Este protocolo valida un modelo de roedor fiable, fácil de realizar y reproducible de lesión axonal difusa cerebral (DAI) que induce daño generalizado a la materia blanca sin fracturas o contusiones de cráneo.
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Artículo de método
Inducción de lesión cerebral axonal difusa en ratas basada en aceleración rotacional
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En este artículo
Resumen
Resumen
La lesión cerebral traumática (TBI) es una de las principales causas de muerte y discapacidad. La lesión axonal difusa (DAI) es el mecanismo predominante de lesión en un gran porcentaje de pacientes con TBI que requieren hospitalización. DAI implica daño axonal generalizado por sacudida, rotación o lesiones por explosión, lo que conduce a lesiones de estiramiento axonal rápido y cambios axonales secundarios que se asocian con un impacto duradero en la recuperación funcional. Históricamente, los modelos experimentales de DAI sin lesiones focales han sido difíciles de diseñar. Aquí validamos un modelo de roedor simple, reproducible y confiable de DAI que causa daños generalizados en la materia blanca sin fracturas de cráneo o contusiones.
Introducción
La lesión cerebral traumática (TBI, por sus) es una de las principales causas de muerte y discapacidad en los Estados Unidos. Los TMI contribuyen a aproximadamente el 30% de todas las muertes relacionadas con lesiones1,2. Las principales causas de TBI difieren entre grupos de edad e incluyen caídas, colisiones de alta velocidad durante los deportes, autolesiones intencionales, accidentes automovilísticos y asaltos1,2,3.
La lesión axonal difusa cerebral (DAI) es un tipo específico de TBI ind....
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Protocolo
Los experimentos se realizaron siguiendo las recomendaciones de las Declaraciones de Helsinki y Tokio y de las Directrices para el Uso de Animales Experimentales de la Comunidad Europea. Los experimentos fueron aprobados por el Comité de Cuidado Animal de la Universidad Ben-Gurion del Negev.
1. Preparación de ratas para el procedimiento experimental
NOTA: Seleccione ratas macho adultas Sprague-Dawley que pesen 300-350 g.
- Obtener la aprobación para la realización de estos experimentos del Comité Institucional de Cuidado y Uso animal.
- Mantener las ratas a una temperatura ambiente de 22 oC, con c....
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Resultados
La Tabla 1 ilustra la línea de tiempo del protocolo. La tasa de mortalidad en este modelo de DAI fue del 0%. Una prueba de Mann-Whitney indicó que el déficit neurológico era significativamente mayor para las 15 ratas DAI en comparación con las 15 ratas falsas a las 48 horas siguientes a la intervención (Mdn 1 frente a 0), U a 22,5, p < 0,001, r a 0,78 (véase el Cuadro 2). Los datos se miden en recuentos y se presentan como mediana y rango de percentiles de 25 a 75.
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Discusión
Este protocolo describe un modelo de roedor de DAI. En DAI, la aceleración rotacional en el cerebro causa un efecto de cizallamiento que desencadena cambios axonales y bioquímicos que conducen a la pérdida de la función axonal en un proceso progresivo. Los cambios axonales secundarios son producidos por una lesión rápida del estiramiento axonal y son variables en su extensión y gravedad4,,5,,10. En cuestión de horas a días despu.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores reconocen agradecidamente al Dr. Nathan Kleeorin (Departamento de Ingeniería Mecánica de la Universidad Ben-Gurion del Negev) por su ayuda con las mediciones biomecánicas. Además, agradecemos a la profesora Olena Severynovska, Maryna Kuscheriava, Maksym Kryvonosov, Daryna Yakumenko y Evgenia Goncharyk del Departamento de Fisiología, Facultad de Biología, Ecología y Medicina, Universidad Oles Honchar Dnipro, Dnipro, Ucrania por su apoyo y contribuciones útiles a nuestras discusiones.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Citrato de sodio 0,01 M | SIGMA - ALDRICH | ||
| 2,5% suero normal de caballo | SIGMA - ALDRICH | H0146 | Solución |
| de formaldehído tamponado al 4 % | |||
| antiamiloide, C - anticuerpo terminal producido en conejo | SIGMA - Lote ALDRICH | 056M4867V | |
| anticuerpo secundario biotinilado | Vector | BA-1000-1.5 | 10 mM de fosfato de sodio, pH 7.8, 0.15 M de NaCl, 0.08% azida de sodio, 3 mg/ml albúmina de suero bovino |
| de corte de huesos | |||
| DAB Peroxidasa (HRP) Kit de sustrato (con níquel), vector de 3,3'-diaminobenzidina | |||
| de laboratorio de incrustación etanol | |||
| 99.9 % | ROMICAL | Líquido inflamable | |
| guillotina | |||
| Hematoxilina | SIGMA - ALDRICH | H3136-25G | |
| Solución de peróxido de hidrógeno | Millipore | 88597-100ML-F | |
| Isofluran, USP 100% | Piramamal Critical Care, Inc | ||
| Microscopio Olympus BX 40 | Paraffine | ||
| Paraplast Plus Leica Biosystem | Tejido que incorpora solución | ||
| salina tamponada con fosfato (PBS) | SIGMA - ALDRICH | P5368-10PAK | El contenido de una bolsa, cuando se disuelve en un litro de agua destilada o desionizada, producirá 0,01 M de solución salina tamponada con fosfato (NaCl 0,138 M; KCl - 0,0027 M); pH 7,4, a 25 °C. |
| Estreptavidina HRP | ABCAM | ab64269 | Estreptavidina-HRP para uso con anticuerpos secundarios biotinilados durante la IHQ / inmunohistoquímica. |
| xileno |
Referencias
- Faul, M., Wald, M. M., Xu, L., Coronado, V. G. Traumatic brain injury in the United States; emergency department visits, hospitalizations, and deaths, 2002-2006. US Government. , (2010).
- Taylor, C. A., Bell, J. M., Breiding, M. J., Xu, L. Traumatic Brain Injury-Related Emergency Department Visit....
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Reimpresiones y permisos
