Preparación de la cuerda vocal de la rata para análisis neuromusculares

Charles Lenell; Adrianna  C. Shembel; Aaron  M. Johnson

doi:10.3791/61327

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Artículo de método

Preparación de la cuerda vocal de la rata para análisis neuromusculares

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DOI:

10.3791/61327

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15 de mayo de 2020

Charles Lenell¹^,² , Adrianna C. Shembel¹ , Aaron M. Johnson¹

¹NYU Voice Center, Department of Otolaryngology-Head & Neck Surgery, New York University School of Medicine, ²Communicative Sciences and Disorders, New York University

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe los métodos utilizados para preparar las cuerdas vocales de las ratas para el estudio neuromuscular histoquímico.

Resumen

El propósito de este tutorial es describir la preparación de la cuerda vocal de la rata para el estudio neuromuscular histoquímico. Este protocolo describe los procedimientos para la disección laríngea de ratas, la congelación por flash y la crioseccionación de las cuerdas vocales. Este estudio describe cómo crioseccionar las cuerdas vocales tanto en planos longitudinales como transversales. Una novedad de este protocolo es el seguimiento laríngeo durante la crioseccionación que garantiza la identificación precisa de los músculos laríngeos intrínsecos y reduce la posibilidad de pérdida de tejido. Las cifras demuestran la crioseccionación progresiva en ambos planos. Veintinueve hemi-laringes de rata fueron crioseccionados y rastreados desde la aparición del cartílago tiroideo hasta la aparición de la primera sección que incluía el pliegue vocal completo. La cuerda vocal completa se visualizó para todos los animales en ambos planos. Hubo una alta variabilidad en la distancia desde la aparición del cartílago tiroideo hasta la aparición de la cuerda vocal completa en ambos planos. El peso no se correlacionó con la profundidad de los puntos de referencia laríngeos, lo que sugiere que la variabilidad individual y otros factores relacionados con la preparación del tejido pueden ser responsables de la alta variabilidad en la aparición de puntos de referencia durante la sección. Este estudio detalla una metodología y presenta datos morfológicos para la preparación de la cuerda vocal de la rata para la investigación neuromuscular histoquímica. Debido a la alta variabilidad individual, los puntos de referencia laríngeos deben rastrearse de cerca durante la criosecciona para evitar la sobresección del tejido y la pérdida de tejido. El uso de una metodología consistente, incluida la preparación adecuada del tejido y el conocimiento de los puntos de referencia dentro de la laringe de la rata, ayudará con resultados consistentes en todos los estudios y ayudará a los nuevos investigadores interesados en usar el pliegue vocal de la rata como modelo para investigar los mecanismos neuromusculares laríngeos.

Introducción

La laringe de rata es un modelo bien establecido para investigar las adaptaciones laríngeas neuromusculares estructurales y funcionales al desarrollo, el envejecimiento, la enfermedad y los agentes farmacológicos1,2,3,4,5. La consistencia de los métodos histológicos es fundamental para esta línea de trabajo, ya que existen múltiples complejidades involucradas en la preparación y el análisis muscular, así como desafíos asociados con el tamaño, la forma y la topografía de la laringe de los músculos encapsulad....