Clasificación celular activada por fluorescencia-tejido tratado con radioligando (FACS-RTT) para determinar el origen celular de la señal radiactiva

Quentin Amossé; Kelly Ceyzériat; Stergios Tsartsalis; Benjamin B. Tournier; Philippe Millet

doi:10.3791/62883

Artículo de método

Clasificación celular activada por fluorescencia-tejido tratado con radioligando (FACS-RTT) para determinar el origen celular de la señal radiactiva

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DOI:

10.3791/62883

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10 de septiembre de 2021

Quentin Amossé¹^,² , Kelly Ceyzériat¹^,³^,⁴ , Stergios Tsartsalis¹^,⁵ , Benjamin B. Tournier¹^,² , Philippe Millet¹^,²

¹Division of Adult Psychiatry, Department of Psychiatry, University Hospitals of Geneva, ²Department of Psychiatry, University of Geneva, ³Division of Nuclear medicine and Molecular Imaging, University Hospitals of Geneva, ⁴Division of Radiation Oncology, Department of Oncology, University Hospitals of Geneva, ⁵Department of Brain Sciences, Faculty of Medicine, Imperial College London

En este artículo

Resumen

Fluorescence-Activated Cell Sorting-Radioligand Treated Tissue (FACS-RTT) es una poderosa herramienta para estudiar el papel de la proteína translocadora de 18 kDa o la expresión del receptor_{serotonina 5HT 2A} en la enfermedad de Alzheimer a escala celular. Este protocolo describe la aplicación ex-vivo de FACS-RTT en el modelo de rata TgF344-AD.

Resumen

Las células gliales probablemente tienen una implicación considerable en la fisiopatología de los trastornos neurodegenerativos, como la enfermedad de Alzheimer (EA). Sus alteraciones están quizás asociadas a un estado proinflamatorio. La cepa de rata TgF344-AD ha sido diseñada para expresar los genes humanos APP y PS1_ΔE9humanos, codificando para las proteínas amiloides Aβ-40 y Aβ-42 y muestra patología amiloide y déficits cognitivos con el envejecimiento. El modelo de rata TgF344-AD se utiliza en este estudio para evaluar el origen celular de la unión a la proteína translocadora de 18 kDa (TSPO, un marcador de activación de células gliales) y los niveles del receptor de serotonina 5HT_2A (5HT_2AR) que posiblemente se interrumpen en la EA. La técnica que aquí se presenta es Fluorescence-Activated Cell Sorting to Radioligand Treated Tissue (FACS-RTT), una técnica cuantitativa específica de tipo celular complementaria a las técnicas in vivo de PET o SPECT o autorradiografía ex vivo/in vitro . Cuantifica el mismo trazador radiomarcado utilizado anteriormente para la obtención de imágenes, utilizando un contador de γ después de la clasificación celular por citometría. Esto permite determinar el origen celular de la proteína radiomarcada con alta especificidad y sensibilidad celular. Por ejemplo, los estudios con FACS-RTT mostraron que (i) el aumento en la unión a TSPO se asoció con microglia en un modelo de rata de neuroinflamación inducida por lipopolisacáridos (LPS), (ii) un aumento en la unión a TSPO a los 12 y 18 meses se asoció con astrocitos primero, y luego microglia en las ratas TgF344-AD en comparación con ratas de tipo salvaje (WT), y (iii) la densidad estriatal de 5HT_2A R disminuye en los astrocitos a los 18 meses en el mismo modelo de EA de rata. Curiosamente, esta técnica se puede extender a prácticamente todos los radiotrazadores.

Introducción

Las enfermedades neurodegenerativas, como la enfermedad de Alzheimer (EA), se caracterizan por una pérdida neuronal asociada con un aumento de los síntomas. La EA, la causa más común de demencia, que representa el 60%-70% de los casos, afecta a alrededor de 50 millones de personas en todo el mundo¹. A nivel neuropatológico, las dos características principales de la EA son la acumulación de placas extracelulares de β amiloide (Aβ) y ovillos neurofibrilares intracelulares de Tau. Las alteraciones de las células gliales también se han asociado con la EA² y la posible interrupción de varios sistemas de neurotransmisores