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Artículo de método

Modelo de perforación endovascular para hemorragia subaracnoidea combinada con resonancia magnética (IRM)

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DOI:

10.3791/63150

16 de diciembre de 2021

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Aquí presentamos un modelo estandarizado de ratón SAH, inducido por perforación de filamento endovascular, combinado con imágenes de resonancia magnética (MRI) 24 h después de la operación para asegurar el sitio de sangrado correcto y excluir otras patologías intracraneales relevantes.

Resumen

El modelo de perforación de filamento endovascular para imitar la hemorragia subaracnoidea (HSA) es un modelo de uso común, sin embargo, la técnica puede causar una alta tasa de mortalidad, así como un volumen incontrolable de HSA y otras complicaciones intracraneales como accidente cerebrovascular o hemorragia intracraneal. En este protocolo, se presenta un modelo estandarizado de ratón SAH, inducido por perforación de filamento endovascular, combinado con imágenes de resonancia magnética (MRI) 24 h después de la operación para asegurar el sitio de sangrado correcto y excluir otras patologías intracraneales relevantes. Brevemente, los ratones C57BL/6J son anestesiados con una inyección intraperitoneal de ketamina/xilazina (70 mg/16 mg/kg de peso corporal) y colocados en posición supina. Después de la incisión del cuello en la línea media, se exponen la arteria carótida común (CCA) y la bifurcación carotídea, y se inserta una sutura de polipropileno monofilamento no absorbible 5-0 de manera retrógrada en la arteria carótida externa (ECA) y se avanza hacia la arteria carótida común. Luego, el filamento se invagina en la arteria carótida interna (ICA) y se empuja hacia adelante para perforar la arteria cerebral anterior (ACA). Después de la recuperación de la cirugía, los ratones se someten a una resonancia magnética de 7.0 T 24 h más tarde. El volumen de sangrado se puede cuantificar y clasificar a través de una resonancia magnética postoperatoria, lo que permite un grupo experimental robusto de HSA con la opción de realizar análisis de subgrupos adicionales basados en la cantidad de sangre.

Introducción

La hemorragia subaracnoidea (HSA) es causada por la ruptura de un aneurisma intracraneal y plantea una emergencia potencialmente mortal, asociada con una morbilidad y mortalidad sustanciales, que representan aproximadamente el 5% de los accidentes cerebrovasculares 1,2. Los pacientes con HSA presentan cefaleas severas, disfunción neurológica y alteración progresiva de la conciencia3. Alrededor del 30% de los pacientes con HSA mueren dentro de los primeros 30 días después del evento hemorrágico inicial4. Clínicamente, el 50% de los pacientes experimentan lesión ce....

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Protocolo

Los experimentos se realizaron de acuerdo con las directrices y regulaciones establecidas por Landesamt fuer Gesundheit und Soziales (LaGeSo), Berlín, Alemania (G0063/18). En este estudio, se utilizaron ratones machos C57Bl / 6J (8-12 semanas de edad) con un peso de 25 ± 0.286 g (promedio de ± s.e.m.).

1. Preparación animal

  1. Inducir la anestesia inyectando ketamina (70 mg/kg) y xilazina (16 mg/kg) por vía intraperitoneal. Mantener la temperatura corporal normal, contribuyendo a la rápida inducción de la anestesia profunda. Pruebe la sedación adecuada con un estímulo de dolor, como un pellizco en el dedo del pie, y ....

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Resultados

Mortalidad
Para este estudio, un total de 92 ratones machos C57Bl/6J de entre 8 y 12 semanas de edad fueron sometidos a una operación de HSA; en estos, observamos una tasa de mortalidad global del 11,9% (n = 12). La mortalidad ocurrió exclusivamente dentro de las primeras 6-24 h después de la cirugía, lo que sugiere la mortalidad perioperatoria, así como el sangrado de HSA en sí mismo como los factores contribuyentes más probables.

Grado de sangrado de HSA<.......

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Discusión

En resumen, un modelo estandarizado de ratón de HSA inducido por operación de perforación de filamento endovascular se presenta con invasión menor, tiempo quirúrgico corto y tasas de mortalidad aceptables. La resonancia magnética se realiza 24 h después de la operación para asegurar el sitio de sangrado correcto y la exclusión de otras patologías intracraneales relevantes. Además, se clasificaron diferentes grados de sangrado de HSA y se midieron los volúmenes de sangrado, lo que permitió realizar análisis de subgrupos a.......

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Divulgaciones

Sin conflictos de intereses

Agradecimientos

SL fue apoyado por el Consejo chino de Becas. KT fue apoyado por la beca BIH-MD del Instituto de Salud de Berlín y la Sonnenfeld-Stiftung. RX cuenta con el apoyo del Programa de Científicos Clínicos de BIH-Charité, financiado por la Charité -Universitätsmedizin Berlin y el Instituto de Salud de Berlín. Agradecemos el apoyo de la Fundación Alemana de Investigación (DFG) y el Fondo de Publicación de Acceso Abierto de Charité - Universitätsmedizin Berlin.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Crema para el contorno de ojosBayer815529836Bepanthen
Software de análisis de imágenesImageJIncluido con Java 1.8.0_172
Sutura de ligadura (5-0)SMISilk negro USP
Fuente de luz para microscopioZeissCL 6000 LED
KetaminaCP-pharma797-037100 mg/mL
MRIBrukerPharmascan 70/16  7
imágenes de resonancia magnética de Tesla software adquiridoBrukerBruker Paravision 5.1
Paracetamol (40 mg/mL)bene Arzneimittel4993736
Filamento Prolene (5-0)ErhiconEH7255
NavajaWellaHS61
Instrumento quirúrgico (Tijeras finas)FST14060-09
Instrumental quirúrgico (pinzas#1)AESCULAPFM001R
Instrumental quirúrgico (pinzas#2)AESCULAPFD2855R
Instrumental quirúrgico (pinzas#3)HammacherHCS 082-12
Instrumental quirúrgico (Portaagujas)FST91201-13
Instrumental quirúrgico (Tijeras de resorte Vannas)FST15000-08
MicroscopioquirúrgicoZeissStemi 2000 C
Monitoreo de ventilaciónStony BrookMonitoreo de animales pequeños & Sistema de compuerta
Sutura de herida(4-0)ErhiconCB84D
XylavetCP-pharma797-06220 mg/mL

Referencias

  1. Macdonald, R. L., Schweizer, T. A. Spontaneous subarachnoid haemorrhage. The Lancet. 389 (10069), 655-666 (2017).
  2. van Gijn, J., Kerr, R. S., Rinkel, G. J. Subarachnoid haemorrhage. The Lancet. 369 (9558), 306-318 (2007).
  3. Abraham, M. K., Chang, W. -T. W.

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Modelo de HSA en ratonesinserci n de filamentoarteria car tidaRM ponderada en T2gradaci n de la HSAcuantificaci n del volumen del sangradohemorragia intracraneal