Este documento proporciona tres ensayos fáciles y accesibles para evaluar el metabolismo de los lípidos en ratones.
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Artículo de método
Evaluación de la capacidad de manejo de lípidos de todo el cuerpo en ratones
En este artículo
Resumen
Resumen
La evaluación del metabolismo lipídico es una piedra angular de la evaluación de la función metabólica, y se considera esencial para los estudios de metabolismo in vivo. Los lípidos son una clase de muchas moléculas diferentes con muchas vías involucradas en su síntesis y metabolismo. Se necesita un punto de partida para evaluar la hemostasia lipídica para la investigación de la nutrición y la obesidad. Este artículo describe tres métodos fáciles y accesibles que requieren poca experiencia o práctica para dominar, y que pueden ser adaptados por la mayoría de los laboratorios para detectar anomalías en el metabolismo de los lípidos en ratones. Estos métodos son (1) medir varias moléculas de lípidos séricos en ayunas utilizando kits comerciales (2) evaluar la capacidad de manejo de lípidos en la dieta a través de una prueba de tolerancia intralipídica oral, y (3) evaluar la respuesta a un compuesto farmacéutico, CL 316,243, en ratones. Juntos, estos métodos proporcionarán una visión general de alto nivel de la capacidad de manejo de lípidos en ratones.
Introducción
Los carbohidratos y los lípidos son dos sustratos principales para el metabolismo energético. El metabolismo aberrante de los lípidos resulta en muchas enfermedades humanas, incluida la diabetes tipo II, las enfermedades cardiovasculares, las enfermedades del hígado graso y los cánceres. Los lípidos dietéticos, principalmente los triglicéridos, se absorben a través del intestino hacia el sistema linfático y entran en la circulación venosa en los quilomicrones cerca del corazón1. Los lípidos son transportados por partículas de lipoproteínas en el torrente sanguíneo, donde las partes de ácidos grasos son liberadas por la acción de la lipoproteína....
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Protocolo
Los animales se alojan en condiciones estandarizadas siguiendo protocolos experimentales y de cuidado animal aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales del Baylor College of Medicine (BCM). Los animales son alimentados con una dieta estándar o especial, agua ad libitum, y mantenidos con un ciclo día/noche de 12 horas.
1. Medición de lípidos séricos en ayunas
- Transfiera los ratones a una nueva jaula después de las 5 PM y rápido con acceso gratuito al agua, durante la noche (con alrededor de 16 horas de ayuno antes del experimento). El ayuno nocturno asegura el vaciado completo de los tractos gastrointestinal....
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Resultados
Mostramos con tres extractos que cada ensayo ofrece información valiosa sobre el metabolismo lipídico de los ratones. Para los ratones machos C57BL / 6J, desafiados por ocho semanas de alimentación con dieta alta en grasas (HFD) a partir de las ocho semanas de edad, los niveles de colesterol total se elevaron significativamente, mientras que los triglicéridos séricos y NEFA no lo fueron (Tabla 1), lo que sugiere que los triglicéridos y NEFA en la sangre no están regulados predominantemente por un desafío.......
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Discusión
Los tres ensayos descritos funcionan de manera robusta en el laboratorio, con algunas consideraciones críticas. Se requiere ayuno nocturno para determinar los niveles de lípidos séricos en ayunas y la prueba de tolerancia intralipídica oral. Para la prueba de tolerancia intralipídica oral, es fundamental hacer girar la sangre a temperatura ambiente para minimizar la formación de una capa de grasa, especialmente en los puntos de tiempo de 1 y 2 horas; es importante no descartar esta capa de grasa si se forma. Asegúrese de.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo es apoyado por los Institutos Nacionales de Salud (NIH), subvención R00-DK114498, y el Departamento de Agricultura de los Estados Unidos (USDA), subvención CRIS: 3092-51000-062 a Y. Z.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 20% Intralipid | Sigma Aldrich | I141 | |
| BD Jeringas estériles de punta deslizante 1ml | Shaotong | B07F1KRMYN | |
| CL 316,243 Hydrate | Sigma-Aldrich | C5976 | |
| Agujas de alimentación curvas (calibre 18) | Kent Scientific | FNC-18-2-2 | |
| Reactivo de glicerol libre | Sigma Aldrich | F6428 | |
| Solución estándar de glicerol | Sigma | G7793 | |
| SERIE HR NEFA-HR(2)REACTIVO DE COLOR A | Fujifilm Wako Diagnostics | 999-34691 | |
| SERIE HR NEFA-HR(2)REACTIVO DE COLOR B | Fujifilm Wako Diagnostics | 991-34891 | |
| SERIE HR NEFA-HR(2)DISOLVENTE A | Fujifilm Wako Diagnostics | 995-34791 | |
| SERIE HR NEFA-HR(2)DISOLVENTE B | Fujifilm Wako Diagnóstico | 993-35191 | |
| Kit de referencia de química Matrix Plus | Verichem | 9500 | |
| Micro Tubos de centrífuga | Fisher Scientific | 14-222-168 | |
| Tubo capilar de microhematrocrito, no heparanizado | Fisher Scientific | 22-362-574 | |
| SOLUCIÓN ESTÁNDAR NEFA | Fujifilm Wako Diagnostics | 276-76491 | |
| Solución salina tamponada con fosfato | Boston Bioproducts | BM-220 | |
| Reactivo de triglicéridos Thermo Scientific Reactivos | Fisher Scientific | TR22421 | |
| Thermo Scientifi | TR13421 |
Referencias
- Dixon, J. B. Mechanisms of chylomicron uptake into lacteals. Annals of the New York Academy of Sciences. 1207, Suppl 1 52-57 (2010).
- Nuno, J., de Oya, M. Lipoprotein lipase: review. Revista Clínica Española. 170 (3-4), 83-87 (1983).
- Williams, K. J.
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Reimpresiones y permisos
