Diferentes modelos de oclusión de la arteria cerebral media (MCAo) se utilizan en la investigación experimental del accidente cerebrovascular. Aquí, se describe un modelo experimental de accidente cerebrovascular de MCAo transitorio a través de la arteria carótida externa (ECA), que tiene como objetivo imitar el accidente cerebrovascular humano, en el que el trombo cerebrovascular se elimina debido a la lisis o terapia espontánea del coágulo.
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Artículo de método
Modelado del accidente cerebrovascular en ratones: oclusión transitoria de la arteria cerebral media a través de la arteria carótida externa
En este artículo
Resumen
Resumen
El accidente cerebrovascular es la tercera causa más común de mortalidad y la principal causa de discapacidad adquirida en adultos en los países desarrollados. Hasta la fecha, las opciones terapéuticas se limitan a una pequeña proporción de pacientes con accidente cerebrovascular dentro de las primeras horas después del accidente cerebrovascular. Se están investigando ampliamente nuevas estrategias terapéuticas, especialmente para prolongar la ventana de tiempo terapéutico. Estas investigaciones actuales incluyen el estudio de importantes vías fisiopatológicas después del accidente cerebrovascular, como la inflamación posterior al accidente cerebrovascular, la angiogénesis, la plasticidad neuronal y la regeneración. Durante la última década, ha habido una creciente preocupación por la escasa reproducibilidad de los resultados experimentales y los hallazgos científicos entre los grupos de investigación independientes. Para superar la llamada "crisis de replicación", se necesitan urgentemente modelos estandarizados detallados para todos los procedimientos. Como un esfuerzo dentro del consorcio de investigación "ImmunoStroke" (https://immunostroke.de/), se propone un modelo de ratón estandarizado de oclusión transitoria de la arteria cerebral media (MCAo). Este modelo permite la restauración completa del flujo sanguíneo tras la eliminación del filamento, simulando la lisis de coágulos terapéutica o espontánea que se produce en una gran proporción de accidentes cerebrovasculares humanos. El procedimiento quirúrgico de este modelo de accidente cerebrovascular de "filamento" y las herramientas para su análisis funcional se muestran en el video adjunto.
Introducción
El accidente cerebrovascular es una de las causas más comunes de muerte y discapacidad en todo el mundo. Aunque hay principalmente dos formas distintas de accidente cerebrovascular, isquémico y hemorrágico, el 80-85% de todos los casos de accidente cerebrovascular son isquémicos1. Actualmente, solo hay dos tratamientos disponibles para pacientes con accidente cerebrovascular isquémico: tratamiento farmacológico con activador tisular recombinante del plasminógeno (rtPA) o trombectomía mecánica. Sin embargo, debido a la estrecha ventana de tiempo terapéutico y los múltiples criterios de exclusión, solo un número selecto de pacientes puede benefic....
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Protocolo
Los experimentos reportados en este video se llevaron a cabo siguiendo las pautas nacionales para el uso de animales de experimentación, y los protocolos fueron aprobados por los comités gubernamentales alemanes (Regierung von Oberbayern, Munich, Alemania). Se utilizaron ratones machos C57Bl/6J de diez semanas de edad y se alojaron a temperatura controlada (22 ± 2 °C), con un período de ciclo de luz-oscuridad de 12 h y acceso a alimentos granulados y agua ad libitum.
1. Preparación del material y los instrumentos
- Conecte la manta térmica para mantener la temperatura del área de operación y la temperatura corporal del rató....
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Resultados
El modelo aquí descrito es una modificación del modelo de trazo de "filamento" comúnmente utilizado, que consiste en introducir un filamento recubierto de silicio a través del ECA para bloquear transitoriamente el origen del MCA(Figura 1). Después de retirar el filamento, solo el flujo sanguíneo en la ECA se detiene permanentemente, lo que permite la recanalización completa del CCA y el ICA. Esto permite una adecuada reperfusión del cerebro (Figura 2), similar a.......
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Discusión
El presente protocolo describe un modelo experimental de accidente cerebrovascular basado en el acuerdo de consenso de un consorcio de investigación multicéntrico alemán ("ImmunoStroke") para establecer un modelo MCAo transitorio estandarizado. El modelo MCAo transitorio establecido mediante la introducción de un filamento recubierto de silicio a través del ECA hasta el origen del MCA es uno de los modelos de ictus más utilizados para lograr la reperfusión arterial tras un periodo de oclusión delimitado. Por lo tanto, es.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen intereses contrapuestos que revelar.
Agradecimientos
Agradecemos a todos nuestros socios colaboradores de los Consorcios ImmunoStroke (FOR 2879, From immune cells to stroke recovery) por sus sugerencias y discusiones. Este trabajo fue financiado por la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, Fundación Alemana de Investigación) en el marco de la Estrategia de Excelencia de Alemania en el marco del Clúster de Munich para la Neurología de Sistemas (EXC 2145 SyNergy - ID 390857198) y bajo las subvenciones LI-2534/6-1, LI-2534/7-1 y LL-112/1-1.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 45° rampa | H& S Kunststofftechnik | altura: 18 cm | |
| 5/0 amenaza | Pearsalls | 10C103000 | |
| 5 mL Jeringa | Braun | ||
| Ácido Acético | Sigma Ciencias de la Vida 695092 | ||
| Sistema de anestesia para isoflurano | Drager | ||
| Bepanthen pomada | Bayer | ||
| C57Bl/6J ratones | Charles Abrazadera | de 000664 | |
| FST | 12500-12 | ||
| Clip | FST | 18055-04 | |
| Soporte de clip | FST | 18057-14 | |
| Cotons | NOBA Verbondmitel Danz | 974116 | |
| Cresyl violeta | Sigma Life Science | C5042-10G | |
| Cryostat | Thermo Scientific CryoStarNX70 | ||
| Etanol 70% | CLN Chemikalien Laborbedorf | 521005 | |
| Etanol 96% | CLN Chemikalien Laborbedorf | 522078 | |
| Etanol 99% | CLN Chemikalien Laborbedorf | ETO-5000-99-1 | |
| Filamentos | Doccol | 602112PK5Re | |
| Pinza angular fina 45 | FST | 11251-35 | |
| Pinza fina | FST | 11252-23 | |
| Tijeras finas | FST | 14094-11 | |
| Pegamento | Orechseln | BSI-112 | |
| Pegamento endurecedor | Drechseln & Mehr | BSI-151 | |
| Manta calefactora | FHC DC Temperature Controller | ||
| Isoflurano | Abbot | B506 | |
| Isopentane | Fluka | 59070 | |
| Ketamina | Inresa Arzneimittel GmbH | ||
| Laser Doppler | Perimed | PF 5010 LDPM, Periflux System 5000 | |
| Laser Doppler sonda | Perimed | 91-00123 | |
| Solución salina tamponada con fosfato pH: 7.4 | Apotheke Innestadt Uni München | P32799 | |
| Cámara de recuperación | Mediheat | ||
| Roti-Histokit medio de montaje | Roth | 6638.1 | |
| Solución salina | Braun | 131321 | |
| Scalpel | Feather | 02.001.30.011 | |
| Filamentos recubiertos de silicona | Doccol | 602112PK5Re | |
| Microscopio estereoscópico | Leica | M80 | |
| Superfrost Plus | Portaobjetos Thermo Scientific | J1800AMNZ | |
| Vannas Tijeras de muelle | FST | 15000-00 | |
| Xilacina | Albrecht |
Referencias
- Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. Stroke. Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).
- O'Collins, V. E., et al. 1,026 experimental treatments in acute stroke. Annals of Neurology. 59 (3), 467-477 (2006).
- Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J.
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Reimpresiones y permisos
