Aislamiento Y Diferenciación De Preadipocitos Blancos Y Marrones Primarios De Ratones Recién Nacidos

Andrea Galmozzi; Bernard P. Kok; Enrique Saez

doi:10.3791/62005

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Artículo de método

Aislamiento Y Diferenciación De Preadipocitos Blancos Y Marrones Primarios De Ratones Recién Nacidos

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DOI:

10.3791/62005

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25 de enero de 2021

Andrea Galmozzi¹^,² , Bernard P. Kok¹ , Enrique Saez¹

¹Department of Molecular Medicine, The Scripps Research Institute, La Jolla, CA, USA, ²Department of Medicine, University of Wisconsin-Madison, School of Medicine and Public Health, Madison, WI, USA

En este artículo

Resumen

Este informe describe un protocolo para el aislamiento simultáneo de preadipocytes marrones y blancos primarios de ratones recién nacidos. Las células aisladas se pueden cultivar en cultivo e inducir a diferenciarse en adipocitos blancos y marrones completamente maduros. El método permite la caracterización genética, molecular y funcional de las células de grasa primarias en cultivo.

Resumen

La comprensión de los mecanismos que son la base de la diferenciación y de la función del adipocyte se ha beneficiado grandemente del uso de las variedades de células blancas inmortalizadas del preadipocyte. Estas variedades de células cultivadas, sin embargo, tienen limitaciones. No capturan completamente el espectro funcional diverso de las poblaciones heterogéneas del adipocyte que ahora se saben para existir dentro de depósitos adiposos blancos. Para proporcionar un modelo más fisiológicamente relevante para estudiar la complejidad del tejido adiposo blanco, se ha desarrollado y optimizado un protocolo para permitir el aislamiento simultáneo de progenitores primarios de adipocitos blancos y marrones de ratones recién nacidos, su rápida expansión en cultivo y su diferenciación in vitro en adipocitos maduros y completamente funcionales. La principal ventaja de aislar las células primarias de los recién nacidos, en lugar de ratones adultos, es que los depósitos adiposos se están desarrollando activamente y son, por lo tanto, una rica fuente de preadipocitos proliferantes. Los preadipocitos primarios aislados mediante este protocolo se diferencian rápidamente al alcanzar la confluencia y se vuelven completamente maduros en 4-5 días, una ventana temporal que refleja con precisión la aparición de almohadillas de grasa desarrolladas en ratones recién nacidos. Los cultivos primarios preparados con esta estrategia pueden ampliarse y estudiarse con alta reproducibilidad, lo que los hace adecuados para pantallas genéticas y fenotípicas y permite el estudio de los fenotipos de adipocitos autónomos celulares de los modelos genéticos de ratón. Este protocolo ofrece un acercamiento simple, rápido, y barato para estudiar la complejidad del tejido adiposo in vitro.

Introducción

La obesidad resulta de un desequilibrio crónico entre la toma de energía y el gasto energético. A medida que se desarrolla la obesidad, los adipocitos blancos experimentan una expansión masiva en el tamaño celular que resulta en hipoxia en el microambiente, muerte celular, inflamación y resistencia a la insulina^1. Los adipocitos hipertrofiados disfuncionales no pueden almacenar adecuadamente el exceso de lípidos, que se acumulan en cambio en otros tejidos donde amortiguan la acción de la insulina^2,^3. Los agentes que mejoran la función del adipocyte y restauran el lípido normal que repiq....