Disección y tinción de gotas de lípidos de los ovenocitos en larvas de Drosophila

Chuanxian Wei; Yan Yan; Xiaoli Miao; Renjie Jiao

doi:10.3791/60606

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Artículo de método

Disección y tinción de gotas de lípidos de los ovenocitos en larvas de Drosophila

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DOI:

10.3791/60606

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28 de diciembre de 2019

Chuanxian Wei^*¹ , Yan Yan^*¹ , Xiaoli Miao¹ , Renjie Jiao¹^,²^,³

¹Sino-French Hoffmann Institute, School of Basic Medical Sciences, Guangzhou Medical University, ²The Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University, ³The State Key Laboratory of Respiratory Disease, Guangzhou Medical University

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Aquí se presentan métodos detallados para la disección y la tinción de gotas lipídicas de los enocitos en larvas de Drosophila utilizando BODIPY 493/503, un tinte fluorescente específico de gotas de lípidos.

Resumen

Los lípidos son esenciales para el desarrollo animal y la homeostasis fisiológica. La desregulación del metabolismo lipídico da lugar a diversos defectos del desarrollo y enfermedades, como la obesidad y el hígado graso. Por lo general, los lípidos se almacenan en gotas de lípidos, que son los orgánulos multifuncionales de almacenamiento de lípidos en las células. Las gotas de lípidos varían en tamaño y número en diferentes tejidos y en diferentes condiciones. Se ha informado que las gotas de lípidos están estrechamente controladas a través de la regulación de su biogénesis y degradación. En Drosophila melanogaster, el enocito es un tejido importante para el metabolismo de los lípidos y se ha identificado recientemente como un análogo del hígado humano con respecto a la movilización de lípidos en respuesta al estrés. Sin embargo, los mecanismos subyacentes a la regulación del metabolismo de las gotas lipídicas en los enocitos siguen siendo esquivas. Para resolver este problema, es de suma importancia desarrollar un método fiable y sensible para visualizar directamente los cambios dinámicos de gotas lipídicas en los enocitos durante el desarrollo y en condiciones estresantes. Aprovechando el BODIPY 493/503 lipofílico, un tinte fluorescente específico de gotas lipídicas, descrito aquí es un protocolo detallado para la disección y posterior tinción de gotas lipídicas en los enocitos de larvas de Drosophila en respuesta a la inanición. Esto permite el análisis cualitativo de la dinámica de gotas lipídicas bajo diversas condiciones por microscopía confocal. Además, este método rápido y altamente reproducible también se puede utilizar en pantallas genéticas para identificar nuevos factores genéticos que implican el metabolismo de las gotas lipídicas en los enocitos y otros tejidos.

Introducción

Los lípidos son esenciales para la supervivencia celular. Además de su papel tradicional como componentes integrales de los sistemas de membrana celular, los lípidos también desempeñan funciones cruciales en el suministro de energía y la transducción de señalización a lo largo de los ciclos de vida de los animales individuales¹. Por lo tanto, el metabolismo de los lípidos debe ajustarse a estrictas regulaciones para mantener la hemostasis fisiológica en las células. Se sabe que la desregulación del metabolismo lipídico resulta en varias enfermedades, como la diabetes y el hígado graso. A pesar de la gran importancia del metabolismo lipídico en ....