Ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción inversa (RT-LAMP) para la detección específica y rápida del virus del lago Tilapia

Theerawut Phusantisampan; Pattarasuda Rawiwan; Sri  Rajiv Kumar Roy; Malinee Sriariyanun; Win Surachetpong

doi:10.3791/61025

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Artículo de método

Ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción inversa (RT-LAMP) para la detección específica y rápida del virus del lago Tilapia

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DOI:

10.3791/61025

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18 de mayo de 2020

Theerawut Phusantisampan¹ , Pattarasuda Rawiwan²^,³ , Sri Rajiv Kumar Roy² , Malinee Sriariyanun⁴ , Win Surachetpong²^,³

¹Department of Biotechnology, Faculty of Applied Science, King Mongkut's University of Technology North Bangkok (KMUTNB), ²Department of Veterinary Microbiology and Immunology, Faculty of Veterinary Medicine, Kasetsart University, ³Center for Advanced Studies for Agriculture and Food, Institute for Advanced Studies, Kasetsart University, ⁴Department of Chemical and Process Engineering, The Sirindhorn Thai-German International Graduate School of Engineering (TGGS), King Mongkut's University of Technology North Bangkok (KMUTNB)

En este artículo

Resumen

Presentamos un ensayo RT-LAMP para la detección de TiLV en peces de tilapia utilizando instrumentos simples durante un período de tiempo relativamente corto en comparación con las técnicas convencionales rt-PCR. Este protocolo puede ayudar a controlar la propagación epidémica de TiLVD, especialmente en los países en desarrollo.

Resumen

La enfermedad por el virus del lago Tilapia (TiLVD), una enfermedad viral emergente en la tilapia causada por el virus del lago tilapia (TiLV), es un desafío persistente en la industria de la acuicultura que ha dado lugar a la morbilidad masiva y mortalidad de tilapia en muchas partes del mundo. Por lo tanto, es necesario un ensayo diagnóstico eficaz, rápido y preciso para la infección por TiLV para detectar la infección inicial y prevenir la propagación de la enfermedad en la acuicultura. En este estudio, se presenta un método de amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción inversa (RT-LAMP) altamente sensible y práctico para detectar el virus del lago tilapia en el tejido de los peces. Una comparación de los ensayos RT-qPCR y RT-LAMP de muestras infectadas reveló resultados positivos en 63 (100%) y 51 (80,95%) muestras, respectivamente. Además, un análisis de muestras no infectadas mostró que los 63 tejidos no infectados arrojaron resultados negativos tanto para los ensayos RT-qPCR como para RT-LAMP. La reactividad cruzada con cinco patógenos en la tilapia se evaluó utilizando RT-LAMP, y todas las pruebas mostraron resultados negativos. Tanto las muestras de hígado como de moco obtenidas de peces infectados mostraron resultados comparables utilizando el método RT-LAMP, lo que sugiere que la mucosidad se puede utilizar en RT-LAMP como un ensayo no letal para evitar la matanza de peces. En conclusión, los resultados demostraron que el ensayo RT-LAMP presentado proporciona un método eficaz para la detección de TiLV en el tejido tilapia dentro de 1 h. Por lo tanto, se recomienda el método como herramienta de cribado en granjas para el diagnóstico rápido de TiLV.

Introducción

La enfermedad por el virus del lago Tilapia (TiLVD) es una enfermedad viral en la tilapia (Oreochromis spp.) que al parecer causa muertes por tilapia en muchas regiones del mundo, incluyendo Asia¹^,², Africa, y América. La enfermedad fue reconocida por primera vez durante la mortalidad masiva de tilapia en 2009 en Israel, donde el número de tilapia silvestre en el lago Kinneret se desplomó dramáticamente de 257 a 8 toneladas por año^2. La enfermedad es causada por el virus del lago tilapia (TiLV), que ha sido asignado a la familia Amnoonviridae como un nuevo género T....