Predicción de la amputación utilizando células progenitoras mononucleares circulantes locales en pacientes tratados con angioplastia con isquemia de extremidades críticas

Summary

La amputación de miembros inferiores puede ocurrir incluso después de la angioplastia de vasos obstruidos en isquemia de extremidades críticas (CLI). Las células progenitoras mononucleares (MPC) reflejan la reparación vascular. El protocolo actual describe la cuantificación de los MPCs de la circulación cercana a la angioplastia, y su relación con la disfunción endotelial y la predicción de la amputación de las extremidades inferiores.

Abstract

La isquemia crítica de las extremidades (CLI) representa una etapa avanzada de la enfermedad arterial periférica. La angioplastia mejora el flujo sanguíneo a la extremidad inferior; sin embargo, algunos pacientes progresan irreversiblemente a la amputación de extremidades. El alcance del daño vascular y los mecanismos de reparación vascular son factores que afectan el resultado posterior a la angioplastia. Las células progenitoras mononucleares (MPC) son reactivas para el daño vascular y la reparación, con la capacidad de reflejar enfermedades vasculares. El protocolo actual describe la cuantificación de los MPCs obtenidos de la circulación sanguínea de los vasos cercanos al sitio de la angioplastia, así como su relación con la disfunción endotelial y su capacidad predictiva para la amputación de extremidades en los próximos 30 días después de la angioplastia en pacientes con CLI.

Introduction

Enfermedad arterial periférica (PAD) se caracteriza por una obstrucción vascular crónica y progresiva con limitación del suministro de sangre^1. A escala mundial, pad de las extremidades inferiores afecta a alrededor del 10% de la población de edad avanzada, mientras que hasta el 7% de estos casos se someten a la amputación de extremidades^2,3.

La isquemia de las extremidades críticas (CLI) representa la presentación más seria del PAD¹. Por lo general, los pacientes experimentan dolor en reposo, úlceras o gangrena atribuible a arterias o....

Protocol

El comité de ética de la investigación institucional del Centro Médico Nacional "20 de Noviembre" ISSSTE aprobó este protocolo prospectivo, todos los pacientes inscritos proporcionaron consentimiento informado por escrito.

1. Evaluación del bloque vascular de las extremidades inferiores, muestreo de sangre y angioplastia de globos

NOTA: La muestra de estudio utilizada para este experimento estaba compuesta por 20 pacientes diabéticos, de 68 años y 10 de cada 20 eran hombres. La mitad de la muestra eran fumadores y las co-morbilidades más frecuentes eran diabetes mellitus tipo 2, hipertensión arterial sistémica y/o ....

Results

Se recogieron muestras de sangre de arterias bloqueadas, en el lugar para la angioplastia, de 20 pacientes diabéticos, de 68 años y 10 de cada 20 eran hombres. La mitad de la población de muestras eran fumadores. Las lesiones vasculares se anotaron principalmente como Rutherford clase VI; mientras que los pacientes mostraron una mayor prevalencia de diabetes mellitus tipo 2 (100%), hipertensión (70%) y dislipidemia (55%).

Un seguimiento clínico de 30 días después de que se llevó a cabo la angi.......

Discussion

La recolección de sangre en el sitio preciso del bloque vascular puede mostrar dificultades técnicas; por lo tanto, realizamos la recolección de sangre en las proximidades al bloque vascular. Del mismo modo, la cantidad de MPCs cerca de la placa vascular parece ser altamente dinámica y puede originar variaciones antes y después de la angioplastia. De acuerdo con nuestras observaciones, se recomienda evaluar los cambios de referencia y 30min-post-angioplastia en el número de MPCs, ya que pueden reflejar varios procesos fi.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BSA	Roche	10735086001	Albúmina sérica bovina (BSA) como agente tampón, estabilizador, estándar y para mezcla.
Perlas de calibración	Miltenyi Biotec / MACS#	130-093-607	MACQLas perlas de calibración de Miltenyi
	Miltenyi Biotec / MACS#	130-080-801	Anticuerpo conjugado a R-Ficoeritrina en tampón PBS/EDTA
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770	Miltenyi Biotec / MACS	#130-103-798	Monoclonal, isotipo recombinante IgG1 humana, conjugado
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC	Miltenyi Biotec /	MACS#130-093-601	Anticuerpo conjugado a R-Ficoeritrina en tampón PBS/EDTA
CD34-FITC	Miltenyi Biotec /	MACS#130-081-001	El clon de anticuerpo monoclonal AC136 detecta un epítopo de clase III del CD34
CD45- VioBlue	Miltenyi Biotec / MACS#	130-092-880	Anticuerpo monoclonal CD45, humano conjugado
Tubos cónicos	Thermo SCIENTIFIC	#339651	Tubos de centrífuga cónicos de 15 ml
Tubos de citometría FALCON	Marca Corning	#352052	Tubo de fondo redondo de poliestireno de 5 mL. Estilo 12x75. Estéril.
EDTA	BIO-RAD	#161-0729	Metales pesados, (como Pb) < 10 ppm, Fe< 0.01%, As< 1ppm, Insolubles< 0.005%
Neubauer mejorado	Sin marca	Sin número de catálogo	Hemocitómetro para recuento de células. (rango 0,1000 mm, 0,0025 mm2)
Tubos de extracción de sangre K2 EDTA	BD Vacutainer	#367863	Tubo vacutainer de plástico lila (K2E) 10,8 mg, 6 mL.
Lymphoprep	Stemcell Technologies	01-63-12-002-A	Estéril y verificado sobre la presencia de endotoxinas. Densidad: 1.077± 0,001 g/mL
Paraformaldehído	SIGMA-ALDRICH		Fijación de muestras biológicas, (polvo, 95%)
Pipeta de transferencia 1,3mL	CRM Globe	PF1016, PF1015	La pipeta de transferencia es una herramienta que facilita la transferencia de líquidos con mayor precisión.
Tubos de ensayo	KIMBLE CHASE	45060 13100	Tubos de ensayo resistentes al calor. TAMAÑO/TAPA 13 x 100 mm