Aislamiento y evaluación funcional de células madre de cáncer de mama humano a partir de muestras de células y tejidos

Vasudeva Bhat; Cory Lefebvre; David Goodale; Mauricio Rodriguez-Torres; Alison L. Allan

doi:10.3791/61775

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Artículo de método

Aislamiento y evaluación funcional de células madre de cáncer de mama humano a partir de muestras de células y tejidos

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DOI:

10.3791/61775

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2 de octubre de 2020

Vasudeva Bhat¹^,² , Cory Lefebvre¹^,² , David Goodale¹ , Mauricio Rodriguez-Torres¹^,² , Alison L. Allan¹^,²^,³^,⁴

¹London Regional Cancer Program, ²Department of Anatomy & Cell Biology, Western University, ³Department of Oncology, Western University, ⁴Lawson Health Research Institute

En este artículo

Resumen

Este protocolo experimental describe el aislamiento de BCSC a partir de muestras de células y tejidos de cáncer de mama, así como los ensayos in vitro e in vivo que se pueden utilizar para evaluar el fenotipo y la función de BCSC.

Resumen

Las células madre del cáncer de mama (BCSC) son células cancerosas con características similares a las células madre heredadas o adquiridas. A pesar de su baja frecuencia, son los principales contribuyentes al inicio del cáncer de mama, la recaída, la metástasis y la resistencia a la terapia. Es imperativo comprender la biología de las células madre del cáncer de mama para identificar nuevos objetivos terapéuticos para tratar el cáncer de mama. Las células madre del cáncer de mama se aíslan y caracterizan en función de la expresión de marcadores de superficie celular únicos como CD44, CD24 y la actividad enzimática de la aldehído deshidrogenasa (ALDH). Estas células ALDH^altasCD44 ⁺ CD24^- constituyen la población BCSC y pueden aislarse mediante clasificación celular activada por fluorescencia (FACS) para estudios funcionales posteriores. Dependiendo de la cuestión científica, se pueden utilizar diferentes métodos in vitro e in vivo para evaluar las características funcionales de las BCSC. Aquí, proporcionamos un protocolo experimental detallado para el aislamiento de BCSC humanas tanto de poblaciones heterogéneas de células de cáncer de mama como de tejido tumoral primario obtenido de pacientes con cáncer de mama. Además, destacamos los ensayos funcionales in vitro e in vivo posteriores, incluidos los ensayos de formación de colonias, los ensayos de mamosfera, los modelos de cultivo 3D y los ensayos de xenoinjerto tumoral que se pueden usar para evaluar la función de BCSC.

Introducción

Comprender los mecanismos celulares y moleculares de las células madre del cáncer de mama humano (BCSC) es crucial para abordar los desafíos encontrados en el tratamiento del cáncer de mama. La aparición del concepto BCSC se remonta a principios^{del siglo} 21, donde se encontró que una pequeña población de CD44 ⁺ CD24 ^{/ células de} cáncer de mama bajo era capaz de generar tumores heterogéneos en ratones ^1,2. Posteriormente, se observó que las células de cáncer de mama humano con alta actividad enzimática de aldehído deshidrogenasa (^{ALDH alta}) también mostraron propiedad....