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Artículo de método

Análisis Del Vasospasmo Cerebral En Un Modelo Murino De Hemorragia Subaracnoidea Con Ultrasonido Dúplex Transcraneal De Alta Frecuencia

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DOI:

10.3791/62186

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3 de junio de 2021

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

El objetivo de este manuscrito es presentar un método basado en la sonografía que permite la obtención de imágenes in vivo del flujo sanguíneo en las arterias cerebrales en ratones. Demostramos su uso para determinar los cambios en las velocidades del flujo de sangre asociadas al vasospasm en modelos murine de la hemorragia subaracoidea (SAH).

Resumen

El vasospasm cerebral que ocurre en las semanas después de la hemorragia subaracoidea, un tipo de movimiento hemorrágico, contribuye a la isquemia cerebral retrasada. Un problema encontrado en estudios experimentales usando los modelos murine de SAH es que los métodos para la supervisión in vivo del vasospasm cerebral en ratones están careciendo. Aquí, se demuestra la aplicación de ultrasonido de alta frecuencia para realizar exámenes de ecografía dúplex transcraneal en ratones. Usando el método, las arterias carótidas internas (AIC) podían ser identificadas. Las velocidades del flujo de sangre en el ICAs intracraneal fueron aceleradas perceptiblemente después de la inducción de SAH, mientras que las velocidades del flujo de sangre en el ICAs extracraneal seguían siendo bajas, indicando el vasospasm cerebral. En conclusión, el método demostrado aquí permite la supervisión in vivo funcional, no invasor del vasospasm cerebral en un modelo murine de SAH.

Introducción

La hemorragia subaracoidea espontánea (HAS) es una forma de accidente cerebrovascular hemorrágico causado principalmente por la ruptura de un aneurisma intracraneal1. El desenlace neurológico está influenciado principalmente por dos factores: la lesión cerebral precoz (EBI), causada por los efectos del sangrado y la isquemia cerebral global transitoria asociada, y la isquemia cerebral retardada (DCI), que ocurre durante las semanas posteriores al sangrado2,3. DCI fue divulgado para afectar al hasta 30% de pacientes de SAH2. La fisiopatología del DCI implica vasoe....

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Protocolo

Los experimentos con animales fueron aprobados por el comité responsable de cuidado de animales (Landesuntersuchungsamt Rheinland-Pfalz) y llevados a cabo de acuerdo con la Ley alemana de bienestar animal (TierSchG). Se siguieron todas las directrices internacionales, nacionales e institucionales aplicables para el cuidado y uso de animales. En este estudio, realizamos medidas de las velocidades del flujo de sangre de arterias intracraneales y extracraneales en ratones femeninos de C57BL/6N envejecidos 11-12 semanas con un peso corporal entre 19-21 g. Los ratones fueron sometidos a la inducción de SAH o a una cirugía simulada, que se ha descrito en detalle en otras pa....

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Resultados

En 6 ratones, en 3 cuyo SAH fue inducido usando el modelo endovascular de la perforación del filamento mientras que 3 obtuvieron cirugía falsa, las velocidades del flujo de sangre de la arteria carótida interna intracraneal (AIC) y del AIC extracraneal fueron determinadas un día antes de cirugía, y 1, 3, y 7 días después de la cirugía. Las mediciones se realizaron como parte de los exámenes ecocardiográficos de otro estudio bajo anestesia con isoflurano manteniendo la temperatura corporal a 37 °C19.

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Discusión

Al mejor de nuestro conocimiento, este estudio es el primer para presentar un protocolo para la supervisión del vasospasm cerebral en un modelo murine de SAH con ultrasonido a dos caras color-codificado transcranial de alta frecuencia. Mostramos que este método puede medir un aumento en las velocidades intracraneales del flujo sanguíneo después de la inducción de SAH en ratones. En medicina humana este fenómeno es bien conocido3,15. Varios estudios clínicos han m.......

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Divulgaciones

Los autores declaran que no hay intereses contrapuestos.

Agradecimientos

Los autores desean agradecer a Stefan Kindel la preparación de las ilustraciones del vídeo. PW, MM y SHK recibieron el apoyo del Ministerio Federal alemán de Educación e Investigación (BMBF 01EO1503). El trabajo fue apoyado por una Gran Beca de Instrumentación de la Fundación Alemana de Investigación (DFG INST 371/47-1 FUGG). MM recibió el apoyo de una subvención de la Else Kröner-Fresenius-Stiftung (2020_EKEA.144).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Crema depilatoria BaleaBalea; AlemaniaASIN B0759XM39Vcrema depilatoria
C57BL/6N ratonesJanvier; Saint-Berthevin Cedex, Francian.a.mice
CorneregelBausch& Lomb; Rochester, NY, EE. UUREFungüento para los ojos,
bastoncillos de algodónHecht Assistent; Sondenheim vor der Rö hn, AlemaniaREF 44302010bastoncillos de algodón
Ecco-XS navaja de afeitarTondeo; Soligen, AlemaniaDE 28693396maquinilla de afeitar
Electrode cremaGE; Boston, MA, EE. UUREFpasta conductora
Placa calefactoraMedax; Kiel, Alemania2005-205-01
IsofluranoAbvie; Wiesbaden, Alemanian.a.anestésicovolátil
LeukofixBSN medical; Hamburgo, AlemaniaREF 02137-00
cinta Brazo mecánico + micromanipuladorVisualSonics; FujiFilm, Toronto, CAN/P 11277
Tejidos MicrobacPaul Hartmann AG; Hamburgo, AlemaniaREF 981387tejidos antimicrobianos
MZ400, transductor de matriz lineal de 38 MHzVisualSonics; transductor de ultrasonido FujiFilm, Toronto, CAREF 51068-30
SonosidASID Bonz GmbH; Herrenberg, AlemaniaREF 782010gel
ultrasonido Plataforma de ultrasonido con placa calefactora y registro de ECGVisualSonics; FujiFilm, Toronto, CAN/P 11179
UniVet-PortaGroppler; Oberperasberg, AlemaniaS/N BKGM0437vaporizador de isoflurano
Vevo3100VisualSonics; FujiFilm, Toronto, CAREF 51073-45dispositivo de ultrasonografía
VevoLab softwareVisualSonics; FujiFilm, Toronto, CAn.a.softwarede evaluación
. 81552983 lubricante . 21708318 de

Referencias

  1. Macdonald, R. L., Schweizer, T. A. Spontaneous subarachnoid haemorrhage. Lancet. 389 (10069), 655-666 (2017).
  2. Macdonald, R. L. Delayed neurological deterioration after subarachnoid haemorrhage. Nature Reviews Neurology. 10 (1), 44-58 (2014).
  3. Francoeur, C. L., Mayer, S. A....

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Modelo murino de HSAultrasonido de alta frecuenciasonografía dúplex transcranealvelocidad del flujo sanguíneoarteria carótida internaflujo sanguíneo intracranealmodo Doppler continuomonitoreo in vivo