Identificación y caracterización de especies de ARN inmunogénico en alérgenos de HDM que modulan la inflamación pulmonar eosinofílica

Hamad  H. Alanazi; Li She; Xiao-Dong Li

doi:10.3791/61183

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Identificación y caracterización de especies de ARN inmunogénico en alérgenos de HDM que modulan la inflamación pulmonar eosinofílica

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DOI:

10.3791/61183

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30 de mayo de 2020

Hamad H. Alanazi¹^,² , Li She¹^,³ , Xiao-Dong Li¹

¹Department of Microbiology, Immunology and Molecular Genetics, Long School of Medicine, University of Texas Health San Antonio, ²Department of Clinical Laboratory Sciences, College of Applied Medical Sciences, Jouf University, ³Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, Xiangya Hospital, Central South University

En este artículo

Resumen

Los alérgenos ambientales, como los ácaros del polvo de la casa (HDM), a menudo contienen sustancias microbianas que activan las respuestas inmunitarias innatas para regular la inflamación alérgica. El protocolo presentado aquí demuestra la identificación de especies de dsRNA en los alérgenos de HDM y la caracterización de sus actividades inmunogénicas en la modulación de la inflamación pulmonar eosinofílica.

Resumen

Los alérgenos ambientales, como los ácaros del polvo de la casa (HDM), a menudo se encuentran en formas complejas que contienen tanto proteínas alérgicas que impulsan respuestas aberrantes de tipo 2 como sustancias microbianas que inducen respuestas inmunitarias innatas. Estos componentes microbianos asociados a alérgenos desempeñan un papel importante en la regulación del desarrollo de condiciones inflamatorias de tipo 2 como el asma alérgica. Sin embargo, los mecanismos subyacentes siguen siendo en gran medida indefinidos. El protocolo presentado aquí determina las características estructurales y la actividad in vivo del ARN inmunoestimulante asociado al alérgeno. Específicamente, se examinan alérgenos comunes para detectar la presencia de especies de ARN de doble cadena (dsRNA) que pueden estimular las respuestas de IFN en los pulmones y restringir el desarrollo de eosinofilia pulmonar grave en un modelo de ratón de asma alérgica inducida por HDM. Aquí, hemos incluido los siguientes tres ensayos: Punto blot para mostrar las estructuras dsRNA en el ARN total aislado de alérgenos incluyendo las especies de HDM, RT-qPCR para medir las actividades de ARN HDM en genes estimulantes del interferón (ISG) expresión en los pulmones de ratón y análisis FACS para determinar los efectos del ARN HDM en el número de eosinófilos en BAL y pulmón, respectivamente.

Introducción

Sobre la base de la hipótesis de higiene propuesta originalmente por Strachan¹, la exposición en la primera infancia a factores microbianos ambientales como la endotoxina puede proteger contra el desarrollo de trastornos alérgicos^2,^,³. Durante las infecciones microbianas, por ejemplo, infecciones virales, la detección inmunitaria innata de ácidos nucleicos extraños (ARN/ADN) desencadena las respuestas de defensa del huésped^4,^,^5,^,⁶. Sin embargo, la existencia y prevalencia de ácidos nucleicos in....