Este protocolo es un método eficiente, rentable y robusto para aislar la microglia primaria del tejido cerebral humano vivo, adulto. La microglia humana primaria aislada puede servir como una herramienta para estudiar los procesos celulares en la homeostasis y la enfermedad.
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Artículo de método
Obtención de Microglia Humana del Tejido Cerebral Humano Adulto
En este artículo
Resumen
Resumen
Las microglia son células inmunitarias innatas residentes del sistema nervioso central (SNC). La microglia desempeña un papel fundamental durante el desarrollo, en el mantenimiento de la homeostasis y durante la infección o lesión. Varios grupos de investigación independientes han puesto de relieve el papel central que desempeñan las microglia en las enfermedades autoinmunes, los síndromes autoinflamatorios y los cánceres. La activación de la microglia en algunas enfermedades neurológicas puede participar directamente en procesos patógenos. La microglia primaria es una herramienta poderosa para entender las respuestas inmunitarias en el cerebro, las interacciones celulares y celulares y los fenotipos de microglia desregulados en la enfermedad. La microglia primaria imita las propiedades microgliaales in vivo mejor que las líneas celulares microgliaales inmortalizadas. La microglia adulta humana exhibe propiedades distintas en comparación con la microglia fetal y de roedores humanos. Este protocolo proporciona un método eficiente para el aislamiento de la microglia primaria del cerebro humano adulto. El estudio de estas microglias puede proporcionar información crítica sobre las interacciones entre células celulares entre la microglia y otras poblaciones celulares residentes en el SNC, incluidos los oligodendrocitos, las neuronas y los astrocitos. Además, la microglia de diferentes cerebros humanos puede ser cultivada para la caracterización de respuestas inmunitarias únicas para la medicina personalizada y una miríada de aplicaciones terapéuticas.
Introducción
El sistema nervioso central (SNC) está construido de una compleja red de neuronas y células gliales1. Entre las células gliales, la microglia funciona como las células inmunitarias innatas del SNC2,3. Microglia es responsable de mantener la homeostasis en el SNC sano4. Microglia también juega un papel importante en el neurodesarrollo, mediante la poda de sinapsis2. Las microglia son fundamentales para la fisiopatología de varias enfermedades neurológicas, incluyendo pero no limitado a; Enfermedad de Alzheimer5, Enfe....
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Protocolo
Todos los tejidos fueron adquiridos después de la autorización ética de los comités de ética del Instituto Indio de Tecnología Jodhpur y el Instituto de Ciencias Médicas de all India (AIIMS) Jodhpur.
1.Adquisición y procesamiento de tejidos (Día 0)
- Recoger el tejido en un tubo de 50 ml que contenga 10 ml de líquido cefalorraquídeo artificial helado (aCSF) (2 mM CaCl2a 2H2O, 10 mM de glucosa, 3 mM KCl, 26 mM NaHCO3, 2,5 mM NaH2PO4, 1 mM MgCl2a6H 2O, 202 mM sacarosa)20. Asegúrese de que el tubo se mantiene en hielo si el tejido neces....
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Resultados
Mediante el uso del protocolo antes mencionado (Figura 1), pudimos aislar la microglia humana primaria de los tejidos cerebrales resecados quirúrgicamente en vivo. Las células cultivadas se tiñeron con Ricinus communis agglutinina-1 (RCA-1) lectina para microglia (verde) y con proteína ácida fibrillaria Glial (GFAP) para astrocitos (rojo) (Figura 2) como se describió anteriormente22,
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Discusión
Microglia asegurar la homeostasis en el cerebro normal y desempeñar un papel central en la fisiopatología de diversas enfermedades neurológicas4. Las microglia son fundamentales para el neurodesarrollo y la formación de sinapsis2. Los estudios microgliales han demostrado ser fundamentales para comprender el desarrollo y la progresión de diversas enfermedades neurológicas4. La microglia de roedores es el modelo predominante de elección para los estudi.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
El laboratorio de SJ se estableció con subvenciones institucionales del IITJ y está financiado por subvenciones del Departamento de Biotecnología (BT/PR12831/MED/30/1489/2015) y del Ministerio de Electrónica y Tecnología de la Información del Gobierno de la India (No 4(16)/2019-ITEA). Las secciones de tejido cerebral humano se obtuvieron del Instituto de Ciencias Médicas de All India (AIIMS) Jodhpur después de la autorización del comité de ética institucional. Agradecemos a Mayank Rathor, estudiante de B.Tech Student miembro de la Sociedad de Diseño y Artes IIT Jodhpur, por el apoyo a la videografía.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Solución antibiótica-antimicótica | Himedia | A002 | |
| Cloruro de calcio | Sigma | 223506 | |
| Centrífuga (4 & grados; C) | Tubos | 146532 | |
| Abdos | P10203 | ||
| Incubadora 2 | Nuevo Brunswik | Galaxy 170 S | |
| D-Glucosa | Himedia | GRM077 | |
| DMEM medio con glutamina | Himedia | AL007S | |
| Suero fetal bovino | Himedia | RM9955 | |
| Tubo de frasco (50 ml) | Thermo Fsiher Scientific | 50CD1058 | |
| Fluoresceína Ricinus communis aglutinina-1 | Vector | FL-1081 | |
| Microscopio fluorescente | Leica | DM2000LED | |
| Fluoroshield con DAPI | Sigma | F6057 | |
| GFAP anticuerpo | GA5 | 3670S | |
| Agitador incubador | Nuevo Brunswik Scientific | Innova 42 | |
| L929 línea celular | ATCC | NCTC clon 929 [célula L, L-929, derivado de la cepa L] (ATCC CCL-1) | |
| Flujo de aire laminar | Thermo Fsiher Scientific | 1386 | |
| Cloruro de magnesio | Himedia | MB040 | |
| Fosfato monosódico | Merck | 567545 | |
| Mezcla de nutrientes F-12 Jamón | Medio Himedia | Al106S | |
| Petri | Duran Grupo | 237554805 | |
| Solución salina tamponada con fosfato | Himedia | ML023 | |
| Cloruro de potasio | Himedia | MB043 | |
| Pipeta serológica | Labware | LW-SP1010 | |
| Bicarbonato sódico | Himedia | MB045 | |
| Sacarosa | Himedia | MB025 | |
| Filtro de jeringa (0,2μ, 25 mm de diámetro) | Matraces | ||
| T-25 aptos para el cultivo de células adherentes. | Himedia | TCG4-20X10NO | |
| Tripsina-EDTA (0.25%) | Gibco | 25200-056 |
Referencias
- Allen, N. J., Barres, B. A. Glia - more than just brain glue. Nature. 457 (7230), 675-677 (2009).
- Lenz, K. M., Nelson, L. H. Microglia and Beyond: Innate Immune Cells As Regulators of Brain Development and Behavioral Function. Frontiers in Immunology. 9
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Reimpresiones y permisos
