El endotelio es una estructura dinámica integrada que desempeña un papel importante en muchas funciones fisiológicas como la angiogénesis, la hemostasia, la inflamación y la homeostasis. El endotelio también juega un papel importante en fisiopatologías como la aterosclerosis, la hipertensión y la diabetes. Las células endoteliales forman el revestimiento interno de los vasos sanguíneos y linfáticos y muestran heterogeneidad en estructura y función. Varios grupos han evaluado la funcionalidad de las células endoteliales derivadas de la sangre periférica humana con un enfoque en las células progenitoras endoteliales derivadas de células madre hematopoyéticas o células endoteliales maduras de crecimiento sanguíneo (o células formadoras de colonias endoteliales). Estas células proporcionan un recurso autólogo para la terapéutica y el modelado de enfermedades. Las células xenogénicas pueden proporcionar una fuente alternativa de terapéutica debido a su disponibilidad y homogeneidad logradas mediante el uso de animales genéticamente similares criados en condiciones similares. Por lo tanto, se ha presentado un protocolo robusto para el aislamiento y la expansión de células endoteliales de crecimiento sanguíneo altamente proliferativo de sangre periférica porcina. Estas células se pueden utilizar para numerosas aplicaciones, como ingeniería de tejidos cardiovasculares, terapia celular, modelado de enfermedades, detección de fármacos, estudio de la biología de las células endoteliales y cocultivos in vitro para investigar las respuestas inflamatorias y de coagulación en el xenotrasplante.
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Artículo de método
Caracterización de células endoteliales de crecimiento sanguíneo (BOEC) de sangre periférica porcina
En este artículo
Resumen
Introducción
El endotelio es una estructura altamente compleja y dinámica y un componente vital de la pared vascular. Recubre la superficie interna de los vasos sanguíneos para proporcionar una interfaz física entre la sangre circulante y los tejidos circundantes. Se sabe que esta estructura heterogénea realiza diversas funciones como angiogénesis, inflamación, vasoregulación y hemostasia 1,2,3,4. Las células endoteliales de la vena umbilical humana son un tipo de célula ampliamente estudiado para evaluar la funcionalidad de las células endoteliales. Sin....
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Protocolo
Todos los estudios en animales fueron aprobados por los respectivos Comités Institucionales de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) en el Colegio Médico de Wisconsin y Mayo Clinic.
NOTA: En este estudio, se utilizaron cerdos domésticos cruzados Yorkshire/Landrace/Duroc (Sus domesticus), machos y hembras, 40-80 kg, 3-6 meses de edad.
1. Recolección de sangre periférica porcina
- Preparar materiales.
- Diluir la solución de heparina a 100 U/ml en solución salina estéril.
- Agregue 3-4 ml de solución de heparina a cada uno de los dos tubos cónicos de 50 ml y dos jeringas ....
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Resultados
La morfología de las células cultivadas se observó desde el inicio del cultivo hasta que se observaron colonias BOEC (Figura 1). Una población más pequeña de células adherentes comenzó a adherirse a las placas de cultivo y crecer, mientras que las células no adherentes se eliminaron con cambios en el medio de cultivo (Figura 1B). Las colonias aparecieron por primera vez el día 6 como una colección de células endoteliales que proliferan radialmente hacia afuera d.......
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Discusión
Los BOEC son una poderosa herramienta que puede ser utilizada en diversos enfoques científicos y terapéuticos 7,8,16. Los BOEC se han utilizado para analizar la expresión génica de la CE para dilucidar los factores clave responsables del desarrollo de enfermedades vasculares y cáncer 5,19,20,21. Los BO.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores desean reconocer la financiación de NIH / NHLBI R00 HL129068.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Aguja de 19 G | Covidien | 1188818112 | |
| tubos cónicos de 50 mL | Corning | 352098 | |
| placa de 6 pocillos | BD Falcon | 353046 | |
| jeringas de 60 mL | Covidien | 8881560125 | |
| Solución de cloruro de amonio (0,8%) | Stemcell Technologies | 07850 | |
| Solución antibiótica/antimicótica (100x) | Gibco | 15240-062 | |
| Centrífuga | Thermo Scientific | 75-253-839 | |
| EGM-2 medio | de cultivo Lonza Walkersville | CC-3162 | |
| Tubo de extensión | Hanna Pharmaceutical Supply Co. | 03382C6227 | |
| Suero fetal bovino (FBS) | Atlas Biologicals | F-0500-A | |
| Ficoll-Paque 1077 | Cytiva | 17144003 | Solución de gradiente de densidad |
| Heparina sódica inyectable (1.000 unidades/mL) | Pfizer | 00069-0058-01 | |
| Fibronectina plasmática humana | Gibco | 33016-015 | |
| Ice | N/A | N/A | |
| Solución salina tamponada con fosfato (PBS) | Gibco | 10010-023 | |
| Juego de pipetas | Eppendorf | 2231300004 | |
| Agua estéril | Gibco | 15230-162 | |
| Pipeta fina | Celltreat Scientific | 229280 |
Referencias
- Aird, W. C. Phenotypic heterogeneity of the endothelium: II. Representative vascular beds. Circulation Research. 100 (2), 174-190 (2007).
- Aird, W. C. Phenotypic heterogeneity of the endothelium: I. Structure, function, and mechanisms....
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Reimpresiones y permisos
