Un ensayo de alimentación oral bacteriana con mosquitos tratados con antibióticos

Resumen

Este artículo presenta un protocolo para investigar el efecto de las bacterias intestinales de mosquitos individuales, incluyendo el aislamiento y la identificación de microbios cultivables de mosquitos en la mitad del intestino, agotamiento de antibióticos de bacterias intestinales de mosquitos, y reintroducir una especie específica de bacterias.

Resumen

El mosquito midgut alberga un microbioma altamente dinámico que afecta el metabolismo del huésped, la reproducción, la aptitud física y la competencia vectorial. Se han realizado estudios para investigar el efecto de los microbios intestinales en su conjunto; sin embargo, diferentes microbios podrían ejercer efectos distintos hacia el huésped. Este artículo proporciona la metodología para estudiar el efecto de cada microbio intestinal específico del mosquito y el mecanismo potencial.

Este protocolo contiene dos partes. La primera parte introduce cómo diseccionar el mosquito en la parte media del intestino, aislar colonias de bacterias cultivables e identificar especies de bacterias. La segunda parte proporciona el procedimiento para generar mosquitos tratados con antibióticos y reintroducir una especie específica de bacterias.

Introducción

Los mosquitos se consideran los vectores más importantes de las enfermedades patógenas humanas, transmitiendo más de un centenar de patógenos, incluyendo el virus del Zika, el virus del Dengue y los parásitos Plasmodium ¹. Cuando los mosquitos toman una comida de sangre para adquirir nutrientes para la oviposición, pueden ingerir accidentalmente patógenos de un huésped infectado a través del tracto digestivo². Es importante destacar que el medio mosquito, que desempeña un papel fundamental tanto en la digestión de las comidas en sangre como en la entrada de patógenos, alberga un microbioma altamente dinámico

Protocolo

1. Disección de la parte media y aislamiento de bacterias cultivables

1. Preparen el mosquito para la disección.
   1. Recoger los mosquitos 7-9 días después de la aparición con un aspirador. Anestesia a los mosquitos recogidos sometiéndolos a una temperatura de 4oC durante 3-5 min y mantén a los mosquitos anestesiados en un plato de Petri helado hasta la disección.
2. Esterilice los instrumentos de laboratorio y la superficie del mosquito.
   1. Esterilice el banco del experimento, el microscopio de disección, los fórceps y el deslizamiento de vidrio rociando un 75% de etanol para evitar la contaminación....

Resultados

Las vías medias de los mosquitos tratados con antibióticos y sin antibióticos fueron sacados para la extracción de ADN, y qPCR se realizó con imprimaciones bacterianas universales. La Figura 1 muestra la expresión de RRNA bacteriana 16S en el grupo de control y en el grupo de tratamiento antibiótico. Los resultados muestran que alrededor del 98% de las bacterias intestinales se han eliminado, y la esterilización intestinal de penicilina y estreptomicina fue exitosa.

Con los mé.......

Discusión

Las investigaciones sobre las interacciones huésped-microbio han encontrado que diferentes microbios intestinales afectan su fisiología huésped a través de mecanismos divergentes. Este artículo presenta el método para investigar el papel respectivo del microbio intestinal del mosquito, incluyendo la disección de la mitad del mosquito en la bles, el cultivo de bacterias intestinales cultivables, el tratamiento antibiótico y la reintroducción de las bacterias de interés.

Para un tratamiento anti.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Adenosina 5′-trifosfato hidrato de sal disódica	Sigma	A2383	El hidrato de sal disódica de adenosina 5′-trifosfato se ha utilizado para preparar soluciones estándar de trifosfato de adenosina (ATP)
Aedes aegypti			Mosquitos hembra
Tubo anticoagulante	BD Vacutainer	363095	Recoger sangre fresca
Tubo centrífugo	Sangon Biotech	F601620-0010	1.5 ml, Natural, Graduado, Estéril
Bolas
Desechables Tirado Triturador	Sangon Biotech	F619072-0001	70 mm de largo, Cónico, Azul, Estéril
Etanol absoluto	Paini		Diluirlo a etanol al 75%
Pinzas	RWD	F11029	Disección
Hemotek Membrana Alimentación Sistema	Hemotek		Componentes del sistema de alimentación, incluidos  Controlador de temperatura Hemotek, conjunto alimentador-carcasa, alimentador metálico ensamblado.
Agitador		ZQZY-78AN
Asas de inoculación	Sangon Biotech	F619312-0001	10 μ l, Polvo de
Agar LB Amarillo	Sangon Biotech	A507003	Triptona 10.0 g, Extracto de Levadura 5.0 g, NaCl 10.0 g, Agar 15.0 g.
LB Caldo en Polvo	Sangon Biotech	A507002	Triptona 10.0 g, Extracto de Levadura 5.0 g, NaCl 10.0 g.
Microscopio	Zeiss	Stemi508
Vaso			Lugar mosquito
Parafilm	Sangon Biotech	F104002	4 pulgadas 125 pies
Placa de Petri	Sangon Biotech	F611203
Penicilina G hidrato de sal de procaína	Sangon Biotech	A606248	Polvo blanco. Soluble en agua, soluble en metanol, ligeramente soluble en agua, etanol
Pipeta de canal único	Gilson
Sulfato de estreptomicina	Sangon Biotech	A610494	El sulfato de estreptomicina es un antibiótico de glucosamina que interfiere con la síntesis de proteínas procariotas.
Sacarosa	Sangon Biotech	A502792	Soluble en agua, etanol y metanol, ligeramente soluble en glicerol y piridina.
TIANamp Kit de ADN de Bacterias TIANGEN		DP302	Extracto de ADN
Tela utilitaria-Mosquitera Mezclador de
	Scintic Industries	S1-0246
Tubo EP de 1,5 ml	Sangon Biotech	F600620
10X Tampón PBS	Sangon Biotech E607016		Este producto es una solución 10X. Por favor, dilúyalo 10 veces antes de usar. El valor de pH es de 7,4.

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