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Artículo de método

Fabricación de la interfaz nerviosa periférica regenerativa compuesta (C-RPNI) en la rata adulta

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DOI:

10.3791/60841

25 de febrero de 2020

En este artículo

Resumen

El siguiente manuscrito describe un método novedoso para desarrollar un sistema de retroalimentación neuronal biológico de bucle cerrado llamado la interfaz nerviosa periférica regenerativa compuesta (C-RPNI). Esta construcción tiene la capacidad de integrarse con los nervios periféricos para amplificar las señales motoras eferentes mientras que al mismo tiempo proporciona una retroalimentación sensorial aferente.

Resumen

Los recientes avances en neuroprótesis han permitido a quienes viven con pérdida de extremidades reproducir muchas funciones nativas de la extremidad ausente, y esto a menudo se logra a través de la integración con el sistema nervioso periférico. Desafortunadamente, los métodos actualmente empleados se asocian a menudo con daños importantes en los tejidos que impiden el uso prolongado. Además, estos dispositivos a menudo carecen de cualquier grado significativo de retroalimentación sensorial, ya que su construcción compleja amortigua cualquier vibración u otras sensaciones de las que un usuario pueda haber dependido anteriormente al usar prótesis más simples. La interfaz nerviosa periférica regenerativa compuesta (C-RPNI) fue desarrollada como una construcción biológica estable con la capacidad de amplificar las señales nerviosas del motor eferente mientras proporciona retroalimentación sensorial aferente simultánea. El C-RPNI consiste en un segmento de injerto dérmico y muscular libre asegurado alrededor de un nervio sensorimotor mixto objetivo, con reinnervación del nervio motor preferencial del injerto muscular y reinnervación del nervio sensorial del injerto dérmico. En ratas, esta construcción ha demostrado la generación de potencial estridebidos de acción muscular compuesta (CMAP), amplificando la señal del nervio objetivo desde el nivel de micro a mil voltios, con relaciones señal-ruido promediando aproximadamente 30-50. La estimulación del componente dérmico de la construcción genera potenciales de acción nerviosa sensorial compuesta (CSP) en el nervio proximal. Como tal, esta construcción tiene una utilidad futura prometedora para la realización de la prótesis ideal e intuitiva.

Introducción

Las amputaciones de extremidades afectan a casi 1 de cada 190 estadounidenses1, y se prevé que su prevalencia aumente de 1,6 millones hoy a más de 3,6 millones para 20502. A pesar del uso documentado durante más de un milenio, la prótesis ideal aún no se ha realizado3. Actualmente existen prótesis complejas capaces de múltiples manipulaciones articulares con el potencial de reproducir muchas funciones motoras de la extremidad nativa4,5. Sin embargo, estos dispositivos no se consideran intuitivos, ya que el movimiento protésico deseado suel....

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Protocolo

Todos los experimentos con animales se realizan bajo la aprobación del Comité de Uso y Cuidado de Animales de la Universidad de Michigan.

NOTA: Las ratas donantes tienen acceso gratuito a alimentos y agua antes de los procedimientos de donación de la piel y los músculos. La eutanasia se realiza bajo anestesia profunda seguida de inyección intracardiaca de cloruro de potasio con un método secundario de neumotórax bilateral. Cualquier cepa de rata se puede utilizar teóricamente con este experimento; sin embargo, nuestro laboratorio ha logrado resultados consistentes tanto en ratas Fischer F344 machos como hembras (200-250 g) a los dos o cuatr....

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Resultados

La fabricación de la construcción se considera infructuosa si las ratas desarrollan una infección o no sobreviven a la anestesia quirúrgica. Investigaciones anteriores han indicado que estas construcciones requieren aproximadamente tres meses para revascularizar y reinnervate2,3,17,36. Después del período de recuperación de tres meses, se pueden realizar pruebas.......

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Discusión

El C-RPNI es una construcción novedosa que proporciona amplificación simultánea de las señales eferentes motoras de un nervio objetivo con el suministro de retroalimentación sensorial aferente. En particular, el C-RPNI tiene una utilidad única para aquellos que viven con amputaciones proximales, ya que sus fascículos motores y sensoriales no se pueden separar mecánicamente fácilmente durante la cirugía. En su lugar, el C-RPNI utiliza las propiedades inherentes de reinnervación preferencial del nervio mismo para estimular.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen revelaciones.

Agradecimientos

Los autores desean agradecer a Jana Moon por la asistencia técnica experta. Los estudios presentados en este documento fueron financiados a través de una subvención R21 (R21NS104584) a SK.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
#15 ScalpelAspen Surgical, IncRef 371115Cuchillas quirúrgicas de acero al carbono con respaldo acanalado (#15)
4-0 Sutura crómicaEthicon SKU# 1654GP-3 Aguja de corte inverso
5-0 Sutura crómicaEthicon SKU# 687GP-3 Aguja de corte inverso
6-0 Sutura EthilonEthicon SKU# 697GP-1 Aguja de corte inverso (sutura de nylon)
8-0 Sutura monofilamentoAROSurgialT06A08N14-13Sutura monofilamento de poliamida negra en aguja cónica roscada
Ratas experimentalesEnvigoF344-NH-sdLas ratas son Fischer F344 Strain
Fluriso (Isofluorane)VetOne13985-528-40anestésico inhalatorio
con piedraMaestro mecánicomodelo 151369Herramienta rotativa de mano; El kit viene con múltiples piedras de grano fino
OxígenoGases criogénicosUN1072Bombonas de oxígeno estándar de grado médico
Cloruro de potasioAPP Pharmaceuticals63323-965-20Forma inyectable, 2 mEq/mL
Povidona Yodada USPMediChoice65517-0009-1Solución tópica al 10%, puede usar una botella para múltiples preparaciones quirúrgicas
Puralube Vet Ungüento OftalmicoDechra17033-211-38Pomada protectora corneal para usar durante el procedimiento
Rimadyl (Caprofen)Zoetis, Inc.NADA# 141-199Forma inyectable, 50 mg/mL
Microscopio estereoscópicoLeicamodelo M60El usuario puede ajustar el aumento a su preferencia
Instrumentos quirúrgicosHerramientas de ciencia finaVariosEl usuario puede elegir instrumentos de acuerdo con sus preferencias personales o de lo que está disponible actualmente en su laboratorio
Pomada antibiótica tripleMediChoice39892-0830-2El ungüento viene en paquetes estériles y desechables
VaporStick 3SurgivetV7015Torre de anestesia con espacio para bidón de isofluorano y oxígeno
Webcol Alcohol PrepCovidenRef 6818Toallitas de preparación con alcohol; use una toallita nueva para cada preparación
Taladro de alta velocidad con motor de micromotor

Referencias

  1. Biddiss, E. A., Chau, T. T. Upper limb prosthesis use and abandonment: A survey of the last 25 years. Prosthetics and Orthotics International. 31 (3), 236-257 (2007).
  2. Kung, T. A., et al.

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Fabricación de C-RPNIpreparación de injerto muscularpreparación de injerto cutáneoaislamiento del nervio peroneo comúnpotenciales de acción musculares compuestospotenciales de acción nerviosos sensoriales compuestospruebas electrofisiológicastécnica de microscopio quirúrgico