Artículo de método

Uso de laberintos en Y cerrados para evaluar el comportamiento quimiosensorial en reptiles

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DOI:

10.3791/61858

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7 de abril de 2021

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1Department of Biology, James Madison University, 2U.S. Geological Survey, Fort Collins Science Center, 3U.S. Department of Agriculture, National Wildlife Research Center, 4U.S. Geological Survey, Fort Collins Science Center

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Resumen

Los laberintos en Y permiten a los investigadores determinar la relevancia de estímulos específicos que impulsan el comportamiento animal, especialmente señales químicas aisladas de una variedad de fuentes. El diseño y la planificación cuidadosos pueden producir datos sólidos (por ejemplo, discriminación, grado de exploración, comportamientos numerosos). Este aparato experimental puede proporcionar una visión poderosa de las cuestiones de comportamiento y ecológicas.

Resumen

Los reptiles utilizan una variedad de señales ambientales para informar e impulsar el comportamiento de los animales, como los rastros de olores químicos producidos por alimentos o conespecíficos. Descifrar el comportamiento de los vertebrados, particularmente las especies invasoras, permite el descubrimiento de señales que inducen un comportamiento exploratorio y pueden ayudar en el desarrollo de valiosas herramientas biológicas básicas y aplicadas. Sin embargo, identificar comportamientos impulsados predominantemente por señales químicas frente a otras señales ambientales competidoras puede ser un desafío. Los laberintos en Y son herramientas comunes utilizadas en la investigación del comportamiento animal que permiten la cuantificación del comportamiento quimiosensorial de los vertebrados en una amplia gama de taxones. Al reducir los estímulos externos, los laberintos en Y eliminan los factores de confusión y presentan a los animales focales una opción binaria. En nuestros estudios de laberinto en Y, un animal perfumado se restringe a un brazo del laberinto para dejar un rastro de olor y se elimina una vez que se han cumplido los parámetros de colocación de olores. Luego, dependiendo del tipo de ensayo, se permite que el animal focal entre en el laberinto o se crea un rastro de olor competitivo. El resultado es un registro de la elección y el comportamiento del animal focal mientras discrimina entre las señales químicas presentadas. Aquí, se describen dos aparatos de laberinto en Y adaptados a diferentes especies de reptiles invasores: lagartos tegu blancos y negros argentinos (Salvator merianae) y pitones birmanos (Pythonbivittatus), delineando el funcionamiento y la limpieza de estos laberintos en Y. Además, se ha resumido la variedad de datos producidos, los inconvenientes y soluciones experimentales y los marcos de análisis de datos sugeridos.

Introducción

Los laberintos en Y son herramientas comunes y simples en los estudios del comportamiento animal que permiten abordar una variedad de preguntas. Además de ser ampliamente utilizados en estudios de laboratorio, los laberintos en Y también son funcionalmente compatibles con varios entornos de campo para estudiar animales salvajes en entornos relativamente remotos. Los investigadores han examinado los comportamientos de los vertebrados salvajes utilizando laberintos en Y en una amplia variedad de taxones en aplicaciones de campo igualmente diversas (por ejemplo, lampreas1;peces cíclidos2;ranas venenosas3; lagartos lacertidos4; serpientes de liga5).

Muchos investigadores se centran en cómo y en qué grado las señales químicas impulsan los comportamientos de los animales en la ecología reproductiva, espacial y de forrajeo6. Una variedad de estímulos químicos pueden ser probados en laberintos en Y y a escalas finas, tales como dos rastros químicos que sólo difieren ligeramente en la concentración7,o la capacidad de detección basada en el estado reproductivo de la especie objetivo8. Los rastros químicos —el principal estímulo utilizado en las pruebas del laberinto en Y— pueden ser creados naturalmente por conespecíficos o colocados específicamente en el medio ambiente por un investigador utilizando una fuente química definida1,5. Los estímulos también se pueden probar en combinaciones únicas para determinar la influencia multimodal de las señales, como los contextos cambiantes de la presentación de las señales (rastros en el aire frente a los sustratos9;señales visuales más químicas10). Aunque hay muchos otros métodos para evaluar las respuestas quimiosensoriales en reptiles (ver sección de discusión), los laberintos en Y permiten evaluar los comportamientos de búsqueda y a múltiples escalas temporales y espaciales, lo que puede conducir a mayores niveles de inferencia conductual.

Los reptiles han sido ampliamente probados por su dependencia de señales químicas en ecología reproductiva y forrajeo, y los investigadores a menudo emplean laberintos en Y en estos estudios11,12. La ecología química de los reptiles continúa siendo descifrada por estudios que emplean laberintos en Y para abordar una variedad de preguntas evolutivas y de comportamiento que son valiosas para los administradores de vida silvestre. Por ejemplo, pruebas recientes con especies invasoras de serpientes y lagartos han revelado que las señales químicas por sí solas pueden influir en la elección y la asignación de tiempo dentro del nuevo entorno de un laberinto en Y13,14,15.

El uso de grandes laberintos en Y para animales focales de tamaño moderado (por ejemplo, reptiles de cuerpo grande) generalmente se restringe a entornos de laboratorio donde los animales focales se pueden alojar fácilmente a largo plazo, los factores experimentales (por ejemplo, el clima, la luz, los estímulos externos) se pueden controlar y el acceso a la infraestructura (por ejemplo, energía, agua corriente) es ilimitado. Los estudios sobre animales salvajes, sin embargo, a menudo se restringen a lugares específicos por varias razones (por ejemplo, logística, permisos). Como resultado, surgen desafíos que deben abordarse a través de la resolución creativa de problemas y ajustes metodológicos para mantener resultados consistentes y comparables.

Aquí, se han descrito dos configuraciones experimentales utilizando laberintos en Y y herramientas de monitoreo remoto para evaluar la ecología química reproductiva de reptiles escamosos invasores (es decir, serpientes y lagartos) en diferentes escenarios de campo: lagartos tegu blancos y negros argentinos cautivos capturados en libertad(Salvator merianae)en Gainesville, FL, y pitones birmanos capturados en la naturaleza(Python bivittatus)en el Parque Nacional Everglades, FL. Como lo implica su nombre, el aparato del laberinto en Y crea un ambiente experimental en el que un animal entra en un pasadizo principal (la base de la Y; "base") que luego conduce a dos pasadizos divergentes (los brazos de la Y; "armas"). En estos experimentos, se utilizan dos tipos de animales para un solo ensayo: animales que ponen olores (proporcionan el aroma de estímulo en un área restringida del laberinto) y animales focales (se recopilan datos sobre este animal a medida que explora el rastro de olores).

Como un aparato experimental en estudios quimioecológicos, cualquier laberinto en Y debe ser construido de una manera que permita la fácil eliminación del animal en su interior y puede ser desmontado para una limpieza a fondo y restablecer. También se discuten las limitaciones inherentes a estos diferentes entornos de prueba (por ejemplo, animales diurnos frente a animales nocturnos, diferencias de infraestructura) que provocaron ajustes metodológicos. Aunque el enfoque estaba en los lagartos tegu y las pitones birmanas, estos diseños se pueden aplicar a una amplia gama de especies de reptiles. En esta investigación sobre reptiles invasores, los laberintos en Y benefician la tasa y la escala de inferencia porque permiten la recopilación rápida de datos para informar los objetivos de gestión que cambian al ritmo de la amenaza de invasión planteada por una especie determinada. En particular, el estudio de la quimioecología de las especies invasoras es fundamental para el desarrollo de herramientas eficaces de control químico.

La discriminación es la observación clave de las pruebas empíricas que utilizan laberintos en Y donde un animal focal elige entre dos estímulos y se evalúa ese proceso de toma de decisiones. También se puede anotar una franja de comportamientos en ensayos de laberinto en Y durante el ensayo en sí (en vivo) o después del ensayo (video) para expandir el poder inferencial. La complejidad de los objetivos a priori de un estudio determinado dicta si la observación en vivo o las grabaciones archivadas se adaptan mejor al diseño. Aquí, los métodos del laberinto en Y se han descrito en detalle para abordar preguntas quimioecológicas para informar futuros estudios de investigadores interesados en preguntas similares sobre el comportamiento de los reptiles, especialmente en ecología química.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran el uso de vertebrados vivos fueron aprobados por los Comités Institucionales de Cuidado y Uso de Animales del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos y el Servicio Geológico de los Estados Unidos.

NOTA: Debido a que estos estudios se centran en los vertebrados invasores, también se debe cumplir con las normas de contención, que imponen restricciones específicas en el diseño y la ejecución de experimentos. Aunque muchos de los métodos son similares entre las dos localizaciones del estudio y el tiempo diurno contra nocturno del estudio, los métodos distintos se han descrito en cada una de las dos secciones siguientes.

1. Configuración del laberinto en Y y protocolo diurno para el Servicio de Inspección de Sanidad Vegetal Animal (APHIS, por sus, Por sus, U.S. Department of Agriculture (USDA) Animal Plant Inspection Service (APHIS) Wildlife Services National Wildlife Research Center Florida Field Station: pruebas in situ de tegus cautivos capturados en la naturaleza

Nota : los planes para todos los componentes del laberinto en Y y la estructura de contención se proporcionan en el archivo suplementario 1.

  1. Dimensiones y diseño del laberinto en Y
    1. Utilice una pieza inferior (paneles de revestimiento de fibrocemento de 1,22 m x 2,44 m) para anclar el laberinto en Y. Taladrar agujeros en la capa superior para permitir que los pernos de carro pasen hacia arriba para la fijación de las piezas del laberinto. Para obtener instrucciones específicas, consulte Archivo suplementario 1.
    2. Construir las paredes del laberinto de tablero de pvc blanco; las dimensiones internas de la base son de 120 cm L (paredes laterales) x 42 cm W x 14 cm H.
      NOTA: El ancho del pasaje fue diseñado para acomodar el ancho focal del animal 2x. El ancho adicional permite flexibilidad para que se creen dos senderos de olor depositados en animales.
    3. Asegúrese de que las dimensiones internas de los brazos sean de 120 cm L (paredes laterales) x 40 cm de W x 14 cm de H.
    4. Ensamble el laberinto con componentes inferiores, laterales y superiores independientes protegidos juntos antes de ejecutar una prueba. Haga la parte superior de acrílico transparente para permitir la visualización de animales dentro del laberinto. Para obtener instrucciones específicas, consulte Archivo suplementario 1.
      1. Cuando se crea un único rastro de olor, utilice una partición interna en la base para restringir el acceso al espacio para el tegu de colocación de olores. Para obtener instrucciones específicas, consulte Archivo suplementario 1.
      2. Cuando dos rastros de olor son depositados por diferentes animales en secuencia, utilice un sistema de particiones para bloquear los brazos alternos del laberinto y excluir a cada animal de las mitades alternas de la base. Para obtener instrucciones específicas, consulte Archivo suplementario 1.
    5. Utilice cajas para permitir el transporte y la recolección de animales utilizados en ensayos de laberinto en Y. Asegúrese de que todas las cajas sean opacas y estén equipadas con tapas extraíbles y puertas de acrílico que se aseguren fácilmente.
      1. Asegúrese de que la caja base (109 cm L x 56 cm W x 46 cm H) esté en la abertura de la base del laberinto en Y. Úsenlo para transferir animales perfumados o focales al laberinto y para la aclimatación antes de abrir la puerta y permitir el acceso voluntario de los animales al laberinto.
      2. Asegúrese de que las cajas de los brazos (83 cm L x 50 cm W x 44 cm H) estén en los extremos terminales de los brazos del laberinto en Y para facilitar la captura de animales perfumados o focales.
      3. Para obtener instrucciones específicas sobre la construcción y el montaje, consulte el Archivo suplementario 1.
  2. Configuración de la cámara para la adquisición de vídeo diurno
    1. Especificaciones de la cámara: Asegúrese de que las cámaras del proyecto puedan grabar vídeo continuo en condiciones de luz variables y sean adecuadas para su uso en exteriores en condiciones de temperatura y humedad prevalecientes.
      1. Con la cámara montada en la parte inferior de la carcasa de estudio, asegúrese de que todo el laberinto en Y se pueda capturar en el campo de visión de la cámara. Ajuste la lente o la altura de la cámara para aumentar o disminuir el campo de visión. Cuando se establece el campo de visión, asegúrese de que se puedan capturar suficientes detalles de comportamiento, como movimientos de lengua.
        NOTA: Si la altura del gabinete de estudio es fija (por ejemplo, 180 cm H), lo que limita los ajustes en el campo de visión, se pueden utilizar varias cámaras para obtener una cobertura completa del interior del laberinto en Y. Asegúrese de que las cámaras estén configuradas para permitir un "amplio rango dinámico" cuando se utilicen en aplicaciones al aire libre.
    2. Especificaciones de alimentación: Asegúrese de que cada cámara tenga una fuente de alimentación adecuada para grabar vídeo continuo durante la duración de la prueba planificada (por ejemplo, utilice una fuente de alimentación ininterrumpida (UPS) con una batería de reserva incorporada para garantizar una alimentación continua).
      NOTA: Si no hay ninguna fuente de alimentación de CA disponible, las cámaras POE (alimentación a través de ethernet) se pueden alimentar a través de cables de red conectados a una grabadora de vídeo digital (DVR) o conmutador POE donde se utiliza una grabadora de vídeo en red (NVR).
    3. Especificaciones de grabación: Al elegir un DVR o NVR, asegúrese de que cumple con los requisitos del proyecto, incluida la capacidad de almacenamiento suficiente y suficientes conectores POE (DVR) o canales de cámara (NVR) para acomodar el número de cámaras utilizadas. Seleccione los parámetros de grabación para adaptarse a la calidad de vídeo deseada, teniendo en cuenta el tamaño de los archivos de datos (por ejemplo, la tasa de compresión H264 y una velocidad de imagen de 10 fotogramas por segundo [FPS]).
    4. Protocolo para la obtención y procesamiento de vídeo:
      1. Comience a grabar el video desde el momento en que el animal comienza a entrar en el laberinto hasta el momento de la captura o el período de tiempo preestablecido (1.3.3.4).
      2. Utilizando software que se puede instalar en uno o más ordenadores y permite la visualización de vídeo en directo o grabado, exportar archivos utilizando el formato de vídeo de su elección.
      3. Asegúrese de exportar la misma ventana de tiempo y duración de vídeo para cada cámara utilizada para permitir la revisión simultánea de múltiples fuentes.
      4. Asegúrese de exportar los datos regularmente porque muchos sistemas sobrescribirán los datos más antiguos con nuevos datos si la capacidad de almacenamiento de archivos DVR / NVR es limitada.
  3. Protocolo para el funcionamiento de animales que ponen olores
    1. Evaluación del sesgo
      1. Antes de realizar ensayos experimentales, evalúe un laberinto en Y para el sesgo ensamblando el laberinto, como se describe a continuación, pero sin presentar el aroma en el documento. Aclimate al animal focal y comience el ensayo.
        NOTA: Dependiendo del diseño del estudio (por ejemplo, medidas repetidas utilizando los mismos animales focales frente a pruebas de nuevos animales focales cada vez), los ensayos de sesgo establecerán que el laberinto en sí, por diseño, no sesga la elección de un animal focal. Muchos factores contribuyen al sesgo, como la elevación, la luz solar y los marcadores visuales.
      2. Si la reorientación o el ajuste de otros aspectos físicos del laberinto no eliminan el sesgo lateral, aleatorizar el brazo designado para recibir un aroma experimental en un ensayo determinado.
        NOTA: Durante un número determinado de ensayos, un laberinto imparcial da como resultado una probabilidad de elección de 0,5 para cada brazo, y se realiza una prueba binomial (Figura 2).
    2. Preparación de la prueba y ensamblaje del laberinto en Y
      1. Use guantes de nitrilo en todo momento cuando manipule cualquier superficie que el animal pueda explorar para evitar la contaminación por olor. Cambie los guantes entre los ensayos y dentro de la configuración de un ensayo si se están creando varios rastros de olor.
      2. Prepare papel perfumado nuevo y limpio (papel de carnicero blanco, mínimo 61 cm de ancho) en una superficie limpia. Corte a la longitud adecuada de tal manera que el papel para cada sección puede superponerse en la unión de la Y y extenderse más allá de los extremos de la base y los brazos para caber debajo de las cajas.
      3. Barrer la parte inferior del laberinto y luego cubrir con papel directamente o con una capa límite entre el papel y la parte inferior (por ejemplo, láminas de plástico) para facilitar la limpieza si el animal defeca o almizcle en el laberinto.
      4. Asegure el papel en su lugar perforándolo con pernos de carro en la parte inferior, trabajando de un extremo a otro para mantener la superficie lisa. Superponga los papeles en la unión de tal manera que el papel base esté en la parte superior.
      5. Coloque los lados del laberinto en su posición sobre los pernos del carro, pero no los asegure a la parte inferior.
      6. Inserte y asegure la(s) partición(es) necesaria(s) para que se pruebe el tipo de ensayo (véase ensayos de aroma simple 1.3.3 vs. ensayos de doble aroma 1.3.4).
      7. Deslice las piezas superiores de acrílico en ranuras y asegure con clavos de cabeza plana.
      8. Asegure los lados a la parte inferior apretando las tuercas del ala a los pernos del carro.
      9. Coloque las cajas de brazo limpio en su lugar, y asegure con tornillos de pulgar. Asegure la tapa de la caja con lazos de cable. Asegúrese de que se han quitado las puertas.
    3. Ensayos de un solo aroma
      NOTA: El propósito de estas pruebas es presentar un solo rastro de olor en el laberinto en Y que se ejecuta desde la base a través de un brazo.
      1. Antes de colocar la parte superior de acrílico, asegure la partición para bloquear el brazo no tratado. Seleccione el brazo perfumado al azar (por ejemplo, lanzamiento de monedas, generador de números aleatorios).
      2. Coloque el animal que pone olor en la caja base limpia y seca. Asegure la tapa de la caja base (por ejemplo, lazos de cable, pernos) y la puerta (por ejemplo, tornillo del pulgar). Transporte la caja de sujeción hasta el recinto de estudio y agarrándola hasta el final de la base del laberinto en Y con tornillos para pulgares.
        NOTA: Asegúrese de que la puerta de la caja base esté en su lugar antes de cargar el animal.
      3. Aclimate al animal en la caja durante un período determinado y constante (por ejemplo, 60 min). Retire la puerta de la caja base y permita que el animal entre libremente en el laberinto.
      4. Monitoree la actividad de los animales de forma remota utilizando la alimentación de video (ver más abajo). Después de que el animal haya viajado desde la caja base hasta la caja del brazo, retire al animal del laberinto ya que el aroma se ha completado.
        1. Si el animal está dentro de cualquier caja, inserte y asegure la puerta extraíble, retire la caja y devuelva al animal a su recinto.
        2. Si el animal está de vuelta en el laberinto, espere cerca del laberinto hasta que se vea al animal regresando a la caja y, a continuación, retire la caja.
          NOTA: Los squamates defecan a la defensiva y crean señales de alarma que contaminan el olor que se está probando, así que evita asustar al animal.
        3. Si el animal no regresa a una caja, acércate lentamente al laberinto y usa señales visuales (por ejemplo, agitar lentamente la mano) para alentar al animal a entrar en la caja, y luego retira la caja.
      5. Limpie y seque la caja base (1.5.5).
      6. Si se produjo la defecación, recoger y absorber tanto como sea posible con una toalla de papel, pero no limpie para evitar la propagación.
      7. Desensamble parcialmente el laberinto para permitir la eliminación de la partición interior y, a continuación, vuelva a montarlo. Limpie la partición (1.5.5).
      8. Proceda a la sección 1.4 para el protocolo para el funcionamiento de animales focales.
    4. Ensayos de doble aroma
      NOTA: El propósito de estos ensayos es presentar dos rastros de olor diferentes simultáneamente en el laberinto en Y, con ambos corriendo desde la base a través de su respectivo brazo elegido al azar.
      1. Antes de colocar la parte superior de acrílico, asegure las particiones para bloquear el brazo no elegido para el primer aroma y la mitad de la base opuesta al brazo bloqueado.
      2. Siga los procedimientos descritos anteriormente para un solo ensayo de olor (1.3.3 a 1.3.3.8) con una excepción. Cuando se retire la puerta de acrílico (1.3.3.3), inserte una puerta de tamaño medio en la abertura del lado que debe permanecer bloqueada para garantizar que el animal perfumado sólo pueda moverse en la sección abierta del laberinto.
      3. Desensamblar parcialmente el laberinto, quitar las particiones y limpiar (1.5.5). Secar con toallas limpias.
      4. Vuelva a instalar las particiones, pero voltéearlas para bloquear el área ahora perfumada del laberinto. Vuelva a instalar la parte superior de acrílico.
      5. Repetir el paso 1.3.4.2 para el segundo animal que pone olor.
      6. Desensamblar parcialmente el laberinto y quitar las particiones. Vuelva a montar el laberinto.
      7. Proceda a la sección 1.4 para el protocolo para el funcionamiento de animales focales.
  4. Protocolo para el funcionamiento de animales focales durante las horas diurnas
    1. Siga los pasos 1.3.3.2 a 1.3.3.3 con el animal focal previsto para ese ensayo.
    2. Monitoree la actividad de los animales de forma remota utilizando video. Si observa sobre una ventana establecida de tiempo de exploración, inicie el temporizador cuando el animal haya emergido completamente de la caja base.
    3. Al término del ensayo, retirar al animal (1.3.3.4).
  5. Avería y limpieza
    1. Separar las cajas restantes del laberinto y desmontar todas las cajas. Use guantes de nitrilo fresco durante todo el desmontaje y la limpieza.
    2. Retire las piezas superiores de acrílico y póngalas a un lado en un lugar seguro para su limpieza para evitar arañazos o grietas. Asegúrese de evitar rascar las piezas cuando se quitan (se debe mantener el campo de visión claro para el comportamiento de monitoreo de video). Desmontar los lados del laberinto y ponerlos a un lado para la limpieza.
      NOTA: Minimice los arañazos y la degradación UV a materiales de laberinto en Y manteniéndolos siempre sombreados.
    3. Retire el papel (y el plástico) en un movimiento constante enrollándolo hacia arriba para evitar la contaminación del fondo y deséchelo.
    4. Use un jabón inodoro de grado de laboratorio y paños de cepillo o microfibra suaves para limpiar todas las superficies de las piezas del laberinto en Y y todas las cajas. Limpie las piezas superiores de acrílico y las puertas extraíbles con el mismo jabón, pero con telas suaves de esponja o microfibra para evitar arañazos.
      NOTA: Las señales químicas conocidas en reptiles escamados son compuestos solubles en lípidos, y el lavado con un detergente es el protocolo estándar para limpiar las señales de lípidos y otros aromas de aparatos a base de polímeros en estudios de vertebrados terrestres11,12,21.
      NOTA: En aplicaciones de campo, pueden ser necesarios protocolos de saneamiento. Si es así, rocíe todas las superficies internas del laberinto (piso, paredes, particiones, piezas de acrílico, cajas) con una solución de saneamiento adecuada, déjelo reposar durante 10 minutos y luego limpie con un paño de microfibra.
    5. Enjuague los componentes limpiados con agua limpiando las superficies con toallas de microfibra limpias y húmedas, y evite dejar que los residuos de jabón se sequen antes del enjuague; no vierta agua en el laberinto.
    6. Deje que las piezas se sequen al aire o seque con paños de microfibra frescos.
    7. Una vez seco, vuelva a montar las piezas del laberinto si se ejecuta otra prueba inmediatamente.

2. Configuración del laberinto en Y y protocolo de sincronización crepuscular para los ensayos del Servicio Geológico de los Estados Unidos (USGS) en colaboración con el Servicio de Parques Nacionales: pruebas relativamente remotas de pitones birmanos capturados en la naturaleza

NOTA:Los planes para todos los componentes del laberinto en Y y la estructura de contención se proporcionan en el archivo suplementario 2.

  1. Componentes del laberinto en Y y justificación de los cambios en el diseño del USDA
    NOTA: El laberinto en Y descrito se alteró significativamente para expandir las especies de investigación potenciales y en condiciones aisladas. La profundidad vertical se incrementó para dar cabida a una variedad de especies, y se utilizaron diferentes materiales y métodos de construcción para mejorar la durabilidad y la limpieza al aire libre. Consulte la figura 1 para obtener una visualización del laberinto completado. Para obtener instrucciones específicas sobre la construcción y el montaje, consulte el Archivo suplementario 2.
    1. Corte los componentes del laberinto en Y de polipropileno blanco y suelde con soldadura por calor todas las piezas cortadas que se van a fijar permanentemente (por ejemplo, paredes laterales y inferiores del laberinto).
      1. Ancle la parte inferior del laberinto en Y (244 cm L x 122 cm W) hecha de láminas de madera contrachapada sujetas junto con tornillos de cubierta, unjándolo a través de un soporte angular de aluminio remachado a lo largo de la parte inferior de las paredes laterales exteriores del laberinto.
      2. Asegúrese de que la base del laberinto en Y sea de 120 cm de L x 42 cm de anchura x 23 cm de H, y de que cada pared lateral del brazo exterior sea de 120 cm de L, la pared lateral del brazo interior sea de 108 cm de L (para obtener instrucciones específicas, consulte el Archivo suplementario 2).
      3. Coloque la parte superior de acrílico en su lugar utilizando un ángulo de aluminio fijado a las paredes laterales con tornillos cada 30 cm (para direcciones específicas, consulte el Archivo Suplementario 2).
        NOTA: Los tornillos colocados a intervalos regulares en el borde superior de las paredes laterales del laberinto en Y también sirven como marcadores visuales estáticos al analizar el video de las pruebas y proporcionan escala.
      4. Asegúrese de que cada abertura del laberinto en Y (base, brazos) tenga una placa base adicional (42 cm de anchura x 30 cm de H) en el extremo de la pared lateral que se une a una caja para que la placa base enmarque una abertura central (34 cm de anchura x 16 cm de al día; para obtener instrucciones específicas, consulte el archivo suplementario 2).
      5. Utilice una pieza de partición para restringir el acceso del animal perfumado (para obtener instrucciones específicas, consulte el Archivo suplementario 2). Asegure una placa de bloqueo (46 cm W x 22 cm H) en su lugar con cinta sujetador. Anclar la partición y la placa utilizando pesos improvisados y fáciles de limpiar (por ejemplo, jarra de plástico llena de agua; 2.3.6; Figura 1).
      6. Asegúrese de que las piezas de acrílico componen la parte superior del laberinto (0,6 cm de espesor, claro). Para obtener instrucciones específicas, consulte Archivo suplementario 2.
    2. Utilice cajas opacas equipadas con una puerta corredera y tapas que se aseguren fácilmente para permitir el transporte y la recolección de animales en ensayos de laberinto en Y(Figura 1).
      1. Modifique las cajas (21,6 cm L x 27,9 cm W) con orificios de drenaje en la parte inferior, ajuste las tapas con tornillos y tuercas pequeños y proporcione una sola abertura para la entrada / salida (la puerta). Para obtener instrucciones específicas, consulte Archivo suplementario 2.
      2. Sujete la caja al final del laberinto en Y uniendo la placa frontal de la caja a la placa frontal del laberinto en Y usando pernos y alerones o cerraduras.
        NOTA: Cuando está en su lugar, las cajas también anclan las piezas superiores de acrílico en su lugar.
  2. Configuración de la cámara para la adquisición de vídeo crepuscular: Consulte la Figura 1 para obtener una instantánea del campo de visión de la cámara.
    1. Especificaciones de la cámara: Asegúrese de que la cámara del proyecto pueda grabar vídeo continuo en condiciones variables de luz y temperatura para adaptarse a las especies de estudio crepusculares y nocturnas.
      1. Con la cámara de proyecto montada en los travesaños del techo de la carcasa, asegúrese de que todo el laberinto en Y se pueda capturar dentro del campo de visión de la cámara. Subir o bajar la altura de la tienda para aumentar o disminuir el campo de visión (cámara de proyecto montada a una altura de ~3 m). Asegúrese de que el reflejo de la luz infrarroja emitida por la cámara en la parte superior acrílica no oculte partes críticas de los fotogramas del material de archivo nocturno.
    2. Especificaciones de potencia: Asegúrese de que cada cámara del proyecto tenga una fuente de alimentación adecuada para grabar vídeo continuo para la filmación nocturna (aproximadamente 20 h).
      NOTA: Si no hay una fuente de alimentación de CA disponible, la energía se puede suministrar utilizando baterías de 12 voltios selladas de plomo ácido de ciclo profundo (por ejemplo, dos baterías de gel de 12-V 20-Ah cableadas en paralelo).
    3. Especificaciones de grabación: Para minimizar el volumen de almacenamiento de archivos, grabe el video de menor calidad que aún sea adecuado para permitir el recuento de movimientos de lengua en el laberinto en Y.
      NOTA: El material de archivo de alta resolución requiere un gran volumen de almacenamiento y reducir la resolución es una forma muy eficaz de garantizar que los tamaños de archivo sean manejables.
      1. Limite la velocidad de fotogramas (fotogramas por segundo, FPS) del material de archivo al mínimo necesario para detectar movimientos de lengua (por ejemplo, la resolución de grabación de 800 x 450 con una velocidad de fotogramas máxima de 25 FPS da como resultado aproximadamente 120 GB de material de archivo por prueba).
    4. Protocolo para la obtención y procesamiento de vídeo
      1. Acose la cámara al principio de cada evento de perfumado (2.3.10) y deje que grabe continuamente hasta el final del evento focal (aproximadamente 20 h).
      2. Una vez completada cada prueba, apague la cámara y recupere la tarjeta SD (2.4.4). Transfiera el material de archivo a la ubicación de almacenamiento deseada.
      3. Como las tarjetas SD con frecuencia obligan a los dispositivos de grabación a grabar material de archivo en clips de 5 minutos, combine estos clips utilizando un software de procesamiento de películas para facilitar el procesamiento.
      4. Revise el material de archivo mediante un programa de revisión de archivos multimedia que permita una velocidad de reproducción variable e intervalos de avance y salto personalizables.
        Nota : esto reduce el tiempo de revisión de aproximadamente 20 h hacia abajo a un máximo de 1 h si no se requiere resolución de escala fina durante el procesamiento de vídeo.
  3. Protocolo para el funcionamiento de animales que ponen olores
    NOTA: Los pasos en esta sección tardarán aproximadamente 1.5 días en completarse debido a los tiempos de aclimatación más largos para los reptiles silvestres.
    1. Consulte el prefacio de sesgo en la sección 1.3.1 para asegurarse de que no se puede encontrar ningún sesgo en el laberinto.
    2. Use guantes de nitrilo en todo momento cuando manipule cualquier superficie o animales de estudio para evitar la contaminación por olor.
    3. Coloque el animal perfumado o focal en su caja al menos 24 h antes del ensayo para la aclimatación.
      NOTA: Para minimizar los efectos de estrés, la caja se deja en un área sombreada lo más cerca posible del laberinto sin ser molestada por la limpieza u otras actividades. Asegúrese de que todos los animales probados (perfumados, focales) estén aclimatados de esta manera.
    4. Prepare papel perfumado nuevo y limpio sobre una superficie limpia y de longitud suficiente para superponerse en la unión de la Y, y cubra toda la superficie inferior (2 papeles de brazo = 121,9 cm; 1 papel base = 152,4 cm).
    5. Asegure los extremos de los papeles cerca de las cajas y la unión en Y con cinta adhesiva.
    6. Instale las particiones para bloquear la mitad del brazo base (lado izquierdo o derecho) con una partición larga y bloquee la entrada al brazo opuesto con una partición corta. Al instalar las barreras, no rasgue el papel perfumado. En el caso de los animales con olores grandes, coloque un objeto pesado que pueda retirarse y limpiarse fácilmente detrás de la barrera como un aparato ortopédico para evitar fallos en la barrera (2.1.1.5).
      NOTA: El rastro de olor siempre debe comenzar en un lado de la base, luego cruzar al brazo opuesto para que la elección del animal focal sea clara.
    7. Deslice la parte superior de acrílico en su lugar, una sección a la vez, y asegúrese de que los ángulos se encuentran completamente. Use cinta de plástico transparente para cubrir cualquier hueco.
    8. Conecte ambas cajas de brazos al laberinto conectando las placas frontales con wingnuts y / o candados, y asegúrese de que las puertas estén abiertas con llave.
    9. Dos horas antes de la puesta del sol, coloque la caja base (que contiene el animal perfumado) y asegúrese de que todos los movimientos sean lentos y constantes para minimizar el estrés del animal.
    10. Arman la cámara y abran la puerta a la caja base, asegurándonos de enganchar la puerta en su lugar usando ambos cerrojos de cañón. Permanezca fuera de la vista del animal y salga de la zona.
    11. Después de 3 h (1 h después de la puesta del sol), tenga en cuenta la ubicación del animal dentro del laberinto, así como las condiciones ambientales. Si el animal está en tránsito, espere hasta que entre en la caja.
      1. Si el animal está en cualquier caja, cierre y asegure la puerta de la caja, retire la caja y luego retire el animal, teniendo cuidado de evitar la deposición defensiva de olor en la caja.
      2. Si el animal está inmóvil dentro del cuerpo del laberinto, use señales visuales (por ejemplo, vara larga o agitación de la mano) para estimular su movimiento en una caja. Si el animal permanece, retire la(s) caja(s) del brazo para que se pueda retirar la parte superior del acrílico, y el animal pueda recogerse manualmente y transferirse a una bolsa.
        NOTA: Siempre se debe usar el equipo de protección personal (EPP) adecuado cuando se manejan animales grandes (por ejemplo, guantes resistentes a los pinchazos, protección ocular).
    12. Desmontar parcialmente el laberinto para permitir la eliminación de las particiones interiores (evitar molestar el papel de olor) y luego volver a montar. Si se produjo la defecación, recoger y absorber tanto como sea posible con paños de microfibra limpios, pero no lavar el área.
    13. Continúe con la sección 2.4 para el protocolo para el funcionamiento de animales focales.
  4. Protocolo para el funcionamiento de animales focales crepusculares
    Nota : pasos en esta sección tardará aproximadamente 2 días en completarse y debe comenzar aproximadamente a la misma hora que el inicio de la sección 2.3.
    1. Aclimate al animal focal programado en la caja durante al menos 24 h antes de ser ejecutado en el laberinto.
      1. Durante las últimas horas de aclimatación focal del animal, ejecute el animal que pone el olor antes de pasar al siguiente paso (2.3.9).
        NOTA: Cronomeque el paso de colocación de olores lo más cerca posible del momento de introducción del animal focal en el laberinto para reducir la degradación del olor.
    2. Coloque la caja base (que contiene el animal focal) usando tuercas de ala y / o candados a la base del laberinto en Y. Use movimientos lentos y constantes al sostener/transportar la caja para minimizar el estrés al animal focal.
      1. Asegúrese de que ambas puertas de la caja del brazo estén abiertas. Comience la prueba focal abriendo y enganchando la puerta de la caja base usando pernos de barril. Permanecer fuera de la vista del animal y salir de la zona.
        NOTA: Con los ensayos de reptiles nocturnos salvajes, los animales focales se dan durante la noche para explorar el laberinto.
    3. Cuatro horas después del amanecer, regrese al laberinto y siga la sección 2.3.11.1 para eliminar el animal focal.
    4. Recoger la tarjeta SD de la cámara y recargar las baterías si es necesario. Deseche el papel usado del laberinto y proceda a la limpieza (sección 1.5).

figure-protocol-1
Figura 1. Diseño del laberinto en Y del USGS. A la izquierda, un esquema muestra los componentes del laberinto en Y con una barra de escala para la perspectiva. A la derecha, una instantánea de la cámara de vídeo muestra el campo de visión de las grabaciones de comportamiento. Haga clic aquí para ver una versión más amplia de esta figura.

Resultados

Una multitud de variables se pueden registrar y / o puntu anotar a partir de ensayos de laberinto en Y. El diseño del estudio debe estar impulsado principalmente por los resultados/entregables deseados. Además, si el estudio se basa en medidas repetidas (por ejemplo, el uso repetido de los mismos animales focales), se requieren estructuras adecuadas de prueba y análisis. Por ejemplo, como los ensayos del USDA se basaron en pruebas repetidas de tegus focal, la planificación de los ensayos experimentales fue completamente aleatoria.

Datos de elección: La mayoría de los estudios que utilizan laberintos Y informan datos de elección binaria simples y analizan los resultados con estadísticas paramétricas, como una prueba binomial. La principal limitación aquí es el tamaño de la muestra, que afecta directamente el poder de cualquier análisis estadístico. En la Figura 2,se representan una serie de umbrales estadísticos por tamaño de muestra del estudio que demuestran cuántos "éxitos" necesitarían ocurrir para que una prueba binomial dada produzca resultados estadísticamente significativos. Estos son matemáticamente derivados y, por lo tanto, generalizables a cualquier prueba de laberinto Y. Las estadísticas binomiales son fáciles de generar utilizando freeware en línea. Para calcular las probabilidades, se utilizan distribuciones de una cola si se da una justificación a priori; de lo contrario, se debe utilizar la distribución de dos colas.

La elección de un brazo a menudo está determinada por la distancia que el animal focal se mueve en un brazo dado. La forma más sencilla de establecer este umbral es estableciendo un punto de referencia dentro del laberinto. Para la mayoría de los estudios de laberinto en Y, el punto de referencia es la entrada de la caja del brazo. Debido a que los reptiles realizan toda la evaluación quimiosensorial con los órganos de detección química en la región anterior de la cabeza, la cabeza es el punto focal durante un ensayo. Por ejemplo, debido a que las pitones birmanas a menudo son más largas que todo el laberinto en sí, la elección es mejor y más eficientemente determinada por el movimiento de la cabeza más allá de un punto de referencia. Otras opciones para determinar la elección son el tiempo pasado en un brazo y el movimiento completo del animal focal en una caja. El fracaso está determinado por un animal focal que no toma una decisión dentro de un período específico.

Se pueden derivar análisis de resolución más finos de los datos de elección en el laberinto en Y. Por ejemplo, los investigadores pueden generar una puntuación de penalización de elección16. Aquí, los investigadores deben rastrear el grado en que el animal focal exploró el brazo no objetivo del laberinto. El no objetivo puede definirse como el brazo que los investigadores determinan a priori que el animal focal no elegirá en función de la hipótesis alternativa probada. El ejemplo más simple de un brazo no objetivo sería el brazo sin aroma cuando solo un brazo contiene un aroma objetivo. Ejemplos más complejos serían la elección entre dos aromas de la misma fuente, pero presentados a diferentes concentraciones7. Cuando el diseño experimental es multinivel y/o los datos pasan de binarios a incrementales, como ocurre con la penalización por elección, se debe utilizar un enfoque estadístico adecuado, como el análisis de varianza de medidas repetidas (ANOVA) u otros métodos utilizados con conjuntos de datos continuos o proporcionales.

Comportamientos: A lo largo de la duración de un experimento en el que se observan animales focales, se puede cuantificar una variedad de comportamientos individuales. Este número de variables puede determinarse a priori en función de lo que se conoce16 o post hoc tras observaciones preliminares sobre un subconjunto de datos14,15. Los objetivos del estudio y su grado de resolución determinan qué evaluaciones de comportamiento se deben hacer dentro del laberinto, si las hay (es decir, en muchos estudios, solo se cuantifican los datos de elección17). Los comportamientos se pueden evaluar en todo el laberinto, en secciones o durante períodos de tiempo específicos; por ejemplo, los comportamientos vistos sólo en la base o en la unión de los brazos pueden ser priorizado8. Las grabaciones de vídeo facilitan la puntuación de comportamiento, aunque la resolución del vídeo y su duración (factores que imponen restricciones de almacenamiento de datos) deben tenerse en cuenta antes de que comience la experimentación.

Variables temporales: Al igual que con las variables de comportamiento, muchos aspectos temporales del rendimiento animal se pueden cuantificar durante los ensayos del laberinto en Y. Por ejemplo, los investigadores pueden cronome tiempo períodos de latencia (por ejemplo, latencia para emerger de la caja8). La mayoría de las variables temporales están asociadas con la exploración del laberinto, como el tiempo de ejecución total o el tiempo pasado en cada brazo. Estas variables generalmente se analizan en un análisis multifactorial como el ANOVA multifacción.

Sesgo del observador: Con cualquier estudio que involucre el comportamiento animal, el sesgo del observador influye significativamente en la recolección de datos18. Por lo tanto, los observadores deben ser ciegos al tratamiento que se está probando. La forma más sencilla de hacerlo es codificar los archivos de vídeo numéricamente y luego ordenarlos aleatoriamente (por ejemplo, generador de números aleatorios) antes de asignarlos a los observadores. Controlar el sesgo del observador es difícil o imposible cuando la recopilación de datos en vivo es la única opción. En un entorno de campo, esto requeriría dos cooperantes: un observador ciego al tratamiento y un coordinador que establece el ensayo. Extensas revisiones resumen los efectos del sesgo del experimentador en la recolección e interpretación de datos en estudios conductuales y ecológicos18,19.

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Figura 2. Tamaños de muestra y valores P para pruebas binomiales a partir de los resultados del laberinto Y. Cada tamaño de muestra dado representa un número determinado de ensayos en los que se prueba un olor en un brazo de la Y (brazo objetivo) mientras que el otro podría ser un control (no objetivo). El número superior por encima de cada barra es el valor P de una cola para ese número de opciones de brazo objetivo, la parte inferior es de dos colas. Los números dentro de la barra superior representan el número máximo de opciones no objetivo que siguen siendo tradicionalmente estadísticamente significativas (P < 0,05). Haga clic aquí para ver una versión más amplia de esta figura.

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Discusión

Si bien los laberintos en Y son herramientas muy poderosas para investigar la ecología química en reptiles, su diseño limitado puede excluir otras vías de investigación. Sin embargo, hay una diversidad de otras opciones disponibles11,12,20,21,22. Por ejemplo, los ensayos de movimiento de lengua son más simples de ejecutar y permiten la evaluación simultánea de los comportamientos exhibidos a una serie de estímulos químicos en relación con los olores de control23,24,25,26. Las pruebas de campo abierto son otra opción en la que un animal focal explora libremente un recinto hasta que encuentra una fuente de señales químicas, y sus reacciones de comportamiento se puntuan posteriormente27,28. Las combinaciones de estos enfoques pueden evaluar las capacidades discriminatorias de los reptiles en diversos contextos, como la presentación de una mezcla de olores artificiales y naturales junto con la refutación29. Los laberintos en Y también se pueden modificar para exponer a los animales a señales químicas en el aire solas o en combinación con señales transmitidas por sustrato16,30,y la inferencia post hoc se puede utilizar para rediseñar la recopilación de datos si se dispone de datos de vídeo archivados31. Los bioensayos deben diseñarse para simplificar la recopilación de datos y minimizar los estímulos conflictivos, especialmente cuando se está evaluando una fuente específica de señales (por ejemplo, señales químicas21).

Los investigadores en el comportamiento animal a menudo observan y cuantifican las respuestas focales de los animales en entornos artificiales novedosos (por ejemplo, un laberinto cerrado con un paisaje sin rasgos distintivos), y se debe tener cuidado de evaluar si un animal determinado está exhibiendo un comportamiento natural, exploratorio versus evitación, agitación o comportamiento angustiado similar. El comportamiento animal angustiado en aparatos experimentales se atribuye principalmente a la neofobia: miedo a la novedad32. Un ejemplo es el comportamiento de escape, donde el animal focal empuja contra las articulaciones o los bordes del aparato para lograr la salida. Otro ejemplo es la timidez, donde el animal focal demuestra renuencia a entrar en el laberinto, cuyo grado se puede cuantificar por la latencia de entrada del laberinto. El (re)diseño del aparato puede facilitar la participación del animal focal para evitar estos efectos confusos de la angustia. El enfoque más común es la introducción repetida del animal focal en el aparato para eliminar la novedad del medio ambiente antes de que comiencen las pruebas, y los modelos estadísticos contemporáneos (por ejemplo, modelos mixtos lineales generalizados) permiten que los animales de prueba se utilicen en múltiples ensayos. Un importante aparte relevante para las consideraciones ecológicas en las pruebas de comportamiento es que la reducción de la neofobia se asocia con el éxito de las especies invasoras33. Así, dependiendo del conocimiento a priori de la especie en cuestión, la neofobia puede tener una importancia variable como consideración de diseño experimental.

La adquisición de datos de comportamiento de videos impone múltiples restricciones que se convierten en cuellos de botella importantes en las líneas de tiempo experimentales. Por ejemplo, la duración de una prueba determinada puede aumentar exponencialmente el tiempo de extracción de datos. Una solución consiste en analizar el comportamiento solo hasta que se cumpla un umbral (por ejemplo, el tiempo total de actividad). El umbral se puede basar en el vídeo más largo disponible para una prueba determinada. Alternativamente, se puede desarrollar la observación basada en máquinas (por ejemplo, inteligencia artificial), aunque esto consume mucho tiempo y recursos con un esfuerzo considerable requerido para el control de calidad. Otro problema es la administración de datos: los videos deben ser de calidad suficiente para permitir la puntuación y evaluación del comportamiento, lo que resulta en restricciones de almacenamiento de datos. Si bien el almacenamiento en la nube ahora es accesible, las tasas de carga / descarga a menudo son problemáticas, especialmente cuando la adquisición de datos se produce en ubicaciones de campo remotas. Los desafíos adicionales se manifiestan en las limitaciones de las herramientas de registro que afectan la integridad de la observación conductual. La visión clara del comportamiento focal de los animales siempre es necesaria, pero la visibilidad a menudo se ve obstaculizada por factores incontrolables (por ejemplo, humedad, insectos, movimiento del viento). Además, cuando las grabaciones provienen de una sola perspectiva (por ejemplo, vista de pájaro), los comportamientos que ocurren en el plano vertical (por ejemplo, la cabeza se eleva14)son difíciles de evaluar. Una solución es proporcionar múltiples ángulos de cámara por prueba. Por último, la hora del día afecta significativamente el registro del comportamiento. El análisis de comportamiento nocturno requiere una cámara con un modo nocturno y una proyección de luz mínima para evitar el deslumbramiento obstructivo en la superficie del laberinto en Y o la atracción de insectos que pueden interrumpir la alimentación de la cámara. Teniendo en cuenta lo anterior, el conocimiento previo del sitio de estudio o la biología de las especies puede informar qué restricciones es probable que ocurran con qué frecuencia y, por lo tanto, informar los tamaños de muestra deseables.

El comportamiento se junta firmemente a la fisiología, y la utilidad de los Y-laberintos para la evaluación de la endocrinología del comportamiento en una variedad de especies se ha demostrado. Sin embargo, este trabajo enfatiza alguna variación en la ejecución de estos experimentos dependiendo de la especie objetivo, la pregunta de investigación y los recursos disponibles. Por lo tanto, la selección de materiales y dimensiones de cada configuración de prueba debe considerarse cuidadosamente para una posible expansión posterior de la investigación. En la sección 2 se describen las modificaciones realizadas en los materiales descritos en la sección 1, que se incorporaron para dar cabida a futuros ensayos conductuales más complejos con tegus. El aumento de la profundidad vertical de los laberintos de los Everglades permitirá responder a nuevas preguntas sobre ecología química en tegus capturados en la naturaleza sin prolongar indebidamente el diseño y la configuración del proyecto, lo que demuestra aún más la traducibilidad de este aparato experimental.

Cuando se emplean las técnicas descritas anteriormente en un entorno relativamente remoto (consulte la sección 2), hay varios factores limitantes que deben tenerse en cuenta, y la planificación del proyecto es primordial. Dependiendo del poder estadístico necesario para el experimento de tratamiento prescrito y el momento biológico de la especie objetivo (por ejemplo, la estacionalidad), los recursos y la mano de obra necesarios se verán afectados. Además, si se desea el uso único o repetido de animales focales, es necesario prestar especial atención a la reducción de los posibles factores de estrés. Cada uno de estos factores ampliará el cronograma del proyecto o requerirá un aumento de la mano de obra, el espacio y los materiales. Por ejemplo, la sección 2 presenta el uso de pitones machos capturados en la naturaleza como animales focales que arrastran a otro grupo de machos capturados en la naturaleza y manipulados hormonalmente, todos los cuales requieren aproximadamente 24 h de tiempo de aclimatación silencioso en cajas de retención para minimizar los efectos del estrés. Aunque estos períodos de aclimatación extendieron los tiempos de prueba a más de dos días, el estrés debido al cautiverio y el manejo afecta el comportamiento de los animales salvajes y debe minimizarse para generar conjuntos de datos limpios34,35.

En resumen, los laberintos en Y son herramientas poderosas y adaptables que se pueden utilizar para investigar la ecología química de la vida silvestre diversa en condiciones muy variables, siempre que haya una planificación a priori vigilante. Se debe considerar cuidadosamente elegir las preguntas apropiadas y diseñar adecuadamente la configuración experimental para los taxones y condiciones dados. Los investigadores y gerentes pueden beneficiarse significativamente del uso de laberintos en Y para comprender mejor la biología quimiosensorial animal, ya que estas herramientas permiten diseños experimentales flexibles que proporcionan grandes volúmenes de datos de comportamiento a gran escala, especialmente cuando se combinan con herramientas de monitoreo remoto.

Agradecimientos

El desarrollo del primer laberinto en Y fue apoyado por acuerdos de cooperación (15-7412-1155-CA, 16-7412-1269-CA y 17-7412-1318-CA) entre la Universidad James Madison (JMU) y el Servicio de Inspección de Sanidad Animal y Vegetal del USDA. El desarrollo del laberinto en Y en el Parque Nacional everglades fue financiado por un acuerdo de cooperación (P18AC00760) entre JMU y el Servicio de Parques Nacionales. Agradecemos a T. Dean y B. Falk por su facilitación de este proyecto en Everglades NP y asistencia con permisos y financiamiento. Agradecemos a W. Kellow por su asistencia en la construcción del usgs Y-maze. C. Romagosa, L. Bonewell y R. Reed proporcionaron apoyo administrativo y logístico. Agradecemos a los dos revisores anónimos que ofrecieron comentarios útiles. El financiamiento para el trabajo de los Everglades y el apoyo en especie fueron proporcionados por el Programa de Ciencia de Ecosistemas Prioritarios del Servicio Geológico de los Estados Unidos (USGS), el Servicio de Parques Nacionales (P18PG00352) y el Programa de Especies Invasoras del USGS. Cualquier uso de nombres comerciales, de empresas o de productos es sólo para fines descriptivos y no implica aprobación por parte del Gobierno de los Estados Unidos. Los hallazgos y conclusiones de esta publicación no han sido difundidos formalmente por el Departamento de Agricultura de los Estados Unidos y no deben interpretarse como una determinación o política del USDA.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Abrazadera de esquina de acero galvanizado de 1"Everbilt, The Home Depot13619Ver Archivo Suplementario 1, Paso 2.1 "Abrazadera de esquina de acero de 90 grados y 2.5 cm"
121.92cm de ancho x 304.8cm  L x 1.27cm H polipropileno blanco Hoja UHMW de alta temperatura de rango extendidoTIVARUHMNV SHVer "2.1. Componentes del laberinto en Y y justificación de los cambios en el diseño del USDA" (paso 2.1.1. "polipropileno blanco")
182,88 cm de largo x 81,28 cm de ancho x 0,64 cm de espesor Lámina de plexiglás acrílico transparente32032550912090Véase "2.1. Componentes del laberinto en Y y justificación de los cambios en el diseño del USDA" (paso 2.1.1.6. "Piezas acrílicas")
2,54 cm de ancho x 2,54 cm de alto x 243,84 cm de largo Acería de ángulo sólido de aluminio con acabado laminado11354Ver "2.1. Componentes del laberinto en Y y justificación de los cambios en el diseño del USDA " (paso 2.1.1.1. "soporte angular de aluminio")
Carrete de 4,5 kg de varillas redondas de soldadura de polipropileno de 5 mmHotAirToolsAS-PP5N10Ver "2.1. Componentes del laberinto en Y y justificación de los cambios en el diseño del USDA" (paso 2.1.1. "soldadura térmica")
5 mm Remaches de aluminio lisosArrowRLA3/16IPVer "2.1. Componentes del laberinto en Y y justificación de los cambios en el diseño del USDA" (paso 2.1.1.1. "remache")
Ángulo de aluminio, 1,9 cmEverbilt, The Home Depot802527Ver Archivo Suplementario 1, Paso 1.2 "Ángulo de aluminio (1,9 cm x 1,9 cm x 0,16 cm de grosor)"
Ángulo de aluminio, 2,5 cmEverbilt, The Home Depot800057Ver Archivo Suplementario 1, Escalones 1.2 y 2.2.2" ángulo de aluminio (2.5 cm x 2.5 cm x 0.16 cm de grosor)"
Ángulo de aluminio, 3.2 cmEverbilt, The Home Depot800037Ver Archivo Suplementario 1, Paso 1.2 "Ángulo de aluminio (3.2 cm x 3.2 cm x 0.16 cm de grosor)"
Barra plana de aluminio de 1" x 1/8" de espesorEverbilt, The Home Depot801927Ver Archivo Suplementario 1, Paso 3.2.1 "correa de aluminio"
Cámara de 2.0 MPAvigilon Avigilon, una empresa de soluciones de Motorola2.0C-H4SL-BO1-IRConsulte "1.5 Configuración de la cámara y adquisición de vídeo" (paso 1.5.1 "Avigilon 2.0 MP")
NVR de AvigilonAvigilon, una empresa de soluciones de MotorolaHD-NVR3-VAL-6TB-NAConsulte "1.5 Configuración de la cámara y adquisición de vídeo" (paso 1.5.3 "NVR")
Lámina acrílica transparente (5,6 mm de grosor)United States Plastic Corp.44363Ver Archivo Suplementario 1, Paso 1.3 "Hoja de acrílico transparente" y Paso 3.2.1 "Puerta de acrílico transparente"
Boquilla de soldadura de filete 3/16" x 15/32" / 4.5 x 12 mmTRIAC107.139Ver "2.1. Componentes del laberinto en Y y justificación de los cambios en el diseño del USDA" (paso 2.1.1. "soldadura por calor")
Carpeta de archivos colgantesSterilite18689004Véase "2.1. Componentes del laberinto en Y y justificación de los cambios en el diseño del USDA" (paso 2.1.2.1. "Cajas")
HardiePanel HZ10James Hardie Building Products9000525Ver Archivo Suplementario 1, Paso 1.1 "revestimiento de fibrocemento"
Pistola de soldadura por calorTRIAC141.227Ver "2.1. Componentes del laberinto en Y y justificación de los cambios en el diseño del USDA" (paso 2.1.1. "soldadura por calor")
Rollo de papel de carnicero kraft, 24"Bryco Goods24 pulgadas x 175 piesVer "1.2 Protocolo para ejecutar tegus que ponen aroma" (paso 1.2.1.2 "papel de carnicero")Rollo de
papel de carnicero kraft, 46 cm de anchoBryco GoodsBGKW2100Véase "2.3. Protocolo para ejecutar pitones que ponen aroma" (paso 2.3.4. "papel aromatizante")
Micro-90 Solución de limpieza concentrada International Products CorporationM-9050-12Ver "1.4 Desglose y limpieza" (paso 1.4.4 "jabón de laboratorio")
MKV ToolNix - Herramientas Matroska para linux/Unix y WindowsMoritz Bunkusv.48.0.0Ver "2.2. Configuración de la cámara y adquisición de vídeo" (paso 2.2.4.2. "software de procesamiento de vídeo")
Cámara de redAxis CommunicationsM3104-LVEVer "2.2. Configuración de la cámara y adquisición de vídeo" (paso 2.2.1. "Cámara del proyecto")
Palight ProjectPVC 1/4"Palram159841Véase "2.1. Componentes del laberinto en Y y justificación de los cambios en el diseño del USDA" (paso 2.1.2.3. "placa frontal")
Proyecto PalightPVC 1/8"Palram156249Véase "2.1. Componentes del laberinto en Y y justificación de los cambios en el diseño del USDA" (paso 2.1.2.1. "puerta")
Parabrisas de privacidad (verde)MacGregorTamaño a medidaVer Archivo Suplementario 1, Paso 4.2 "tela de sombra verde de alta resistencia"
Guante protector, brazo de dedocompletoOR ManoHS1010-RGXLVer "2.3. Protocolo para ejecutar pitones que ponen aroma" (paso 2.3.11.2. NOTA: "guante resistente a pinchazos")
REScue DesinfectanteVirox Animal Health44176Ver "1.5. Avería y limpieza" (paso 1.5.4. NOTA "solución de saneamiento")Molduras
de PVC reversibles, 1/2" x 24"UFP Industries, productos VerandaH120XWS17Consulte el Archivo Complementario 1, Paso 2.1 "Partición de tableros de PVC" y el paso 3.2.1 "Tableros de molduras de PVC más delgados"
S4S / Veranda HP TRIMUFP Industries, Productos de VerandaH190OWS4Consulte el Archivo Complementario 1, Pasos 1.2, 2.2.2 y 2.2.3 "Tablero de PVC"
S4S / Veranda HP TRIM (1" x 8" Nominal)UFP Industries, productos Veranda827000005Ver Archivo Suplementario 1, Pasos 3.2.1 "Tablero de moldura de PVC"
ScotchBlue 24 in. Pintor pregrabado' s Plástico3MPTD2093EL-24-SVer "1.2 Protocolo para la ejecución de tegus que ponen aromas" (paso 1.2.1.3 "láminas de plástico")
Caja de mano Sterilite 114 LSterilite Company1919, AceroVer Archivo Complementario 1, Paso 3.2 "caja de brazo"
Sterilite 189 L caja de manoSterilite Company1849, TitanioVer Archivo Complementario 1, Paso 3.2 "Caja base"
Super Max CanopyShelterLogic25773Ver Archivo Complementario 1, Paso 4.3 "Toldo blanco
"VLC Media Player VideoLANv.3.0.11Véase "2.2. Configuración de la cámara y adquisición de vídeo" (paso 2.2.4.3. "programa de revisión de archivos multimedia")
White Pavilion TentKing CanopyBJ2PCVer Archivo de Suplicación 2 "3. Materiales y consideraciones del cerramiento" (paso 3. "carpa pabellón")
de

Referencias

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Formal Correction: Erratum: Using Enclosed Y-Mazes to Assess Chemosensory Behavior in Reptiles
Posted by JoVE Editors on 7/27/2021. Citeable Link.

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Amy Y. Yackel Adams

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