En este experimento, un ratón se inyecta en su vena trasera con isoticianato-dextrano Rhodamine B que puede manchar los vasos sanguíneos. Después de que el hígado está expuesto y fijo, una parte específica del hígado se puede seleccionar para observar el tejido profundo en el cuerpo vivo utilizando microscopía multifotónica.
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Artículo de método
Observación microscópica multifotópica de vasos en el tejido hepático del ratón
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En este artículo
Resumen
Resumen
Observar la dinámica intravascular del tejido hepático del ratón nos permite realizar observaciones y estudios más profundos sobre las enfermedades relacionadas con los tejidos del hígado del ratón. Un ratón se inyecta con un tinte que puede manchar los vasos sanguíneos. Para observar el hígado del ratón in vivo, se expone y fija en un marco. Las imágenes bidimensionales y tridimensionales de los vasos sanguíneos del tejido hepático se obtienen utilizando un microscopio multifotófonos. Las imágenes de los tejidos en los sitios seleccionados se adquieren continuamente para observar cambios a largo plazo; también se observan los cambios dinámicos de los vasos sanguíneos en los tejidos hepáticos. La microscopía multifotónica es un método para observar la función celular y celular en secciones u órganos de tejido profundo. La microscopía multifotónica tiene sensibilidad a la microestructura tisular y permite la toma de imágenes de tejidos biológicos a alta resolución espacial in vivo, proporcionando la capacidad de capturar la información bioquímica de la organización. Microscopía multifoto se utiliza para observar parte del hígado, pero arreglar el hígado para hacer la imagen más estable es problemático. En este experimento, se utiliza una ventosa de vacío especial para arreglar el hígado y obtener una imagen más estable del hígado bajo el microscopio. Además, este método se puede utilizar para observar cambios dinámicos de sustancias específicas en el hígado marcando tales sustancias con colorantes.
Introducción
Los vasos sanguíneos pueden proporcionar nutrientes para varios tejidos de órganos del cuerpo humano, e intercambiar sustancias. Al mismo tiempo, muchas citoquinas, hormonas, medicamentos y células también funcionan a través del transporte vascular a lugares específicos. Observar los cambios vasculares en el tejido hepático puede ayudar a entender la distribución del flujo sanguíneo en el tejido hepático y el transporte de sustancias, y ayudar en el análisis de ciertas enfermedades relacionadas con la vascular1,2.
Hay muchas maneras de observar los vasos sanguíneos del hígado en rat....
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Protocolo
Todos los cuidados y procedimientos de los animales se ajustaban a las políticas del Hospital Nanfang de China para la salud y el bienestar (aplicación No: NFYY-2019-73).
1. Preparación del ratón
- Anestesia el ratón.
- Preparar pentobarbital sódico (50 mg/kg) en una jeringa.
- Coge el ratón (macho de 8 semanas C57BL/6) con la mano izquierda para que su vientre esté mirando hacia arriba y su cabeza sea más baja que su cola. Desinfectar la piel abdominal con un 75% de alcohol.
- Sosteniendo la jeringa en la mano derecha, perfore la línea blanca del abdomen con la aguja ligeramente hacia el lado derecho de la p....
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Resultados
La distribución de los vasos sanguíneos en el hígado se puede ver en la Figura 1,obtenida utilizando microscopía multifotónica. El vaso sanguíneo se divide en una pluralidad de ramas que emanan de un tronco y se distribuyen al espacio circundante. La circunferencia externa del vaso sanguíneo es roja, la cavidad interna es oscura y hay muchas cosas dentro. Cuanto más clara sea la imagen, más cerca del plano de observación será. También hay algunas manchas rojas alrededor, probablemente porque.......
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Discusión
Observar un tejido vivo específico es un medio eficaz para comprender los cambios, la localización y los efectos biológicos del material dentro del tejido17. En este experimento, los pasos importantes son la fijación del hígado con un accesorio de imágenes de órganos, que puede resolver el problema de los artefactos de movimiento debido a la respiración y los latidos del corazón, y el uso de un microscopio multifotófonos para la observación. Utilizando este método, los tejidos internos del hígado .......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81772133, 81902444), el Fondo de Ciencias Naturales de Guangdong (2020A1515010269, 2020A1515011367), el Proyecto de Investigación en Ciencia y Tecnología de la Salud Ciudadana de Guangzhou (201803010034, 201903010072) y el Proyecto militar de innovación médica (17CXZ008).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Jeringa de 1 mL x 2 | Hunan Pinan Medical Devices Technology | YA0551 | |
| Almohadilla térmica de 5 W | BiolinkOptics Technology | BL336 | |
| 75% etanol absoluto | Guangdong Guanghua Sci-Tech | 1.17113.023 | |
| Bola de algodón absorbente | Healthy Sanitation Kingdom | ||
| Mouse instrumento quirúrgico | RWD Life Science | SP0001-G | Incluyendo tijeras y pinzas |
| Microscopía multifotónica | Olympus | FV1200MPE | |
| Dispositivo de imagen de órganos | BiolinkOptics Technology | BL336 | Incluye ventosa, manguera, bomba de presión negativa y soporte |
| de isotiocianato de rodamina B; Dextran | Sigma | R9379 | |
| Afeitadora | Lei Wa | RE-3201 | |
| Pentobarbital sódico | Sigma | P3761-25G |
Referencias
- Wu, Z., et al. Multi-photon microscopy in cardiovascular research. Methods. 130, 79-89 (2017).
- Zhou, M., Ling, W., Luo, Y. Intrahepatic mass-forming cholangiocarcinoma growing in a giant hepatic hemangioma: A case report. Medicine (Baltimore)
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Reimpresiones y permisos
