Aquí, se describe un implante ortotópico singénico seguido de un procedimiento de amputación del osteosarcoma con metástasis pulmonar espontánea que se puede utilizar para la investigación preclínica de la biología de la metástasis y el desarrollo de nuevas terapias.
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Artículo de método
Un modelo de rata Sprague Dawley de osteosarcoma ortotópico singénico con amputación para controlar la tasa de metástasis
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Resumen
Resumen
El avance más reciente en el tratamiento del osteosarcoma (SG) ocurrió en la década de 1980, cuando se demostró que la quimioterapia multiagente mejora la supervivencia general en comparación con la cirugía sola. Para abordar este problema, el objetivo del estudio es refinar un modelo menos conocido de SG en ratas con un enfoque quirúrgico histológico, de imágenes, biológico, de implantación y amputación integral que prolongue la supervivencia. Utilizamos un modelo de rata singénica inmunocompetente y desanguínea de Sprague-Dawley (SD) con línea celular de SG UMR106 implantada (originada en una rata SD) con implantes de tumores tibiales ortotópicos en ratas macho y hembra de 3 semanas de edad para modelar la SG pediátrica. Encontramos que las ratas desarrollan tumores pulmonares primarios y metastásicos reproducibles, y que las amputaciones de extremidades a las 3 semanas después de la implantación reducen significativamente la incidencia de metástasis pulmonares y previenen muertes inesperadas. Histológicamente, los SG primarios y metastásicos en ratas fueron muy similares a los OS humanos. Utilizando métodos de inmunohistoquímica, el estudio muestra que los SG de rata están infiltrados con macrófagos y células T. Un estudio de expresión de proteínas de las células de la SG revela que estos tumores expresan quinasas de la familia ErbB. Dado que estas quinasas también están altamente expresadas en la mayoría de los SG humanos, este modelo de rata podría usarse para probar los inhibidores de la vía ErbB para la terapia.
Introducción
El osteosarcoma (SG) es el tumor óseo primario más común en niños, adolescentes y adultos jóvenes. El avance más reciente en el tratamiento de la SG ocurrió en la década de 1980 cuando se demostró que la quimioterapia multiagente mejora la supervivencia general en comparación con la cirugía sola1. La SG se desarrolla durante el crecimiento óseo rápido, que generalmente ocurre en huesos tubulares largos como el fémur, la tibia y el húmero. Se caracterizan por una apariencia osteolítica, osteoblástica o mixta con notable reacción perióstica2. La quimioterapia y la resección quirúrgica pueden mejorar el resultado para los p....
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Protocolo
Todos los procedimientos y experimentos con ratas se realizaron de acuerdo con los protocolos aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de Johns Hopkins.
1. El protocolo de cultivo celular UMR-106 de la línea celular SD rata OS
- Células de cultivo en DMEM, suplementadas con 10% (v/v) FBS, penicilina (10 U/mL)-estreptomicina (10 U/mL) a 37 °C en atmósfera humidificada de 5% de CO2. Realizar experimentos utilizando células con pasajes de 2-812.
2. Protocolo de inyección intratibial de células de LA SG
NOTA: Las ratas SD preñadas ....
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Resultados
Las ratas inmunocompetentes SD de raza se utilizan para estos estudios de SG, que ofrece un modelo animal con un sistema inmunológico intacto. Hemos utilizado la línea celular UMR106 de ATCC, desarrollada a partir de células que inicialmente se aislaron de un sistema operativo de una rata SD. Implantamos las células en ratas SD, proporcionando así un modelo singénico para la SG. Las células UMR106 se implantan en la tibia de ratas SD macho y hembra de 3 semanas de edad, simulando un modelo de SG pediátrica. Además, la im.......
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Discusión
Las ratas con implantes tibiales de SG desarrollan tumores medibles a las 3 semanas posteriores a la implantación. Si las extremidades con tumores se amputan 3 semanas después de la implantación, la incidencia de metástasis pulmonar se reduce significativamente. Los SG son tanto osteolíticos como osteoblásticos. Las ratas sin amputación desarrollan metástasis pulmonares que son múltiples y de tamaño variable, observadas por radiografía o en la necropsia a las 7 semanas después de la implantación. EGFR, ErbB2 y ErbB4 se e.......
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Divulgaciones
No hay divulgación para declarar.
Agradecimientos
Financiamiento de los NIH a través del Instituto Nacional del Cáncer, subvención # CA228582. Shun Ishiyama está recibiendo actualmente una subvención de Toray Medical Co., Ltd.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| AKT Cell Signaling TECHNOLOGY | 4685S | ||
| sutura absorbible | Ethicon | J214H | |
| β-actina | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-47778 | |
| β Anticuerpo 2-AR | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-569 | reemplazado por β 2-AR (E-3): sc-271322 |
| Bis– Tris geles | Thermo Fisher | NP0321PK2 | |
| Buprenorfina SR Lab | ZooPharm | IZ-70000-201908 | |
| Anticuerpo CD3 | Dako | #A0452 | |
| anticuerpo CD68 | eBioscience | #14-0688-82 | |
| Sustrato quimioluminiscente | cytiva | RPN2232 | |
| Película CL-Xposure | Thermo Fisher | 34089 | |
| Sistema de anestesia completo | EVETEQUIP | 922120 | |
| diaminobencidina | VECTOR LABORATORIES | SK-4100 | |
| Doxorrubicina | Actavis | NDC 45963-733-60 | |
| Anticuerpo EGFR | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-03 | reemplazado por EGFR (A-10): sc-373746 |
| Anticuerpo ERBB2 | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-284 | sustituido por Neu (3B5): sc-33684 |
| Anticuerpo ERBB4 | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-283 | sustituido por ErbB4 (C-7): sc-8050 |
| anticuerpo ERK | CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-514302 | |
| lubricante ocular | PHARMADERM | NDC 0462-0211-38 | |
| Jeringa Hamilton (100 µ L) | Hamilton | Modelo 1710 SN SYR | |
| anticuerpo secundario ligado a la peroxidasa de rábano picante | Cytiva | NA934 | |
| HRP kit de detección de polímeros | VECTOR LABORATORIES | MP-7401 | |
| HRP kit de detección de polímeros | VECTOR LABORATORIES | MP-7402 | |
| isoflurano | BUTLER SCHEIN | NDC 11695-6776-2 | |
| isoflurano vaporizador | EVETEQUIP | 911103 | |
| UMR-106 celda ATCC | CRL-1661 | ||
| Faxitron | de rayos X UltraFocus | ||
| Procesador de rayos X | Hope X-Ray Peoducts Inc | MicroMax Procesador de rayos X | Hope Los procesadores Hope ya no están disponibles en Estados Unidos |
| pinzas para heridas | BECTON DICKINSON | 427631 |
Referencias
- Link, M. P., et al. The effect of adjuvant chemotherapy on relapse-free survival in patients with osteosarcoma of the extremity. New England Journal of Medicine. 314 (25), 1600-1606 (1986).
- Bielack, S. S., et al.
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Reimpresiones y permisos
