Este estudio describe la medición directa de la producción hepática de glucosa en un modelo de ratón con síndrome de ovario poliquístico mediante el uso de un trazador de glucosa isotópico estable a través de la vena de la cola en estados de ayuno y ricos en glucosa en tándem.
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Artículo de método
Evaluación de la producción hepática de glucosa en un modelo de ratón con síndrome de ovario poliquístico
En este artículo
Resumen
Resumen
El síndrome de ovario poliquístico (SOP) es una enfermedad común que produce trastornos del metabolismo de la glucosa, como la resistencia a la insulina y la intolerancia a la glucosa. El metabolismo desregulado de la glucosa es una manifestación importante de la enfermedad y es la clave de su patogénesis. Por lo tanto, los estudios que involucran la evaluación del metabolismo de la glucosa en el SOP son de suma importancia. Muy pocos estudios han cuantificado la producción hepática de glucosa directamente en modelos de SOP utilizando trazadores de glucosa no radiactivos. En este estudio, discutimos las instrucciones paso a paso para la cuantificación de la tasa de producción de glucosa hepática en un modelo de ratón con SOP midiendo el enriquecimiento M+2 de [6,6-2H2]glucosa, un trazador de glucosa isotópico estable, mediante cromatografía de gases - espectrometría de masas (GCMS). Este procedimiento implica la creación de una solución trazadora de glucosa isotópica estable, el uso de la colocación del catéter de la vena de la cola y la infusión del marcador de glucosa en estados de ayuno y ricos en glucosa en el mismo ratón en tándem. El enriquecimiento de [6,6-2H2]glucosa se mide utilizando el derivado del pentaacetato en GCMS. Esta técnica se puede aplicar a una amplia variedad de estudios que implican la medición directa de la tasa de producción hepática de glucosa.
Introducción
El síndrome de ovario poliquístico (SOP) es un trastorno frecuente que ocurre en el 12%-20% de las mujeres en edad reproductiva1,2. Es una enfermedad compleja que da lugar a fenotipos variables que involucran ovarios poliquísticos, menstruaciones irregulares y evidencia clínica o de laboratorio de hiperandrogenemia, y generalmente se diagnostica cuando una mujer cumple con dos de los tres criterios3. Un aspecto predominante del SOP, y un factor clave en su patogénesis, son los trastornos metabólicos que se encuentran en las mujeres que tienen la enfermedad. Las mujeres con SOP tienen un....
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Protocolo
Todos los procedimientos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) del Baylor College of Medicine.
1. Preparación de [6,6-2H2]glucosa
- Un día antes del procedimiento, prepare el marcador de glucosa de isótopos estables en solución salina normal. Para este experimento, se utilizó [6,6-2H2]glucosa como marcador para medir la tasa de aparición de glucosa en plasma.
NOTA: En este experimento, se midió la producción de glucosa durante el ayuno y las condiciones ricas en glucosa, por lo que el isótopo de glucosa se preparó....
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Resultados
Utilizando ecuaciones de dilución de isótopos previamente descritas, la tasa total de glucosa plasmática (glucoseRa) se calculó a partir del enriquecimiento M+2 de [6,6-2H2]glucosa en condiciones de ayuno y ricas en glucosa utilizando el derivado pentaacetato21. En condiciones de estado estacionario, se supone que la tasa de aparición de glucosa es igual a la tasa de desaparición de glucosa. En el grupo control, la glucosaRa total fue de 19,98 ± 2,53 mg/.......
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Discusión
La hiperglucemia y el metabolismo/homeostasis anormal de la glucosa son características del SOP. El nivel de glucosa en sangre se mantiene mediante una combinación de glucosa de la dieta y la producción de glucosa a través de la glucogenólisis y la gluconeogénesis y la glucogénesis, bajo el control de la hormona y las enzimas. La producción hepática de glucosa se suprime por la presencia de un aumento de los niveles de glucosa circulante. En los trastornos del metabolismo anormal de la glucosa, la regulación de .......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por becas de capacitación del Departamento de Obstetricia y Ginecología, Baylor College of Medicine (ALG) y la subvención de investigación R-01 (Subvención # DK114689) para CSB, SC y JM de los Institutos Nacionales de Salud.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Solución de cloruro de sodio al 0,9 % | McKesson | 275595 | |
| 10 mL BD Jeringa con punta Luer-Lok | VWR | 75846-756 | Dos jeringas por animal (una para solución isotópica de glucosa y otra para solución isotópica rica en glucosa) |
| Cinta transpora transparente de 1 pulgada | 3M | 70200400169 | |
| Cinta de etiquetado de 1 pulgada | La marca Fisher | GS07F161BA | es un ejemplo |
| Jeringa de 5 mL que contiene solución salina heparanizada | McKesson | 191-MIH-2235 | También se puede preparar una solución de lavado de heparina (10 unidades/mL de heparina en cloruro de sodio al 0,9%) |
| 5 mm Lancetas para animales Medipoint Goldenrod | Fisher Scientific | NC9891620 5 mm si el animal tiene entre 2 y 6 meses | |
| Acetona | Sigma-Aldrich | 650501 | |
| Agitador de placa calefactora avanzado | VWR | 97042-602 | La marca es ejemplo |
| Agujas BD calibre 27 de 0,5 pulgadas Health | Warehouse | A283952 | |
| Agujas BD 30 calibre 0,5 pulgadas | Medvet | 305106 | |
| BD Intramedic Tubo de polietileno (PE) 0,28 mm ID x 0,61 mm | VWR | 63019-004 | |
| BD Intramedic Tubo de polietileno (PE) 0,28 mm ID x 0,61 mm | VWR | 63019-004 | |
| Vaso de precipitados, 1000 mL | Cualquier marca | ||
| Pellets | |||
| Viales de vidrio transparente VOA con tapa cerrada | Fisher Scientific | 05-719-120 | Para el almacenamiento de acetona y muestras de extracción de sangre |
| Abrazadera de cocodrilo sin dientes de cobre para torniquete | Amazon | Any Brand; pinzas de cocodrilo lisas y desdentadas hechas de cobre sólido | |
| D-(+)-glucosa >99.5% | Sigma-Aldrich | G8270 | |
| D-glucosa (6,6-D2, 99%) | Cambridge Isotope Laboratories, Inc. | DLM-349-PK | |
| Tubo silástico Dow Corning de 0,3 mm de diámetro interno x 0,64 mm de diámetro exterior | VWR | 62999-042 | |
| Luna | Amazon | de cualquier marca; similar a LANCOSC Lupa con luz y soporte | |
| Microbalanza | Ohaus Adventurer Pro | AV264C | Se puede utilizar cualquier modelo similar con una precisión de 0,0001 g |
| Frasco Nalgene, 500 mL | Sigma-Aldrich | B0158-12EA | O cualquier marca similar; sierra por la mitad (incluida la tapa) y corte una muesca del tamaño de una cola en la parte inferior |
| Bomba de jeringa múltiple PHD Ultra | Aparato Harvard | 70-3024A | |
| plexiglás | Cualquier marca; para estabilizar al ratón durante la inserción del catéter | ||
| Láminas y divisores | Cualquier marca; se utiliza para enjaular ratones durante la infusión |
Referencias
- March, W. A., et al. The prevalence of polycystic ovary syndrome in a community sample assessed under contrasting diagnostic criteria. Human Reproduction. 25 (2), 544-551 (2009).
- Yildiz, B. O., et al.
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Reimpresiones y permisos
