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Artículo de método

Un enfoque de sobremesa para la ubicación específica de la barrera hematoencefálica que se abre con ultrasonido enfocado en un modelo de rata

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DOI:

10.3791/61113

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13 de junio de 2020

 ,  ,  , 
1Department of Radiology, University of Alabama at Birmingham, 2Department of Neurobiology, University of Alabama at Birmingham

En este artículo

Resumen

El ultrasonido enfocado con agentes de microburbuja puede abrir la barrera hematoencefálica de forma focal y transitoria. Esta técnica se ha utilizado para entregar una amplia gama de agentes a través de la barrera hematoencefálica. Este artículo proporciona un protocolo detallado para la entrega localizada al cerebro de roedores con o sin orientación de RMN.

Resumen

La cirugía estereotáxica es el estándar de oro para la administración localizada de fármacos y genes en el cerebro de roedores. Esta técnica tiene muchas ventajas sobre la entrega sistémica, incluyendo la localización precisa a una región cerebral objetivo y la reducción de los efectos secundarios fuera del objetivo. Sin embargo, la cirugía estereotáxica es altamente invasiva que limita su eficacia traslacional, requiere largos tiempos de recuperación y proporciona desafíos cuando se dirige a múltiples regiones cerebrales. El ultrasonido enfocado (FUS) se puede utilizar en combinación con microburbujas circulantes para abrir transitoriamente la barrera hematoencefálica (BBB) en regiones del tamaño de un milímetro. Esto permite la localización intracraneal de agentes entregados sistémicamente que normalmente no pueden cruzar el BBB. Esta técnica proporciona una alternativa no invasiva a la cirugía estereotáxica. Sin embargo, hasta la fecha esta técnica aún no ha sido ampliamente adoptada en los laboratorios de neurociencia debido al acceso limitado a equipos y métodos estandarizados. El objetivo general de este protocolo es proporcionar un enfoque de sobremesa para la apertura de FUS BBB (BBBO) que sea asequible y reproducible y, por lo tanto, pueda ser adoptado fácilmente por cualquier laboratorio.

Introducción

A pesar de los muchos descubrimientos en neurociencia básica, el número de tratamientos emergentes para trastornos neurodesarrollo y neurodegenerativos sigue siendo relativamente limitado1,2. Una comprensión más profunda de los genes, moléculas y circuitos celulares involucrados en trastornos neurológicos ha sugerido tratamientos prometedores irrealizables en los seres humanos con técnicas actuales3. Los tratamientos eficaces a menudo están limitados por la necesidad de ser penetrables en el cerebro y específicos del sitio4,5,6,7,8. Sin embargo, los métodos existentes de administración localizada de fármacos en regiones cerebrales específicas (por ejemplo, la administración mediante inyección o cánula) son invasivos y requieren una abertura que se debe hacer en el cráneo9. La invasión de esta cirugía impide el uso rutinario del parto localizado en el cerebro humano. Además, el daño tisular y las respuestas inflamatorias resultantes son confundaciones omnipresentes para estudios básicos y preclínicos que se basan en la inyección intracerebral10. La capacidad de entregar agentes no invasivas a través de la barrera hematoencefálica (BBB) y dirigirse a regiones cerebrales específicas podría tener un tremendo impacto en los tratamientos para trastornos neurológicos, al mismo tiempo que proporciona una poderosa herramienta de investigación para la investigación preclínica.

Un método de transporte dirigido a través del BBB con daño mínimo en el tejido es el ultrasonido centrado transcraneal (FUS) junto con microburbujas para abrir focal y transitoriamente el BBB11,12,13,14,15,16. Fus BBB apertura ha ganado atención reciente para el tratamiento de trastornos neurodegenerativos, accidente cerebrovascular y glioma mediante la localización de terapias para dirigirse a regiones cerebrales como factores neurotróficos17,18,19,terapias génicas20,21,22,anticuerpos23,neurotransmisores24,y nanopartículas25,26,27,28,29. Con su amplia gama de aplicaciones y su naturaleza no invasiva30,31,la apertura FUS BBB es una alternativa ideal a las inyecciones intracraneales estereotáxicas rutinarias. Además, debido a su uso actual en humanos30,32,investigaciones preclínicas utilizando esta técnica pueden considerarse altamente traslacionales. Sin embargo, la apertura de FUS BBB aún no ha sido una técnica ampliamente establecida en ciencia básica e investigación preclínica debido a la falta de accesibilidad. Por lo tanto, proporcionamos un protocolo detallado para un enfoque de sobremesa para la apertura de FUS BBB como punto de partida para los laboratorios interesados en establecer esta técnica.

Estos estudios se llevaron a cabo con un transductor de ultrasonido específico FUS de respaldo de aire de alta potencia o un transductor de inmersión ultrasónico enfocado en amortiguación de baja potencia. Los transductores fueron impulsados por un amplificador de potencia de RF diseñado para cargas reactivas y un generador de funciones de sobremesa estándar. Los detalles de estos artículos se pueden encontrar en la Tabla de materiales.

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Protocolo

Todos los procedimientos experimentales se realizaron de acuerdo con las directrices del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (UAB).

1. Configuración del equipo de conducción de ultrasonido enfocado

  1. Utilice cables BNC coaxiales de 50 Ohmios para conectar (1) la entrada del transductor de ultrasonido a la salida del amplificador rf y (2) la entrada del amplificador rf a la salida del generador de funciones.
  2. Ajuste el modo generador de funciones a una ráfaga sinusoide una vez por segundo con un ciclo de trabajo del 1%.
    1. Para el transductor de inmersión de baja potencia amortiguado de 1 MHz con una distancia focal de 0,8 pulgadas utilizada con un amplificador rf de 50 dB, establezca los ajustes iniciales en: onda sinusoidal de 1 MHz, pico de 1 V a pico, ciclo de 10k, intervalo de 1 s (o período).
    2. Para el transductor de alta potencia de 1,1 MHz respaldado por aire, establezca la configuración inicial en: onda sinusoidal de 1,1 MHz, pico de 50 mV a pico, ciclos de 11k, intervalo de 1 s.
      NOTA: No utilice los transductores a menos que estén sumergidos. No coloque una mano u otra parte del cuerpo en el enfoque de ultrasonido ni toque la cara del transductor mientras está funcionando.

2. Configuración de la encimera de ultrasonido enfocada

  1. Imprima en 3D el marco estereotáxico y el soporte de marco estereotáctico.
  2. Conecte el transductor al posicionador XYZ utilizando una abrazadera que sujeta una tubería de PVC (Figura 1a). Atornilla la abrazadera en la diapositiva del eje X y bloquea con una tuerca de ala.
    1. Si utiliza el transductor de ultrasonido de alta potencia, adjúntelo a la tubería de PVC utilizando un par de imanes coincidentes. Asegúrese de que un imán tiene un agujero y el otro tiene una protuberancia coincidente. Tapar la parte inferior de la tubería de PVC y fijar uno de los imanes a ella utilizando epoxi (ver Figura 1b).
    2. Conecte el segundo imán al centro superior del transductor de ultrasonido de alta potencia utilizando epoxi. Asegúrese de que está en el centro mismo del transductor (Figura 1c).
  3. Si utiliza el transductor de ultrasonido de alta potencia, haga un puntero para anular el posicionador XYZ. La punta de este puntero indica la ubicación en el espacio del centro del enfoque del transductor cuando el transductor de ultrasonido está unido al posicionador XYZ. Haga un puntero de un corte de aguja de 18 G para que sea la longitud de la distancia focal del transductor más el grosor del transductor (Figura 1d).
    1. Aplicar epoxi a un tercer imán (este imán también se empareja con el imán de la tapa de PVC) y fijarlo a la parte superior del puntero. A continuación, el puntero podrá fijarse al imán de la tubería de PVC para la anulación de XYZ (Figura 1d).
  4. Si utiliza el transductor de inmersión de baja potencia, imprima 3D el archivo para el puntero y el clip de montaje.
    1. Conecte el transductor de inmersión de baja potencia a la tubería de PVC recortando el clip de montaje a la tubería de PVC e inserte el transductor en el anillo (Figura 1f).
  5. Hacer un baño de agua pegando piezas cortadas de lámina acrílica que será capaz de descansar sobre la cabeza del animal por encima del marco estereotáctico (Figura 1e).
    1. Corta una abertura en la parte inferior del baño que es del tamaño de la cabeza del animal. Cubra el agujero en el baño de agua con una cinta poliimida.
      NOTA: Se debe tener cuidado para asegurarse de que el agua no se filtre alrededor de la cinta poliimida, ya que puede mojar el pelaje de la rata y causar hipotermia.
  6. Haga una resonancia magnética fiducial llenando una esfera de plástico o vidrio de cáscara fina de 4 mm de diámetro con un líquido visible por RMN (por ejemplo, aceite de vitamina E) y sellarlo. Colóquelo en el soporte fiducial MRI en el lado derecho del marco estereotáxico impreso en 3D (Figura 2a).
  7. Asegure firmemente el soporte de marco impreso en 3D al posicionador XYZ en una buena ubicación para el posicionamiento animal. Deslice la lengüeta en el extremo rostral del soporte del bastidor en el canal coincidente del riel del eje Y y ajástelo con tornillos de ajuste(Figura 1h,flechas rojas).
  8. Para conducir el posicionador XYZ, instale el convertidor USB a serie en un ordenador siguiendo las instrucciones del fabricante y conecte el convertidor. Instale el entorno de tiempo de ejecución y el software del controlador de motor en el PC.
    1. Asegúrese de que el puerto serie adecuado está seleccionado en el software seleccionando el convertidor USB a serie en el control desplegable de selección de puertos en el panel frontal del software del controlador. Conecte el convertidor USB al serial a la caja del controlador del motor paso a paso mediante un cable de cruce serie de 9 pines (por ejemplo, cable de módem nulo RS232).
    2. Ejecute el software del controlador para probar que los motores paso a paso se pueden conducir bajo control de software. Este paso puede requerir la asistencia del soporte de TI local.

3. Procedimiento de segmentación intracraneal

NOTA: Las ratas macho Sprague Dawley que pesaban 250-350 g fueron utilizadas para estos experimentos. Los animales tenían acceso gratuito al agua y a la comida para ratas, y se mantenían en un ciclo claro de 12:12 h.

  1. Poner al animal bajo anestesia (3% isoflurano con oxígeno) y comprobar la falta de respuesta a la pizca de dedo del pie. A continuación, inserte el catéter como se describe a continuación.
    1. Calentar la cola con una lámpara para hacer es más fácil golpear la vena. Tenga cuidado de no sobrecalentar al animal o quemar la cola.
    2. Una vez que el animal esté dormido (no responde a una pizca de dedo del pie), inserte el catéter de vena trasera de 24 G que se utilizará para entregar microburbujas, tinte azul Evans (EBD), contraste de RMN de gadobutrol si utiliza RMN y el agente experimental de interés. Una vez que se golpea la vena, la sangre llenará la vaina, retirará lentamente la aguja interna mientras empuja la vaina más lejos en la vena.
      NOTA: Vea a un guía como Stuart y Schroeder33 si hace las inyecciones de vena de cola de rata por primera vez.
    3. Si no hay flujo sanguíneo, mueva lentamente la vatina del catéter fuera de la vena para comprobar que la aguja puede haber atravesado la vena. Si la sangre fluye cuando el catéter se retira ligeramente, primero poke pasó por la vena y la colocación del catéter tendrá que reiniciarse en otra ubicación de la cola que sea rostral a la ubicación anterior.
  2. Llene el tapón del catéter con solución salina y atornille el tapón del catéter en el extremo del puerto del catéter tan pronto como el puerto se haya llenado de sangre. Envuelva cuidadosamente la cinta de laboratorio alrededor del catéter y la cola para mantenerla en su lugar. Comience con una pequeña pieza en la parte superior y trabaje en la dirección caudal, dejando el extremo mismo del tapón del catéter expuesto.
  3. Conecte la línea de anestesia al conector de anestesia en el marco estereotáxico(Figura 2a)y fije la cabeza de los animales en el marco colocando la boca en la barra de mordida y guiando las barras de los oídos a ambos canales auditivos, luego apriete los tornillos establecidos. Asegúrese de que la cabeza de los animales esté segura y nivelada.
  4. Mueva el animal a la cama de resonancia magnética y conecte la línea de anestesia al cono nasal. En este protocolo se utilizó una resonancia magnética de animales de pequeño calibre de 9,4 T.
  5. Recoge imágenes coronales y axiales ponderadas por T2 que capturan todo el cerebro, así como la resonancia magnética fiducial(Figura 2b)para mediciones de coordenadas. Proporcione al físico de resonancia magnética local o a la tecnología la siguiente información para que puedan crear el protocolo de RMN.
    1. Para imágenes coronales(figura 2b superior), utilice los siguientes parámetros: número de imágenes: 27, anchura: 62,2 mm, altura: 62,2 mm, profundidad: 37,97 mm, tamaño Voxel: 0,24 x 0,24 x 1,41 mm3.
    2. Para imágenes axiales(figura 2b inferior), utilice los siguientes parámetros: número de imágenes: 13, Ancho: 61,47 mm, Altura: 53,81 mm, Profundidad: 16,7 mm, Tamaño voxel: 0,41 x 0,21 x 1,29 mm3.
      NOTA: No es necesario tener estos parámetros exactos siempre y cuando el coronal en resolución plana esté cerca de 0,25 mm y las imágenes cubran todo el cerebro y la fiducial.
  6. Recopile las mediciones de coordenadas de las imágenes anteriores grabando la distancia desde la resonancia magnética fiducial a la región cerebral que se destinará con FUS.
    1. En el escáner, en las imágenes coronales recogidas en el paso 3.5, encuentra la imagen en la que el fiducial es el más grande, indicando el centro del fiducial. Registre la distancia desde la parte superior del fiducial a la región cerebral de interés en mm (el software de RMN tendrá una herramienta de medición de escala o punto, consulte la tecnología de resonancia magnética local o físico sobre cómo hacerlo) tanto en la dirección medial/lateral como en la dirección ventral dorsal(Figura 2b,parte superior).
    2. En el escáner, en las imágenes axiales recogidas en el paso 3.5, encuentra la imagen que muestra la parte superior del fiducial y mide la distancia desde el centro del fiducial hasta la región cerebral objetivo tanto en la dirección dorsal/ventral como en la dirección medial/lateral(Figura 2b,abajo).
    3. Compare las dos mediciones mediales/laterales y si son diferentes utilice el promedio. Estas mediciones de coordenadas se utilizarán más adelante en el paso 4.3 para guiar el punto focal FUS a la región cerebral objetivo con el posicionador XYZ.
  7. Recopile imágenes prescanes de RMN. Compare estas imágenes con las imágenes recopiladas después de la apertura de FUS BBB (Figura 4). Las imágenes ponderadas por T1 se utilizarán más tarde para visualizar la apertura de BBB, las imágenes ponderadas por T2 se utilizarán más tarde para garantizar que no se haya producido ningún daño tisular después del tratamiento fus34.
    1. Para imágenes axiales ponderadas por T1, utilice los siguientes parámetros: ancho: 30 mm, altura: 51,2 mm, profundidad: 3,0 mm, tamaño del voxel: 0,23 x 0,2 x 0,23 mm3,número de imágenes: 13.
    2. Para imágenes axiales ponderadas por T2, utilice los siguientes parámetros: ancho: 30 mm, altura: 51,2 mm, profundidad: 2,6 mm, tamaño del voxel: 0,2 x 0,2 x 0,2 mm3,número de imágenes: 13.
    3. Para imágenes coronales ponderadas por T1, utilice los siguientes parámetros: anchura: 30 mm, altura: 30 mm, profundidad: 27 mm, tamaño de voxel: 0,16 x 0,16 x 1 mm3,número de imágenes: 27.
    4. Para imágenes coronales ponderadas por T2, utilice los siguientes parámetros: ancho: 30 mm, altura: 30 mm, profundidad: 27 mm, tamaño de voxel: 0,12 x 0,12 x 1 mm3,número de imágenes: 27.
      NOTA: Al igual que en el paso 3.5, estos parámetros de imagen no tienen por qué ser exactamente los mismos que se enumeran. Estas imágenes tienen un FOV más pequeño y una resolución más alta que las recogidas en el paso 3.5.
  8. Manteniendo al animal en el marco estereotáxico, transporte rápidamente al animal desde la cama de resonancia magnética a la configuración de FUS de sobremesa. Asegúrese de que el animal permanezca dormido para la transferencia bajo el efecto de la anestesia.
  9. Para tiempos de transferencia más largos, utilice una caja para la transferencia que sea lo suficientemente grande como para adaptarse al animal y al marco. Con el tapón de anestesia todavía unido, coloque el animal y el marco dentro de la caja y permita que el exceso de isofluranos llene la caja durante unos minutos. Desenchufe la línea de anestesia y transfiéralo rápidamente.

4. Procedimiento de ultrasonido enfocado

  1. Al llegar a la configuración de la encimera FUS, conecte inmediatamente la línea de anestesia en el cono nasal y continúe funcionando 1,5-3% isoflurano con oxígeno. Haga esto lo más rápido posible para evitar que el animal se despierte.
  2. Deslice el marco en el soporte del marco y colóquelo firmemente en su lugar. Usa clippers para afeitar la cabeza del animal. Cepille el exceso de cabello y aplique crema para quitar el cabello en el cuero cabelludo. Deje reposar durante 3 minutos y limpie con agua y gasa.
  3. Si la RMN no está disponible para la segmentación, utilice un marco estereotáctico estándar (no impreso en 3D) para anular la posición del puntero a bregma tocando la punta del puntero a bregma (se necesitará una incisión del cuero cabelludo para esto) y anulando el software o grabando las coordenadas. Mueva el carro XYZ hacia arriba 50 mm haciendo clic en el botón arriba 50 del software e intercambiando el puntero por el transductor. Basado en un atlas cerebral de rata como se describió anteriormente35,muévase a las coordenadas cerebrales deseadas utilizando los botones de paso en el software. Si utiliza este método en lugar de RMN, vaya a la sección 4.6.
  4. Si utiliza instrucciones de RMN, adjunte el puntero y mueva el puntero a la ubicación de la resonancia magnética fiducial (Figura 1d,g). Coloque el puntero en la parte superior y central de la resonancia magnética fiducial (se proporciona un pequeño agujero en la parte superior del soporte fiducial para apuntar). Haga clic en el botón de posición nula, que es el punto desde el que se calcularon todas las distancias de la imagen de RMN.
  5. Retire el puntero y mueva el posicionador a las coordenadas medial/lateral y a las coordenadas rostrales/caudales. Levante el posicionador pulsando el botón hasta 50 para permitir la colocación del baño de agua y el gel de ultrasonido. Si se alcanza la parte superior del recorrido del eje Z, se invalidará la ubicación de anulación de valores NULL. La coordenada dorsal/ventral se establecerá después de añadir el transductor.
  6. Aplicar gel de ultrasonido en el cuero cabelludo del animal y colocar el baño de agua sobre el animal con la ventana de cinta poliimida presionada en el gel. Asegúrese de que no haya burbujas de aire en el gel de ultrasonido.
  7. Llene el baño de agua con agua desgasada.
  8. Si utiliza el transductor de alta potencia, baje el posicionador para que el imán esté justo encima del agua. Conecte el transductor al posicionador bajando cuidadosamente el transductor al agua en un ángulo para evitar que las burbujas de aire queden atrapadas debajo de la cara y conecten los imanes.
  9. Si utiliza el transductor de inmersión de baja potencia, baje el posicionador en el agua justo encima del clip del transductor. A continuación, clip el transductor en su lugar bajando lentamente en el agua en un ángulo para evitar que las burbujas de aire queden atrapadas debajo de la cara.
    NOTA: Un baño transparente es útil cuando se busca burbujas debajo de la cara del transductor.
  10. Baje el posicionador a la coordenada dorsal/ventral.
  11. Encienda el amplificador de potencia rf.
  12. Inyecte 1 ml/kg de tinte azul Evans (EBD) 3% pegando la punta de la aguja en el tapón del catéter e inyectándose. Deje que circule durante 5 minutos.
  13. Activa los microburbujas sacudiéndolos violentamente con el agitador de burbujas.
    1. Preparar 5 veces la dosis de 30 μL/kg de microburbujas (conc. de burbujas 1,2 x 1010/ml) en 0,2 ml de solución salina para tener en cuenta los 2 tratamientos fusibles y el tubo en el conjunto de perfusión alada de 18 G. Por ejemplo, si la rata pesa 200 g, luego llene la jeringa que contiene punta de aguja de 18 G con 30 μL de microburbujas en 1 ml de solución salina.
      NOTA: Asegúrese de utilizar puntas de aguja de 18 G para tomar e inyectar con el conjunto de perfusión alada.
    2. Invierta la jeringa varias veces para obtener una distribución uniforme de microburbujas. A continuación, acople y llene el conjunto de perfusión alada. Coloque la jeringa en la bomba de perfusión y coloque la bomba de perfusión para entregar 0,2 ml a una velocidad de 6 ml/h. Esto proporcionará una infusión lenta de los microburbujas durante la exposición al FUS de 2 minutos.
    3. Inserte la aguja alada en el tapón del catéter.
  14. En primer lugar, ejecute la bomba de perfusión, espere 3 s e inicie el tratamiento FUS pulsando el botón de activación de salida en el generador de funciones (etiquetado "en" en el generador de funciones en la Tabla de Materiales). Repita estos dos veces por región con 5 minutos en el medio para permitir que los microburbujas se despejen.
    1. Pulse de nuevo el botón de encendido en el generador de funciones para detener el tratamiento fus cuando la bomba de perfusión se detenga a 2 min.
    2. Espere 5 minutos para que los microburbujas se despejen. A continuación, inicie la perfusión y el segundo tratamiento fusible.
    3. Inmediatamente después del segundo tratamiento fus, inyectar contraste de gadobutrol (si se utiliza RMN) y el agente de interés, por ejemplo, partículas virales. El volumen total entregado de todos los agentes no debe exceder de 5 ml/kg.
      NOTA: El tiempo de entrega (por ejemplo, antes o después de la apertura de FUS BBB) del agente de interés puede variar dependiendo del agente utilizado.
  15. Apague el amplificador de potencia rf y transporte inmediatamente animal de vuelta a la resonancia magnética.

5. Confirmación por RMN de la apertura de BBB

  1. Si la RMN no está disponible, vaya a la sección 6 y utilice la expresión EBD para confirmar la apertura de BBB.
  2. Coloque el animal de nuevo en la cama de resonancia magnética en el mismo lugar exacto que en el paso 3.7 y conecte la línea de anestesia.
  3. Recoja las exploraciones posteriores a la RMN con los mismos parámetros de imagen utilizados en el paso 3.7 para visualizar la mejora de la RMN de gadobutrol en la región de apertura BBB (Figura 3b,e).

6. Perfusión y recolección de tejidos

  1. Perfundir al animal con un frío 4% de formalina hasta que la sangre se despeje por completo.
  2. Retire el cerebro y colóquelo en un 4% de formalina o PFA a 4 °C durante la noche. A continuación, coloque el cerebro en una solución de sacarosa al 30% hasta que el cerebro se hunda (aproximadamente 2-3 días). Por último, el flash se congela en nitrógeno líquido o en hielo seco y almacena a -80°C hasta la criosección.
  3. Congelar el cerebro en OCT y tomar criosecciones.
  4. Arregle y cubra las secciones para la microscopía de fluorescencia. La excitación ebd alcanza picos de 470 y 540 nm y los picos de emisión en 680 nm. Coverslip con medio de montaje DAPI con el fin de visualizar la morfología celular general.

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Resultados

Aquí, demostramos que el ultrasonido enfocado con microburbujas puede inducir la apertura BBB localizada utilizando los parámetros especificados anteriormente con el transductor de inmersión de baja potencia (Figura 3) y el transductor FUS (Figura 4). En primer lugar, en los primeros experimentos, el transductor de inmersión de baja potencia estaba dirigido a un hemisferio cerebral ya sea anterior(Figura 3b)o medial (

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Discusión

Aquí describimos un enfoque de sobremesa para la apertura fus BBB asistida por microburbuja con enfoques alternativos, incluyendo, dos transductores diferentes y métodos para la segmentación intracraneal con y sin orientación de RMN. Actualmente, con el fin de establecer la apertura FUS BBB guiada por RMN en el laboratorio, existe la opción de comprar excelentes dispositivos listos para usar que proporcionan resultados altamente estandarizados y reproducibles con interfaces fáciles de usar. Sin embargo, muchos laboratori...

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Esta investigación fue apoyada en parte por una subvención de infraestructura de investigación EPSCoR del NSF a la Universidad de Clemson (1632881). Además, esta investigación fue apoyada en parte por el Civitan International Research Center, Birmingham, AL. Los autores reconocen con gratitud el uso de los servicios e instalaciones de la Universidad de Alabama en Birmingham Small Animal Imaging Shared Facility Grant [NIH P30 CA013148]. Los autores reconocen a Rajiv Chopra por su apoyo y orientación.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Agitador de burbujasLantheus Medical ImagingVMIXVIALMIX, dispositivo de activación utilizado para activar las microburbujas de Definity
Tapón de catéter / Tapón de inyecciónTecnologías de infusión SAINúmero de pieza: ICTapón de catéter / Tapón
de inyección Tinte azul EvansSigmaE2129-10GColorante azul Evans
Generador de funcionesTektronixAFG3022BDoble canal, 250 MS/s, 25 MHz
Transductor FUS, 1,1 MHzFUS InstrumentsTX-110Transductor de ultrasonido esférico de 1 MHz compatible con resonancia magnética con hidrófono
Almohadilla térmica para ratones y ratasKent ScientificPS-03Almohadilla térmica- PhysioSuite para ratones y ratas
Bomba de infusiónKD Scientific780100KDS 100 Legacy Bomba de infusión de jeringa única
Cinta KaptonGizmo Dorkshttps://www.amazon.com/dp/B01N1GGKRC/
ref=cm_sw_em_r_mt_dp_U_GbR7Db56HKD91		Gizmo Dorks Kapton Tape (Poliimida) para Impresoras 3D e Impresión, 8 x 8 pulgadas, 10 Hojas por Paquete
Transductor de inmersión de baja potencia, 1MHzOlympusV303-SU, 1 MHz, 0.50 in. Diámetro del elemento, estilo de caja estándar, conector UHF recto, f = 0.80IN PTF
Juegos de imanesWINOMOhttps://www.amazon.com/dp/B01DJZQJBG/
ref=cm_sw_em_r_mt_dp_U_JYQ7DbM32E5QC		WINOMO 15mm Coser en Bolsa Magnética Cierres para Coser Álbum de recortes - 10 juegos
Amplificador RFE& IA07575W
Catéter para venas de colaBD382512/ Fisher Artículo: NC122851324g Catéteres intravenosos blindados BD Insyte Autoguard (sin alas)Microburbujas de
contraste para ultrasonidosLantheus Medical ImagingDE4, DE16DEFINITY (Microesfera lipídica Perflutren)
Gel de ultrasonidosAquasonichttps://www.amazon.com/dp/B07FPQDM4F/
ref=cm_sw_em_r_mt_dp_U_D6Q7Db3J9QP7P		Gel de Ultrasonido Aquasonic 100 Transmisión 1 Litro Botella Exprimible
Sets de infusión con alas, 22ga.Fisher Healthcare22-258087Terumo Surflo Winged Infusion Sets
software de controlador de motorN/AN/Asoftware personalizado escrito en LabView para controlar el entorno de tiempo de ejecución del controlador de motor Velmex
para el software del controlador de motorNational InstrumentsLabView versión del motor 2017 o superiorhttps://www.ni.com/en-us/support/downloads/software-products/download.labview.html
Actuador de etapa lineal de 3 ejes (posicionador XYZ)Pernos Velmex
MB-1Perno BiSlide 1/4-20x3/4" Tornillo de cabeza hueca (paquete de 10), Cantidad:3
controlador de motorControl VelmexVXM-3, Control de motor paso a paso programable de 3 ejes, Cantidad:1
tacos de montajeVelmexMC-2Taos, 2 orificios BiSlide, Cantidad:6
tacos de montajeVelmexMC-2Taco, 2 orificios BiSlide, Cantidad:2
Convertidor USB a serieVelmexVXM-USB-RS232Cable de comunicación serie USB a RS232 10 pies, cantidad:1
etapa lineal del eje xVelmexMN10-0100-M02-21BiSlide, recorrido = 10 pulgadas, 2 mm / rev, límites, NEMA 23, cantidad: 1
motor paso a paso del eje xVelmexPK266-03A-P1Vexta Tipo 23T2, Motor Paso a Paso de un Eje, Cantidad:1
etapa lineal del eje YVelmexMN10-0100-M02-21BiSlide, recorrido = 10 pulgadas, 2 mm/rev, límites, NEMA 23, Cantidad:1
motor paso a paso del eje YVelmexPK266-03A-P1Vexta Tipo 23T2, motor paso a paso de un solo eje, Cantidad:1
amortiguador del eje zVelmexD6CL-6.3FD6CL Amortiguador para paso a paso de doble eje Tipo 23 Motor, Cantidad:1
etapa lineal del eje zVelmexMN10-0100-M02-21BiSlide, recorrido = 10 pulgadas, 2 mm / rev, límites, NEMA 23, Cantidad:1
motor paso a paso del eje zVelmexPK266-03B-P2Vexta Tipo 23T2, motor paso a paso de doble eje, cantidad:1
imprimibles
Montaje y punterode transductor de inmersiónhttps://www.tinkercad.com/things/cRgTthGXSRq
Marco estereotáxicohttps://www.tinkercad.com/things/ilynoQcdqlH
marco estereotáxicohttps://www.tinkercad.com/things/aZNgqhBOHAX
9.4T resonancia magnética para animales de pequeño diámetroBrukerBruker BioSpec 94/20ParaVision versión 5.1
AAV9-hsyn-GFPAddgene
Crema depiladoraChurch & DwightNair
crema gadobutrol agente de contraste para resonancia magnéticaBayerGadavist (Gadobutrol, 1mM/mL)
Marco estereotácticoStoelting#51500no compatible con resonancia magnética
dispositivo de entrega llave en manode FUS FUS InstrumentsRK-300listo para usar FUS compatible con resonancia magnética para roedores
Transductor de inmersión archivos en 3DSoporte de

Referencias

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