Method Article

Muestreo de tejido adiposo subcutáneo humano mediante una técnica de mini-liposucción

DOI:

10.3791/62635

⸱

September 27th, 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Physiology, Exercise and Nutrition Research Group, University of Stirling, 2Department of Diabetes and Endocrinology, Forth Valley Royal Hospital

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

El manuscrito y el video asociado demuestran una técnica de biopsia percutánea para obtener muestras de tejido adiposo subcutáneo de las áreas que rodean el ombligo. Este método es una forma eficiente y de bajo riesgo de investigar una serie de parámetros (por ejemplo, expresión génica o proteica, actividad enzimática, contenido de lípidos) dentro del tejido adiposo.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Los estudios sobre el tejido adiposo son útiles para comprender las afecciones metabólicas y de otro tipo. El tejido adiposo subcutáneo humano es accesible. Con la capacitación adecuada y el estricto cumplimiento de la técnica aséptica, los investigadores pueden obtener muestras adiposas subcutáneas de manera segura y eficiente en un entorno no clínico. Después de la administración de anestesia local lateral al ombligo, se inserta una aguja de 14 G conectada a una jeringa de 5 o 10 ml a través de la piel hasta el tejido subcutáneo. Bajo succión, la jeringa se mueve en un movimiento alternativo de corte para aislar fragmentos de tejido adiposo. Retirar el émbolo es suficiente para asegurar que los fragmentos de tejido adiposo se aspiren a través de la aguja en la jeringa. Una sola biopsia puede recolectar aproximadamente 200 mg de tejido. Esta técnica de biopsia es muy segura tanto para los participantes como para el personal investigador. Después de la biopsia, los participantes pueden reanudar la mayoría de las actividades cotidianas, aunque deben evitar nadar y actividades demasiado extenuantes durante 48 h para evitar el sangrado excesivo. Los participantes pueden someterse de forma segura a 2 biopsias en un solo día, lo que significa que la técnica se puede aplicar en estudios de intervención aguda antes-después.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

El tejido adiposo puede proporcionar información útil sobre la función metabólica de los seres humanos. El tejido adiposo subcutáneo humano es fácilmente accesible. Una técnica para la extracción subcutánea de tejido adiposo fue descrita por primera vez a mediados de los años 801; Desde entonces, el protocolo inicial se ha mejorado para aumentar el rendimiento y mejorar la tolerabilidad de los participantes del estudio. El tejido adiposo subcutáneo se puede obtener de numerosos sitios, más comúnmente de los glúteos1 y el área abdominal2. Las muestras de estos últimos pueden ser más deseables, ya que proporcionan información más valiosa en contextos relacionados con enfermedades metabólicas3.

La biopsia subcutánea de tejido adiposo utilizando el método de mini-liposucción se puede realizar de manera segura y eficiente en un entorno no clínico. Después de la capacitación adecuada por parte de un médico certificado por la junta y utilizando una técnica aséptica estricta, los investigadores pueden realizar rutinariamente estas biopsias con un riesgo mínimo tanto para el participante como para los investigadores. El equipo de biopsia debe estar formado por al menos 2 personas: la persona que realizará la biopsia y un asistente.

La persona responsable de la biopsia tiene la tarea de confirmar la identidad del participante, verificar que el participante pueda someterse al procedimiento de manera segura (consulte los pasos del protocolo 2.1-2.4 a continuación), garantizar que el participante se sienta cómodo durante todo el procedimiento, garantizar que la técnica estéril se mantenga durante todo el procedimiento, llevar a cabo el procedimiento y proporcionar al participante procedimientos verbales y escritos de cuidado posterior. La función del asistente es manipular y procesar rápidamente el tejido adiposo obtenido para su posterior análisis y/o almacenamiento. El asistente también ayuda al ser las "manos no estériles" y garantizar que el participante esté a gusto durante todo el procedimiento. El propósito de este video y documento es describir el procedimiento de biopsia paso a paso para obtener de manera segura el tejido adiposo subcutáneo del área abdominal.

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Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NOTA: El Comité de Investigación Clínica o Invasiva del NHS de la Universidad de Stirling aprobó el procedimiento de biopsia que se describe a continuación. Todos los estudios de investigación que utilicen este procedimiento deben ser aprobados por el comité de ética independiente apropiado. El tomador de la biopsia debe haber completado la capacitación formal en la técnica descrita de acuerdo con los requisitos de su institución. Por lo general, esto implica observar una demostración de la técnica de biopsia de tejido adiposo descrita por un médico certificado, seguida de una práctica supervisada. Una vez que el aprendiz haya realizado 10 biopsias de tejido adiposo de práctica en sujetos voluntarios bajo supervisión, será examinado por un médico certificado por la junta para garantizar un buen conocimiento y práctica del procedimiento. Luego, el médico certificado por la junta proporciona al individuo un formulario de examen firmado.

1. Preparación de la sala de laboratorio

  1. Asegúrese de que el laboratorio tenga una habitación privada adecuada con superficies limpias y limpiables, no porosas y una cama limpia y cómoda (preferiblemente no porosa) en la que el participante pueda acostarse en posición supina. Limpie todas las superficies requeridas para el procedimiento de biopsia con aerosol de etanol al 70% y limpie las toallas de papel. Proporcione almohadas o cojines limpios para apoyar al participante si es necesario.
  2. Mantenga los contenedores de eliminación de objetos punzantes apropiados y las bolsas de desechos de riesgo biológico al alcance del área donde se realiza la biopsia y al alcance de la persona que realiza la biopsia.
  3. Prepare el equipo requerido para el procedimiento y configúrelo en un carro médico general recién limpiado antes de que el participante llegue al laboratorio (Figura 1). Para obtener una lista completa de los consumibles necesarios, consulte la Tabla de materiales.

2. Preparación de los participantes

  1. Asegurar que todos los participantes den su consentimiento informado por escrito antes de someterse al procedimiento de acuerdo con los protocolos requeridos por el comité de ética independiente de la institución. Además, pida a los participantes que completen un cuestionario escrito para asegurarse de que no son alérgicos a ningún material utilizado en el procedimiento (a saber, níquel, cromo, anestésico local, yodo, mariscos y tiritas).
  2. Confirme la identidad del participante. Asegúrese de que el participante entienda el procedimiento que se llevará a cabo y los posibles efectos secundarios, incluidos hematomas, dolor e infección (Tabla 1). Reunir el consentimiento verbal además del consentimiento informado por escrito obtenido previamente.
  3. Describa al participante cómo se llevará a cabo el procedimiento, con énfasis en cómo se sentirá la administración del anestésico y la biopsia en sí. Asegúrese de que el participante se sienta cómodo con el procedimiento.
    NOTA: La anestesia subcutánea local producirá una sensación de picadura, similar a una picadura de abeja de corta duración. Muchos participantes reportan la administración de anestesia como la parte más incómoda de la técnica. Una vez que el anestésico ha hecho efecto, el participante no debe sentir más que una ligera sensación de tirón durante la biopsia.
  4. Asegúrese de que el participante no tenga alergias al anestésico local (específicamente del tipo aminoamida, si usa lidocaína o similar), ciertos metales (níquel y cromo) y mariscos (si usa soluciones a base de yodo). Además, asegúrese de que los participantes no estén tomando ningún tipo de medicamento anticoagulante.
  5. Proporcione al participante la oportunidad de ir y vaciar su vejiga si es necesario, para asegurarse de que no tenga que interrumpir el procedimiento o experimentar molestias indebidas en el paso 4.1.

3. Procedimiento de biopsia - instrucciones para el tomador de biopsia

  1. Una vez que el participante esté acostado en posición supina, identifique el sitio de la biopsia aproximadamente 5-10 cm lateral al ombligo.
    NOTA: Si el participante se va a someter a múltiples biopsias el mismo día, identifique los sitios de biopsia en lados opuestos del ombligo para cada biopsia. Esto asegurará la máxima distancia entre cada sitio de biopsia.
  2. Lávese las manos con jabón y agua tibia de acuerdo con las pautas médicas estándar4.
  3. Coloque la hoja estéril en el carro o área de trabajo limpia, teniendo cuidado de tocar solo los bordes exteriores de la hoja.
  4. Póngase guantes quirúrgicos estériles utilizando la técnica aséptica adecuada. Haga que el asistente abra el resto del equipo de tal manera que caiga sobre la lámina estéril preparada sin tocar / contaminar el equipo. Asegúrese de que el asistente tenga cuidado de no tocar los artículos al retirar las herramientas de sus envolturas estériles.
  5. Indique al asistente que dispense una pequeña cantidad de solución a base de yodo en una gasa estéril (sin sobresaturar la gasa) en la superficie de trabajo.
  6. Esterilice aproximadamente 5-10 cm2 alrededor del sitio de biopsia elegido usando la gasa estéril y la solución a base de yodo. Asegúrese de que la piel se limpie en un movimiento en espiral que se mueva hacia afuera desde el sitio de biopsia propuesto. Repita el procedimiento de limpieza de la piel dos veces. Elimine el exceso de líquido (p. ej., escurriendo el área estéril) limpiando con una gasa estéril fresca.
  7. Junto con el asistente, confirme verbalmente el contenido del vial de anestesia local (lidocaína al 2% en este protocolo) y que está dentro de su fecha de caducidad. Indique al asistente que sostenga el vial abierto boca abajo y extraiga 5 ml de anestésico local en una jeringa, utilizando una aguja de 21 G. Deseche la aguja en el contenedor de objetos punzantes y asegúrese de que la jeringa esté libre de burbujas de aire.
  8. Aplique una aguja de 26 G a la jeringa y expulse cualquier burbuja de aire. Pellizque suavemente la piel abdominal y el tejido adiposo, alejándolo de la pared abdominal. Luego, inserte la aguja horizontalmente en el tejido subcutáneo en un ángulo no mayor de 10 ° con respecto a la superficie de la piel.
    1. Extraiga el émbolo de la jeringa 0,5 ml adicionales (para asegurarse de que la aguja no esté en un vaso sanguíneo). Si aparece sangre en la jeringa, retire y vuelva a insertar la aguja en un ángulo diferente.
    2. Elevar una ampolla de 2-4 mm de diámetro para anestesiar el área de inserción.
    3. Introduzca la aguja en el tejido subcutáneo y administre ~1 ml de lidocaína en forma de abanico (Figura 2), teniendo cuidado de retirar el émbolo cada vez antes de inyectar el anestésico.
    4. Retire y deseche la aguja de 26 G, aplique una aguja de 21 G a la jeringa, expulse cualquier burbuja de aire y administre los ~ 4 ml restantes de lidocaína en un patrón en forma de abanico (Figura 2), teniendo cuidado de retirar el émbolo cada vez antes de inyectar el anestésico.
  9. Espere aproximadamente 5 minutos para que el anestésico local haga efecto. Use un bisturí estéril para pinchar suavemente el área de la biopsia para i) asegurarse de que el anestésico local haya surtido efecto y ii) identificar los límites del área anestesiada. Si es necesario, espere uno o dos minutos adicionales y vuelva a evaluar.
  10. Una vez satisfecho de que el anestésico local está funcionando, pellizque suavemente la piel y el tejido adiposo (como en el paso 3.8) y use un bisturí estéril para hacer una pequeña punción de 1-2 mm en la piel.
    NOTA: Esto solo necesita ser lo suficientemente grande como para facilitar la entrada de la aguja de 14 G y debe ser lo suficientemente pequeño como para que no se requiera sutura para cerrarla. Es común que se produzca un sangrado a partir de este punto, que se puede controlar con un trozo de gasa estéril.
  11. Primero, aplique una aguja de 14 G a una jeringa de 5 o 10 ml. Luego, mientras pellizca suavemente la piel y el tejido adiposo, inserte gradualmente la aguja a través de la punción en el tejido adiposo aproximadamente en el centro del área anestesiada y en un ángulo no mayor de 10 ° con respecto a la superficie de la piel.
    NOTA: Para todos los casos de avance de la aguja en el paso 3.11, se debe mantener un ángulo de jeringa no superior a 10°.
    1. Aplique succión retirando el émbolo hasta aproximadamente la marca de 2,5 ml. Tome la biopsia moviendo la aguja en un movimiento rápido hacia atrás y hacia adelante para cortar fragmentos de tejido adiposo. Después de aproximadamente 30 s, gire la aguja y la jeringa 90° y repita este procedimiento para romper los fragmentos de tejido adiposo, que luego son aspirados en la jeringa por la succión.
      NOTA: Se pueden usar otros tamaños de jeringa. Es esencial que el investigador seleccione un tamaño de jeringa que permita tanto un buen agarre de la jeringa como mantener cómodamente la retracción del émbolo para el mantenimiento del vacío. Hay jeringas de bloqueo disponibles que mantienen el vacío, lo que puede mejorar el control de la aguja y reducir la dificultad percibida para el tomador de biopsia 5.
    2. Después de aproximadamente 45-60 s del paso 3.11.1, retire la aguja y vacíe el contenido de la jeringa en una capa de gasa que cubra un bote de pesaje. Asegúrese de que la luz de la aguja esté hacia abajo para evitar posibles salpicaduras de sangre.
    3. Repita los pasos 3.11.1 y 3.11.2 para un máximo de 3 veces. Compruebe que el participante está contento de proceder antes de cada repetición del procedimiento anterior.
    4. Mientras realiza los pasos 3.11.1 y 3.11.2, indique al asistente que procese y prepare las muestras para su análisis/almacenamiento (ver sección 5).

4. Procedimiento posterior a la biopsia

  1. Una vez que se haya obtenido una muestra satisfactoria (es decir, ~ 200 mg) de tejido adiposo, coloque 1-2 capas de gasa estéril sobre la herida punzante, luego coloque una bolsa de hielo sobre ellas y aplique una presión firme durante aproximadamente 10 minutos para inducir la hemostasia.
  2. Cuando se haya producido hemostasia, limpie cualquier solución a base de yodo / sangre seca con una gasa estéril y aplique un apósito adhesivo para heridas con almohadilla absorbente en el sitio. Verifique que el participante se sienta bien y proporcione instrucciones verbales y escritas sobre el cuidado posterior del sitio de la biopsia.
    1. Haga hincapié en que los participantes probablemente exhibirán algunos moretones durante los próximos días. Infórmeles que esto puede ser sustancial, aunque se minimiza con la bolsa de hielo en el paso 4.1 y se resolverá sin efectos duraderos.
    2. Recomendar que si los participantes sienten alguna molestia / dolor una vez que el efecto de la anestesia haya desaparecido, tomen analgésicos como paracetamol siguiendo las instrucciones del paquete, pero se abstengan de tomar analgésicos que tengan actividades anticoagulantes (por ejemplo, ibuprofeno o aspirina).
    3. Explique que la hinchazón, el enrojecimiento o la secreción del sitio de la biopsia son indicaciones de infección. En el improbable caso de que se presenten estos signos o síntomas, indique al participante que busque urgentemente el consejo médico de un médico o de la unidad local de Accidentes y Emergencias. Informe al participante que si busca consejo médico, también debe notificar al equipo de investigación.
      NOTA: Como personal de investigación, ni el tomador de la biopsia ni el asistente pueden proporcionar asesoramiento o tratamiento médico; Sin embargo, es importante que el equipo de investigación conozca y registre todos los casos de complicaciones resultantes del procedimiento de biopsia.
    4. Recomiende que los participantes eviten nadar o realizar actividades demasiado extenuantes durante 48 h hasta que el sitio de la incisión se haya cerrado.
  3. Retire cualquier objeto punzante usado y materiales contaminados en objetos punzantes designados y / o contenedores de desechos clínicos.
  4. Limpie todas las superficies utilizadas en el procedimiento de biopsia con aerosol de etanol al 70% y limpie las toallas de papel. Coloque los artículos desechables y no desechables de ropa de cama en bolsas clínicas apropiadas para su eliminación o limpieza, respectivamente.

5. Procesamiento de muestras - instrucciones para el asistente

  1. Use pinzas estériles y solución salina al 0,9% para enjuagar la muestra de tejido adiposo para eliminar contaminantes visibles (es decir, sangre, vasculatura). Luego, pese las muestras de tejido adiposo utilizando balanzas digitales. Divida el tejido en trozos del tamaño adecuado para el análisis posterior y colóquelos en tubos de almacenamiento apropiados utilizando pinzas estériles. Sumergir los tubos que contienen las biopsias de tejido adiposo en nitrógeno líquido a -190 °C para congelar rápidamente hasta que las muestras se almacenen a -80 °C.
    NOTA: El asistente debe completar el procesamiento de la muestra lo más rápido posible, generalmente dentro de los 3 minutos posteriores a la aspiración de la muestra, para minimizar la posible degradación de la muestra.

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

El procedimiento de biopsia de tejido adiposo descrito es una técnica eficiente y de bajo riesgo para que los investigadores obtengan muestras de tejido adiposo subcutáneo de voluntarios humanos. Se realizaron 39 biopsias de tejido adiposo subcutáneo mediante el procedimiento descrito en 11 mujeres sanas de peso normal (edad, 27,4 ± 3,3 años; índice de masa corporal (IMC), 22,6 ± 1,5kg.m2). Todos los participantes asistieron al laboratorio entre las 07:00 y las 10:00 después de un período de ayuno de 8-12 h. E...

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Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

El protocolo descrito y el video asociado proporcionan una visión general paso a paso de una técnica de mini-liposucción para obtener muestras de tejido adiposo subcutáneo del área abdominal. Este grupo de investigación ha realizado un total de 124 biopsias en el transcurso de 19 meses sin efectos adversos en los participantes. El procedimiento es seguro y se asocia con un riesgo mínimo para los participantes o el equipo de biopsia, siempre que se sigan las medidas de seguridad descritas. La técnica aséptica (incluyendo ...

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Los autores no tienen conflictos de intereses que declarar.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Los autores no tienen fondos para declarar.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Artículo: Aguja de 14 G
14 G x 3 1/8" 210 mm x 80 mm		B Braun4665473Por biopsia: 1
Artículo: 21 G aguja
21 G x 1 1/2" 0.8 mm x 38 mm		TerumoAN*2138R1Por biopsia: 2
Artículo: 26 G  aguja
26 G x 1/2" aguja de microlanza 0,45 mm x 13 mm		BD303800Por biopsia: 2
Artículo: 5 mL jeringa
5 mL luer		DB plastipak302187Por biopsia: 2
Artículo: Apósito adhesivo para heridas
Opsite Apósito postoperatorio 9.5 x 8.5		Smith & Sobrino6600709Por biopsia: 1
Artículo: Bisturí estéril desechable
Bisturí desechable Hoja estéril n.º 10		Swann Morton/0501Por biopsia: 1
Artículo: Bolsa de hielo
BlueDot Paquete frío/calor reutilizable 26,5 cm x 13,0 cm		NuCareF711Por biopsia: 1
Artículo: Antiséptico a base de yodo
Solución antiséptica Videne		3030440Per biopsia: q.s
Artículo: Lidocaína 2% sin epinefrina
Lidocaína 2% inyectable 5 mL		B Braun3558553Por biopsia: 5 mL
Artículo: Guantes no estériles
Guantes de nitrilo sin polvo sensibles		Starguard StarguardSG-N-SPor biopsia:
par Artículo: Cloruro de sodio 0,9%
Cloruro de sodio 0,9% con infusión intravenosa BP		BBraunS8004-5384Por biopsia: Q.D.
Artículo: Solución de estabilización*
Solución de estabilización RNAlater		ThermoFisher ScientificAM7020Por biopsia: c.s.º
Artículo: Pinzas estériles
Pinzas estériles		RocialleRML109-006Por biopsia:
1 Artículo: Hisopos de gasa estériles
Hisopos no tejidos estériles 7,5 x 7,5 cm		Prestige1860Por biopsia: 5
Artículo: Guantes estériles
Guantes médicos estériles sin polvo de vinilo suave Prestige		S: P4301
M:P3302
L:P3301		Por biopsia:
par Artículo: Tubos de microcentrífuga estériles
Tubos de microcentrífuga estériles de 1,5 mL		StarLabI1415-5510Por biopsia: q.s
Artículo: Hoja estéril
Papel blanco normal 90 x 90 cm		RocialleRML 126-216Por biopsia: 1
Artículo: Barco de pesaje
Barcos de pesaje en forma de diamante		Heathrow ScientificHS1427CPor biopsia: 1
* denota materiales
opcionales

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
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