Este artículo presenta procedimientos experimentales para evaluar las deficiencias de memoria en ratones epilépticos inducidos por pilocarpina. Este protocolo se puede utilizar para estudiar los mecanismos fisiofitosiológicos del deterioro cognitivo asociado a la epilepsia, que es una de las comorbilidades más comunes en la epilepsia.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Evaluación de la función de la memoria en ratones epilépticos inducidos por pilocarpina
En este artículo
Resumen
Resumen
El deterioro cognitivo es una de las comorbilidades más comunes en la epilepsia del lóbulo temporal. Para recapitular el deterioro cognitivo asociado a la epilepsia en un modelo animal de epilepsia, generamos ratones epilépticos crónicos tratados con pilocarpina. Presentamos un protocolo para tres pruebas de comportamiento diferentes utilizando estos ratones epilépticos: localización de objetos nuevos (NL), reconocimiento de objetos nuevos (NO) y pruebas de separación de patrones (PS) para evaluar el aprendizaje y la memoria de lugares, objetos y contextos, respectivamente. Explicamos cómo configurar el aparato conductual y proporcionar procedimientos experimentales para las pruebas NL, NO y PS después de una prueba de campo abierto que mide las actividades de locomotora basal de los animales. También describimos las ventajas técnicas de las pruebas NL, NO y PS con respecto a otras pruebas de comportamiento para evaluar la función de la memoria en ratones epilépticos. Por último, analizamos las posibles causas y soluciones para que los ratones epilépticos no puedan hacer 30 s de buen contacto con los objetos durante las sesiones de familiarización, lo que es un paso crítico para las pruebas de memoria exitosas. Por lo tanto, este protocolo proporciona información detallada sobre cómo evaluar las deficiencias de memoria asociadas a la epilepsia mediante ratones. Las pruebas NL, NO y PS son ensayos simples y eficientes que son apropiados para la evaluación de diferentes tipos de memoria en ratones epilépticos.
Introducción
La epilepsia es un trastorno crónico caracterizado por convulsiones recurrentes espontáneas1,,2,,3. Debido a que las convulsiones repetitivas pueden causar anomalías estructurales y funcionales en el cerebro1,2,3, la actividad convulsiva anormal puede contribuir a la disfunción cognitiva, que es una de las comorbilidades asociadas a la epilepsia más comunes4,5,6. Contrariamente a los eventos....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
Todos los procedimientos experimentales fueron aprobados por el Comité de ética de la Universidad Católica de Corea y se llevaron a cabo de conformidad con la Guía de los Institutos Nacionales de Salud para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (NIH Publications No. 80-23).
1. Prueba de ubicación de objetos novedosos (NL)
- Preparar ratones epilépticos C57BL/6 o transgénicos 4–6 semanas después de la inyección de pilocarpina.
NOTA: Las convulsiones agudas fueron inducidas por inyección intraperitoneal (IP) de pilocarpina, siguiendo el protocolo detallado en nuestro informe anterior14. - Trans....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
En la Figura 1se muestra un cronograma experimental general y una configuración para evaluar la función cognitiva. Seis semanas después de la introducción de las convulsiones agudas inducidas por la pilocarpina, los ratones fueron sometidos a las pruebas de NL, NO y PS en ese orden separados por períodos de descanso de 3 días entre las pruebas (Figura 1A). Para la prueba NL, se colocaron dos objetos idénticos en el campo abierto durante la sesión de familiarizac.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
Este trabajo describe procedimientos experimentales para evaluar la función cognitiva en ratones con epilepsia crónica. Muchos paradigmas de prueba de comportamiento diferentes se utilizan para evaluar las funciones de aprendizaje y memoria en ratones18. El laberinto de agua Morris, el laberinto de brazos radiales, el laberinto Y, el acondicionamiento contextual del miedo y las pruebas basadas en objetos son las pruebas de comportamiento más utilizadas y proporcionan resultados confiables. Entre e.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Agradecemos al Dr. Jae-Min Lee por su apoyo técnico. Este trabajo fue apoyado por las subvenciones de la National Research Foundation of Korea (NRF) financiadas por el gobierno de Corea (NRF-2019R1A2C1003958, NRF-2019K2A9A2A08000167).
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Jeringa de 1 ml | Sung-shim | Úselo con la aguja de calibre 26 o 30 | |
| Etanol al 70% | Duksan | UN1170 | Spray para limpiar la caja y los objetos |
| Cortina | Para evitar señales visuales innecesarias | ||
| Cresyl violeta | Sigma | C5042 | Para Cresyl violeta criotomo de tinción |
| Leica E21040041 | Para pañuelos cinta | ||
| adhesiva | para la colocación firme de los objetos medio de | ||
| montaje DPX | Sigma | 06522 | |
| serie de etanol | Duksan | UN1170 | Hacer 100%, 95%, 90%, 80%, 70% soluciones de etanol |
| placa de piso con patrones de rejilla estrechos | Leehyo-bio | Equipo de experimento conductual, tamaño de la placa: 42,5 x 42,5 x 0,5 cm, tamaño de la cuadrícula: 2,75 x Placa de suelo de 2,75 cm | |
| con patrones de rejilla anchos | Leehyo-bio | Equipo de experimento conductual, tamaño de la placa: 42,5 x 42,5 x 0,5 cm, tamaño de la rejilla: 5,5 x 5,5 cm | |
| iluminómetro | TES Electrical Electronic Corp. | 1334A | Para la medición de la iluminación de la habitación (60 Lux) |
| Unidad de cuidados intensivos | Thermocare | #W-1 | |
| clorhidrato de ketamina | Yuhan | 7003 | Uso para anestesiar el ratón para la perfusión transcárdica |
| Lámpara LED | Lungo | P13A-0422-WW-04 | Iluminación para los objetos |
| de la sala de pruebas de comportamientoMuñeco de goma, tubo de plástico de 50 ml, frasco de vidrio Coplin, frasco de plástico T, botella de vidrio | |||
| caja de campo abierto | Leehyo-bio | Equipo de experimento conductual, tamaño: 44 x 44 x 31 cm | |
| toalla de papel | Yuhan-Kimberly | 47201 | Úselo para secar caja de campo abierto y objetos |
| paraformaldehído Merck | Millipore | 104005 | Make 4% solución |
| de clorhidrato de pilocarpina | Sigma | P6503 | |
| Úselo para ubicar los objetos en la caja de campo abierto | |||
| nitrato de metilo de escopolamina | Sigma | S2250 | Hacer 10X stock |
| Smart system 3.0 | Panlab | Cronómetro del sistema de seguimiento de video | |
| Junso | JS-307 | Para la medición de las actividades exploratorias de los ratones | |
| sacarosa | Sigma | S9378 | Para la crioprotección de secciones de tejidos |
| sal de hemisulfato de terbutalina | Sigma | T2528 | Marca 10X |
| (cámara CCD) | Vision | VCE56HQ-12 | Coloque la cámara directamente sobre la cabeza de la caja de campo abierto |
| , xilacina (Rompun) | Bayer, corea | KR10381 | Úselo para anestesiar al ratón para la perfusión transcárdica |
| xileno | Duksan | UN1307 | para Tinción de violeta cresilo |
Referencias
- Chang, B. S., Lowenstein, D. H. Mechanisms of disease - Epilepsy. New England Journal of Medicine. 349 (13), 1257-1266 (2003).
- Scharfman, H. E. The neurobiology of epilepsy. Current Neurology and Neuroscience Report. 7 (4), 348-354 (2007).
- Rakhade, S. N., Jensen, F. E. ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
Explorar más artículos
Evaluación de la función de la memoriamodelo de ratones epilépticoslocalización de objeto novedosoreconocimiento de objeto novedosoprueba de separación de patronesprueba de campo abiertoseguimiento conductual por videosesiones de habituaciónsesión de familiarizacióncálculo de la tasa de discriminación
