Este manuscrito describe un método para grabaciones continuas de video EEG utilizando electrodos de profundidad múltiple en ratones neonatales sometidos a hipoxia-isquemia.
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Artículo de método
Electroencefalograma de video continuo durante la hipoxia-isquemia en ratones neonatales
En este artículo
Resumen
Resumen
La isquemia por hipoxia es la causa más común de convulsiones neonatales. Los modelos animales son cruciales para comprender los mecanismos y la fisiología subyacentes a las convulsiones neonatales y la isquemia por hipoxia. Este manuscrito describe un método para el monitoreo continuo de video electroencefalograma (EEG) en ratones neonatales para detectar convulsiones y analizar el fondo de EEG durante la isquemia por hipoxia. El uso de video y EEG en conjunto permite la descripción de la semiología de convulsiones y la confirmación de convulsiones. Este método también permite el análisis de espectrogramas de potencia y tendencias de patrones de fondo de EEG durante el período de tiempo experimental. En este modelo de isquemia por hipoxia, el método permite el registro de EEG antes de la lesión para obtener una línea de base normativa y durante la lesión y la recuperación. El tiempo total de monitoreo está limitado por la incapacidad de separar a los cachorros de la madre durante más de cuatro horas. Aunque, hemos utilizado un modelo de convulsiones hipóxico-isquémicas en este manuscrito, este método para el monitoreo de EEG de video neonatal podría aplicarse a diversos modelos de enfermedades y convulsiones en roedores.
Introducción
La encefalopatía isquémica hipóxica (HIE) es una afección que afecta a 1,5 de cada 1000 recién nacidos anualmente y es la causa más frecuente de convulsiones neonatales1,2. Los bebés que sobreviven están en riesgo de diversas discapacidades neurológicas como parálisis cerebral, discapacidad intelectual y epilepsia3,4,5.
Los modelos animales juegan un papel crítico en la comprensión e investigación de la fisiopatología de la isquemia por hipoxia y las convulsiones neonatale....
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Protocolo
Todos los estudios en animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad de Virginia.
1. Edificio de electrodos / edificio de cables
- Utilice un cable de acero inoxidable con aislamiento unipolar (diámetro desnudo de 0,005", recubierto de 0,008") para hacer un electrodo que esté conectado con un conector de enchufe hembra (conector de receptáculo hembra 0.079).
- Utilice un cable especial hecho a medida para conectar animales al amplificador.
- Conecte un conector macho de 4 pines (conector macho 0.079") a un amplificador operacional (amplificador operacional) ....
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Resultados
Semiología de convulsiones
La exposición a hipoxia-isquemia neonatal da lugar a convulsiones generalizadas y focales en ratones (Figura 1A-C). Las grabaciones de video EEG permiten que los hallazgos electrográficos se correlacionen con el comportamiento en video. Estos comportamientos se puntuaron utilizando una puntuación de convulsiones conductuales de roedores neonatales (BSS) publicada anteriormente16. Además d.......
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Discusión
Hemos presentado un modelo para la monitorización continua de video-EEG en ratones neonatales durante las convulsiones hipóxico-isquémicas. El análisis de video en conjunto con EEG permite la caracterización de la semiología de convulsiones. El análisis de EEG permite la extracción de espectrogramas de potencia y el análisis de amplitud de fondo.
La colocación correcta y cuidadosa de los electrodos es crucial en este protocolo, ya que las lesiones durante la colocación de los electrodos o la c.......
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Agradecimientos
Reconocemos las siguientes fuentes de financiación: NIH NINDS – K08NS101122 (JB), R01NS040337 (JK), R01NS044370 (JK), Facultad de Medicina de la Universidad de Virginia (JB).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| SURGERY | |||
| punta esférica | Metrex Research | 8300-F | Aplicador i-bond |
| Cranioplast (Polvo/Resina) | Coltene | H00383 | Perm Reline/Power |
| I-Bond | Kulzer GmbH, Alemania | ||
| LOOK Sutura de seda | Surgical Specialities Corporation | SP115 | LOOK SP115 Seda trenzada negra Sutura quirúrgica no absorbible |
| RS-5168 Pinza Botvin | Instrumento quirúrgico Roboz | Pinza RS5168 | para cirugía/ligadura |
| RS-5138 Pinza Graefe | Roboz Instrumento quirúrgico | RS5138 | Pinza para cirugía/ligadura |
| Luz ultravioleta para I-Bond | Blast Lite By First Media | BL778 | Luz UV para I-bond |
| Vannas Tijera | de microdisecciónRoboz Instrumento Quirúrgico | RS5618 | Tijera para ligadura |
| Vet Bond | 3M Vetbond | 1469SB | Vet Glue |
| HYPOXIA | |||
| EEG FUERTE | |||
| receptáculo hembra 0.079" | Mill-Max Manufacturing Corp | 832-10-024-10-001000 | Pedido de Digikey |
| Grass Amplifier | Natus Neurology Incorporated | Grass Product | |
| LabChart Pro | ADI Instruments | Software para ejecutar el sistema | |
| Conector de enchufe macho 0.079" | Mill-Max Manufacturing Corp | 833-43-024-20-001000 | Pedido a Digikey |
| Operational Amplifier | Texas Instruments, Dallas, TX, EE. UU. | TLC2274CD | TLC2274 Amplificador operacional cuádruple de riel a riel de bajo ruido |
| Amplificador operacional | Texas Instruments, Dallas, TX, EE. UU | . TLC2272ACDR | TLC2274 Riel-raíl cuádruple de bajo ruido Amplificador operacional |
| Alambre de acero inoxidable | A-M Systems | 791400 | 0.005 "Desnudo/0.008" Recubierto 100 pies |
| Alambre ultraflexible | McMaster-Carr | 9564T1 | 36 Alambre de gasa de varios colores |
Referencias
- Vasudevan, C., Levene, M. Epidemiology and aetiology of neonatal seizures. Seminars in Fetal & Neonatal Medicine. , (2013).
- Volpe, J., et al. Neonatal Seizures. Volpe's Neurology of the Newborn. , Elsevier. 275-321 (2018).
- Shankaran, S., et al.
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Reimpresiones y permisos
