilizado en la neurociencia visual. Aunque el protocolo MD no es complicado, hay algunos procedimientos quirúrgicos críticos que deben seguirse cuidadosamente. En primer lugar, hay dos detalles importantes que garantizan la calidad de la costura. La sutura es lo suficientemente estable si los puntos se concentran en la parte medial del párpado. Por otra parte, se aplica 3 l de p.......

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Divulgaciones

Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

Agradecimientos

Este estudio fue apoyado por la National Natural Science Foundation of China (81571770, 81771925, 81861128001).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
502 pegamentoM& G Chenguang Papelería Co., Ltd.
Tarjeta de aprobaciónInstrumento NacionalPCI-6250
AgaroseBiowestG-10
AmplificadorSistema A-MModelo 1800
AtropinaAladdin Bio-Chem Technology Co., LtdA135946-5
Aparato estereotáxico cerebralRWD Life Science Co., Ltd68001
Tijeras de resorte Cohan-VannasFine Science Tools15000-02
Soluciones de lentes de contactoBeijing Dr. Lun Eye Care Products Co., Ltd.
Hisopos de algodónHenan Guangderun Medical Instruments Co., Ltd
Portaagujas finasSuZhou Stronger Medical Instruments Co., LtdCZQ1370
Forcep66 Vision Tech Co., Ltd.53320A
Pinza66 Visión Tech Co., Ltd.53072
Pinza66 Visión Tech Co., Ltd.#5
Almohadilla térmicaStrykerTP 700 T
IluminadorMotic China Group Co., Ltd.MLC-150C
IsofluranoRWD Life Science Co., LtdR510-22
monitor LCDPhilips (China) Investment Co., Ltd.39PHF3251/T3
MicroscopioSOPTOPSZMT1
Monitor de signos vitales no invasivoMouseox
Micromanipulador hidráulico de aceiteNARISHIGE International Ltd.PC-5N06022
Gel de ojos de vaselinaDezhou Yile Disinfection Technology Co., Ltd.17C801
Spike2Cambridge Electronic Design, Cambridge, Reino UnidoSpike2 Versión 9
Tijeras quirúrgicas66 Vision Tech Co., Ltd.54010
Tijeras quirúrgicas66 Vision Tech Co., Ltd.54002
Aguja de suturaNingbo Medical Co., Ltd3/8 arco 2.5 * 8
Electrodo de tungstenoFHC, IncL504-01B
XilocaínaHuaqing
AWG97028GM17064

Referencias

  1. Hubel, D. H., Wiesel, T. N. Effects of monocular deprivation in kittens. Naunyn-Schmiedebergs Archiv für experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 248 (6), 492-497 (1964).
  2. Daw, N. W., Fox, K., Sato, H., Czepita, D. Critical....

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Periodo críticoÍndice de sesgo contralateralCurvas de sintonización de la orientaciónRegistro electrofisiológicoEstereotaxiaAnálisis de componentes principalesAlgoritmo de K-medias