Aquí, describimos un protocolo optimizado para la oclusión de la vena retiniana utilizando rosa de bengala y un sistema de microscopio de imágenes de retina guiado por láser con recomendaciones para maximizar su reproducibilidad en cepas modificadas genéticamente.
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Artículo de método
Optimización del modelo de ratón de oclusión de venas retinianas para limitar la variabilidad
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Resumen
Resumen
Los modelos de ratón de oclusión de la vena retiniana (OVR) se utilizan a menudo en oftalmología para estudiar la lesión hipóxico-isquémica en la retina neural. En este informe, se proporciona un método detallado que señala los pasos críticos con recomendaciones de optimización para lograr tasas de oclusión consistentemente exitosas en diferentes cepas de ratones modificados genéticamente. El modelo de ratón RVO consiste principalmente en la administración intravenosa de un colorante fotosensibilizador seguido de fotocoagulación con láser utilizando un microscopio de imágenes de retina conectado a un láser guiado oftálmico. Se identificaron tres variables como determinantes de la consistencia de la oclusión. Al ajustar el tiempo de espera después de la administración de rosa de bengala y equilibrar la línea de base y la salida experimental del láser, la variabilidad entre los experimentos puede ser limitada y se puede lograr una mayor tasa de éxito de oclusiones. Este método se puede utilizar para estudiar enfermedades de la retina que se caracterizan por edema retiniano y lesión hipóxico-isquémica. Además, como este modelo induce lesión vascular, también se puede aplicar para estudiar la neurovasculatura, la muerte neuronal y la inflamación.
Introducción
La oclusión de la vena retiniana (OVR) es una enfermedad vascular retiniana común que afectó a aproximadamente 28 millones de personas en todo el mundo en 20151. La OVR conduce a la disminución y pérdida de la visión en adultos en edad laboral y ancianos, lo que representa una enfermedad continua que amenaza la vista y que se estima que aumentará durante la próxima década. Algunas de las distintas patologías de la OVR incluyen lesión hipóxico-isquémica, edema retiniano, inflamación y pérdida neuronal2. Actualmente, la primera línea de tratamiento para este trastorno es a través de la administración de inhibidores del fac....
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Protocolo
Este protocolo sigue la declaración de la Asociación para la Investigación en Visión y Oftalmología (ARVO) para el uso de animales en la investigación oftálmica y de la visión. Los experimentos con roedores fueron aprobados y monitoreados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad de Columbia.
NOTA: Todos los experimentos utilizaron ratones machos de dos meses de edad que pesaban aproximadamente 20 g.
1. Preparación y administración de tamoxifeno para la ablación genética inducible de genes floxed
NOTA: El diámetro de los vasos retinianos puede ver....
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Resultados
El modelo de ratón RVO tiene como objetivo lograr con éxito oclusiones en las venas retinianas, lo que lleva a la lesión hipóxico-isquémica, ruptura de la barrera retiniana sanguínea, muerte neuronal y edema retiniano8. La Figura 1 muestra una línea de tiempo de pasos para garantizar la reproducibilidad, un esquema del diseño experimental y describe los pasos que se pueden optimizar aún más dependiendo de las preguntas experimentales. Los tres pasos principales que se.......
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Discusión
El modelo RVO de ratón proporciona una vía para comprender mejor la patología de RVO y probar posibles terapias. Si bien el modelo RVO del ratón se usa ampliamente en el campo, existe la necesidad de un protocolo detallado actual del modelo que aborde su variabilidad y describa la optimización del modelo. Aquí, proporcionamos una guía con ejemplos de la experiencia sobre lo que se puede alterar para obtener los resultados más consistentes en una cohorte de animales experimentales y proporcionar datos confiables.
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el Programa de Becas de Investigación de Posgrado de la Fundación Nacional de Ciencias (NSF-GRFP) DGE - 1644869 (a CCO), el Instituto Nacional del Ojo (NEI) 5T32EY013933 (a AMP) y el Instituto Nacional sobre el Envejecimiento (NIA) R21AG063012 (a CMT).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Carprofeno | Rimadyl | NADA #141-199 | mantener a 4 & deg; C |
| Aceite | de maíz Sigma-Aldrich | C8267 | |
| Cable de conexión de fibra | Thor Labs | M14L02 | |
| GenTeal | Alcon | 00658 06401 | |
| Clorhidrato de ketamina | Henry Schein | NDC: 11695-0702-1 | |
| Lasercheck | Coherente | 1098293 | |
| Fenilefrina | Akorn | NDCL174478-201-15 | |
| Phoneix Micron IV con Meridian, StreamPix, y módulos OCT | Phoenix Technology Group | ||
| Clorhidrato de proparacaína | Akorn | NDC: 17478-263-12 | mantener en 4 ° C |
| Refresh | Allergan | 94170 | |
| Rosa Bengala | Sigma-Aldrich | 330000-5G | |
| Tamoxifeno | Sigma-Aldrich | T5648-5G | |
| Tropicamida | Akorn | NDC: 174478-102-12 | |
| Xilacina | Akorn | NDCL 59399-110-20 |
Referencias
- Song, P., Xu, Y., Zha, M., Zhang, Y., Rudan, I. Global epidemiology of retinal vein occlusion: a systematic review and meta-analysis of prevalence, incidence, and risk factors. Journal of Global Health. 9 (1), 010427(2019).
- Ehlers, J. P., Fekrat, S.
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Reimpresiones y permisos
